HIBRIDIZACAO - RELATORIO DE PRATICA VIRTUAL

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CENTRO UNIVERSITÁRIO LEONARDO DA VINCI 
NÚCLEO DE EDUCAÇÃO A DISTÂNCIA - NEAD 
RELATÓRIO DE PRÁTICA VIRTUAL 
 
IDENTIFICAÇÃO 
1. Acadêmico: BÁRBARA HELENA BARBOSA GOMES DA SILVA 
2. Matrícula: 5436124 
3. Curso: FARMÁCIA 4. Turma: FLC89996BFR 
5. Disciplina: GENÉTICA HUMANA E MÉDICA (17525) 
6. Tutor(a) Externo(a): LARISSA ALESSANDRA DA CUNHA HERREIRA 
 
DADOS DA PRÁTICA 
1. Título: HIBRIDIZAÇÃO 
2. Semestre: 2024/2 
3. Data: 23/09/2024 
 
INTRODUÇÃO 
A hibridização é uma técnica importante da biologia molecular, utilizada para detectar 
e identificar sequências específicas de DNA ou RNA. Esse processo envolve a união de 
duas fitas complementares de ácidos nucleicos, formando uma dupla hélice. A 
hibridização pode ocorrer entre uma sequência alvo em uma amostra e uma 
sequência complementar conhecida (sonda), que geralmente é marcada com um sinal 
visual, como fluorescência ou radioatividade. “A técnica de FISH baseia-se no uso de 
uma sequência de bases nitrogenadas (a qual chamamos de sonda ou, em inglês, 
probe) que é complementar ao DNA alvo que se pretende analisar. Assim, o termo 
hibridização refere-se à utilização dessa sonda contendo a sequência conhecida de 
nucleotídeos que é complementar a sequência de DNA que se deseja pesquisar.” 
(RIEGEL, 2014 APUD MAIORAL, 2020, P.163). 
 
OBJETIVOS 
 Identificar o padrão de distribuição da hibridização in situ fluorescente, da 
hibridização in situ fluorescente do tipo SKY e da hibridização genômica 
comparativa em cromossomos; 
 Identificar o padrão de distribuição da hibridização genômica comparativa de 
array em moléculas de DNA; 
 Realizar os experimentos de hibridização in situ fluorescente, hibridização 
genômica comparativa e hibridização genômica de array; 
 Identificar erros durante a realização do experimento. 
 
MATERIAIS 
 2x SSC; 
 Álcool a 70%, 90% e 100%; 
 Amostra DNA referência e DNA teste; 
 Berço lâmina; 
 Braçadeira metálica; 
 
 
 
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 Câmara úmida; 
 Chapa de aquecimento; 
 Estufa bacteriológica; 
 H2O destilada; 
 Hipoclorito de sódio; 
 Lâmina de vidro e Lamínula aCGH; 
 Micropipeta 10 ul; 
 Microscópio de fluorescência; 
 Notebook; 
 Óleo de imersão; 
 Pinça metálica; 
 Scanner; 
 Silicone; 
 Solução DAPI/antifade; 
 Solução de lavagem 1; 
 Solução de lavagem 2; 
 Sonda. 
 
METODOLOGIA 
1. SELECIONANDO O EXPERIMENTO 
Visualizou-se o menu numérico, de 1 e 2, dos métodos a serem realizados: 
Hibridização da sonda (Fish) e Método Array CGH (aCGH). 
 
HIBRIDIZAÇÃO DA SONDA 
2. SEGURANÇA DO EXPERIMENTO 
Higienizou-se as mãos na pia. Colocou-se os equipamentos de proteção 
individual (jaleco, luvas, óculos e máscara) localizados no armário de EPIs. 
3. PREPARANDO A LÂMINA 
Pipetou-se 5 ul da sonda na lâmina com o material fixado. Em seguida, 
colocou-se a lamínula e aplicou-se o silicone com a bisnaga. Levou-se a lâmina 
para chapa de aquecimento e ligou-se, deixando aquecer por 5 minutos. 
Retirou-se a lâmina da chapa, colocou-a na câmara úmida, foi levada para a 
estufa e incubou overnight. Retirou-se a câmara da estufa e a lâmina de dentro 
dela e, em seguida, retirou-se o silicone e lamínula com a pinça. 
4. REMOVENDO O EXCESSO DE SOLUÇÃO 
Foi colocado a lâmina dentro do berço e levou-se para a cuba contendo a 
solução 2 SSC. Incubou-se por 2 minutos. Depois moveu-se o berço para a cuba 
com água destilada e deixou incubando por 20 segundos. Em seguida, moveu-
se o berço para a cuba com 70%. Repetiu-se esse mesmo processo para o 
álcool 90% e 100%. 
5. VISUALIZANDO A LÂMINA NO MICROSCÓPIO 
Colocou-se a lâmina na banca e esperou-se secar. Em seguida, pipetou-se 10 
ul de DAPI na lâmina, colcou-se uma lamínula por cima, levou-se para o 
microscópio e observou-se até a objetiva de 100x e gotejou-se uma gota de 
 
 
 
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óleo de imersão para a objetiva de 100x. Ligou-se o notebook para concluir a 
observação. 
6. SELECIONANDO O EXPERIMENTO 
Visualizou-se o menu numérico, de 1 e 2, dos métodos a serem realizados: 
Hibridização da sonda e (Fish) e Método Array CGH (aCGH). 
 
MÉTODO ARRAY CGH (Acgh) 
7. SEGURANÇA DO EXPERIMENTO 
Higienizou-se as mãos na pia. Colocou-se os equipamentos de proteção 
individual (jaleco, luvas, óculos e máscara) localizados no armário de EPIs. 
8. MIX DAS AMOSTRAS 
Pipetou-se na lâmina: 10 ul da amostra de DNA referência e 10 ul da amostra 
de DNA teste. 
9. HIBRIDIZAÇÃO 
Levou-se a lâmina para a braçadeira de fixação, colocou a lamínula e fechou-
se a braçadeira. Moveu-se a braçadeira para o agitador e ligou-o e deixando a 
amostra por 24 horas. 
10. REMOÇÃO DO EXCESSO DA AMOSTRA 
Retirou-se a braçadeira do agitador, a lâmina de dentro da braçadeira e 
colocou no berço. Levou-se o berço para a cuba contendo a solução de 
lavagem 1. Em seguida, levou-se para o agitador e deixou-se por 5 minutos. 
Depois moveu-se o berço para a cuba com solução de lavagem 2 e retornou-
se para o agitador deixando por 5 minutos a rotação de 20 rpm a 37°C. 
11. DETECÇÃO DA FLUORESCÊNCIA 
Retirou-se a cuba do agitador e o berço da cuba, colocou-se a lâmina na banca 
e esperou-se secar. O computador foi ligado, selecionou-se o ícone “Scanner 
array” e levou-se a lâmina para o scanner. 
12. AVALIANDO OS RESULTADOS 
As respostas encontram-se no tópico “resultados e discussões” deste 
relatório. 
 
RESULTADOS E DISCUSSÕES 
Os objetivos listados neste relatório foram alcançados e realizados com sucesso. 
 
1. QUAL A DIFERENÇA DO MÉTODO FISH PARA O ACGH? 
O método FISH utiliza sondas de DNA fluorescentes que se ligam a sequências 
específicas do DNA, permitindo a visualização direta das regiões alteradas. O 
aCGH utiliza microarranjos de DNA que contêm milhares de sondas, 
permitindo a detecção de alterações em várias regiões do genoma 
simultaneamente. 
2. QUAIS SÃO AS APLICAÇÕES PARA ESSES DOIS MÉTODOS? 
O aCHG é aplicado em investigações genéticas em crianças com anomalias 
congênitas e déficit cognitivo, pois é um método sensível que permite detectar 
um maior número de anomalidades cromossômicas, já o método FISH é muito 
 
 
 
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utilizada na clínica, tanto para detectar anomalias genéticas quanto somáticas, 
como a leucemia mieloide crônica. 
 
REGISTRO FOTOGRÁFICO 
Durante a prática realize 1 registro fotográfico em que você aparece executando a 
prática. Você pode tirar um selfie. 
 
 
 
 
 
 
REFERÊNCIAS 
MAIORAL, M.F. Genética humana e médica. Indaial: Uniasselvi, 2020.