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Prof.: Ricardo Bizogne Souto Email: ricardo.bizogne@ufba.br UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA – UFBA FACULADADE DE FARMÁCIA - DEPARTAMENTO DO MEDICAMENTO FARA 74 – MICROBIOLOGIA APLICADA À FARMÁCIA Microbiologia Aplicada a Produtos Farmacêuticos, Correlatos e Cosméticos Referências bibliográficas: - Brasil. Farmacopeia Brasileira. ANVISA: Brasília, 2019. 2 v. - Controle biológico de qualidade de produtos farmacêuticos, correlatos e cosméticos. TEREZINHA DE JESUS A. PINTO, TELMA M. KANEKO, ANTÔNIO F. PINTO. Editora Atheneu. 4ª edição. 2015. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 5 1 2 3 4 6 5 7 6 7 MICROBIOLOGIA APLICADA À FARMÁCIA QUALIDADE DE PRODUTOS FARMACÊUTICOS, CORRELATOS E COSMÉTICOS MICROBIOLOGIA APLICADA À FARMÁCIA QUALIDADE MICROBIOLÓGICA LIMITES MICROBIANOS ✔Presença de Microrganismos ✔Carga Microbiana Produtos não estéreis X Produtos estéreis Prof.: Ricardo Bizogne Souto Email: ricardo.rs.sm@gmail.com UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA – UFBA FACULADADE DE FARMÁCIA - DEPARTAMENTO DO MEDICAMENTO FARA 74 – MICROBIOLOGIA APLICADA À FARMÁCIA Microrganismos Patogênicos e Indicadores de Contaminação em Produtos Farmacêuticos, Correlatos e Cosméticos PRESENÇA DE PATÓGENOS ✔PRIMÁRIOS ✔Capazes de desenvolver doenças sempre, mesmo se o indivíduo estiver saudável. ✔OPORTUNISTAS ✔Geralmente inofensivos em seu habitat normal (inclusive podem habitar o organismo humano). Se tornam patogênicos em determinadas condições apresentadas pelo hospedeiro. BASTONETES GRAM-NEGATIVOS Pseudomonas aeruginosa ✔Infecta trato urinário, feridas e queimaduras ✔Causa abcessos, septicemia, otite, infecção ocular e meningite ✔Bactéria comum no solo, água e ambientes naturais ✔Pode crescer em temperatura de refrigeração ✔Capaz de sintetizar grande número de enzimas ✔Habilidade para crescer em resíduos de sabão e antissépticos à base de quaternários de amônio ✔Resistente à maioria dos antibióticos BASTONETES GRAM-NEGATIVOS Pseudomonas aeruginosa Ágar Cetrimida BASTONETES GRAM-NEGATIVOS Família das ENTEROBACTÉRIAS ✔A maioria habita o trato intestinal do homem e de animais, porém podem ser encontradas na natureza (solo, água) ✔Algumas espécies constituem flora permanente ✔Outras estão presentes transitoriamente ou como agentes de enfermidades ✔A maioria fermenta glicose, lactose e outros carboidratos Ex.: Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Hafnia, Morganella, Proteus, Providencia, Salmonella, Serratia, BASTONETES GRAM-NEGATIVOS Família das Enterobactérias Salmonella sp. ✔Enterobactéria potencialmente patogênica ✔Habita o trato intestinal de gado bovino e aves domésticas ✔O tempo de sobrevivência na água e esgoto pode alcançar até 60 dias à temperatura de 20 a 30°C ✔Possui cerca de 2.000 sorotipos ✔Agente de gastroenterites ✔Dose infectante: 103 - 105 microrganismos ✔ Não constituem a flora normal humana ✔ Não fermenta lactose - LACTOSE (-) Salmonella sp. Ágar XLD BASTONETES GRAM-NEGATIVOS Família das Enterobactérias COLIFORMES TOTAIS ✔Bastonetes G-(-) aeróbicos ou anaeróbicos facultativos, não esporulados, capazes de crescer na presença de sais biliares ou agentes tensoativos e de fermentar lactose a 35-37°C, com produção de ácido, gás e aldeído em 48 h. ✔Podem ocorrer no meio ambiente, em águas com alto teor de material orgânico, solo ou vegetação em decomposição COLIFORMES TOTAIS ✔Considerados não patogênicos em condições normais, embora algumas cepas causem diarréia e infecções oportunistas no trato urinário ✔São considerados coliformes totais as bactérias que produzem a enzima β- galactosidase que promove a quebra da lactose em glicose e galactose ✔São detectáveis através do substrato ο-nitrofenil-β- D galactopiranosídeo (ONPG - amarelado) ✔Ex. Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella . COLIFORMES FECAIS OU TERMOTOLERANTES ✔Microrganismos do grupo coliforme, capazes de fermentar a lactose a 44-45°C ✔São representados principalmente pela E. coli e algumas bactérias dos gêneros Klebsiella, Enterobacter e Citrobacter ✔Só a E. coli é de origem exclusivamente fecal ✔E. coli é o único coliforme produtor da enzima β- glicuronidase ✔ É detectável através do substrato 4- metilumbeliferil-β-D- glicuronídeo (MUG – azul fluorescente) COLIFORMES MUG ONPG CARACTERÍSTICAS DE UM INDICADOR DE CONTAMINAÇÃO FECAL ✔Ser um microrganismo ou grupo de microrganismos presente em grandes quantidades nas fezes de humanos e animais de sangue quente. ✔Apresentar persistência na água e resistência a desinfetantes semelhante aos microrganismos patogênicos de veiculação hídrica. ✔Ser quantificável por métodos laboratoriais rápidos e simples. Classificação Gênero/Espécie Média (UFC/g) Primários Bacteroides Lactobacillus Escherichia coli Enterococcus 1010 109 108 108 Secundários Citrobacter Klebsiella Enterobacter Clostridium Staphylococcus Bacillus Leveduras Bolores 104 a 106 104 a 105 104 a 105 105 a 106 105 a 106 104 a 105 104 a 105 104 a 105 Raros Proteus / Providencia Pseudomonas aeruginosa 102 a 103 102 a 103 FLORA FECAL HUMANA BASTONETES GRAM-NEGATIVOS Escherichia coli ✔Não é considerado microrganismo patogênico primário ✔Algumas cepas produzem enterotoxinas ✔4 tipos são conhecidos como agentes etiológicos da diarréia humana: ⚫E. coli enteropatogênica clássica ⚫E. coli enteroinvasora ⚫E. coli enterotoxigênica ⚫E. coli enterohemorrágica – citotoxina produzida pela E.coli O157: H7 BASTONETES GRAM-NEGATIVOS Escherichia coli ✔Indicador de contaminação fecal ✔Causa comum de infecções do trato urinário ✔Produz proteínas chamadas bacteriocinas que ajudam a manter o equilíbrio ecológico das bactérias intestinais ✔Dose infectante: 106 - 109 microrganismos Escherichia coli ágar MacConkey BASTONETES GRAM-NEGATIVOS ENDOTOXINAS BACTERIANAS ✔Lipopolissacarídeos (LPS) associados à membrana externa de bactérias Gram-(-) ✔1ng de endotoxina/Kg de peso por via endovenosa produz reação pirogênica no homem e em coelhos ✔Produtos injetáveis contaminados com endotoxinas acima do limite estabelecido desencadeiam reação pirogênica e choque COCOS GRAM-POSITIVOS Staphylococcus aureus ✔ Suporta alta pressão osmótica e baixa umidade ✔ Cresce e sobrevive em secreções nasais ✔ Produz coagulase, enzima que forma coágulos de fibrina no sangue ✔ Produz exotoxinas associadas a diversas síndromes ✔ Desenvolve alta resistência a antimicrobianos ✔ Infecta feridas cirúrgicas COCOS GRAM-POSITIVOS Staphylococcus aureus ✔ TSCT - Síndrome do Choque Tóxico ✔ Enterotoxina - Infecção Alimentar ✔Toxina exfoliativa - Síndrome Exfoliativa da Pele ✔Toxinas alfa e delta – destroem células humanas ✔Leucocidina - destrói leucócitos e fagócitos ✔ Coagulase - coagula o plasma ✔Foliculite ✔ Infecção hospitalar COCOS GRAM-POSITIVOS Staphylococcus aureus Sal Manitol, Baird Parker, Vogel - Johnson BASTONETES GRAM-POSITIVOS Clostridium sp. ✔ Anaeróbios obrigatórios ✔ Células de 3 a 8µ contendo endosporos ✔ Presentes no solo e trato intestinal do homem e animais domésticos ✔ Termorresistentes a 80° C ✔ Catalase – negativos ✔ Produzem toxinas extremamente potentes ✔Produzem colagenase Clostridium perfringens ✔Infecta ferimentos profundos e tecidos necrosados ✔Produz a toxina alfa que destrói as células adjacentes no tecido infectado causando a GANGRENA GASOSA ✔ Produz uma enterotoxina responsável por intoxicação alimentar em adultos BASTONETES GRAM-POSITIVOS BASTONETES GRAM-POSITIVOS Clostridium tetani ✔Produz uma neurotoxina – Tetanospasmina ✔130µg de tetanospasmina pode levar um adulto a óbito ✔Atua no SNC inibindo o relaxamento muscular e causando a PARALISIA RÍGIDA Clostridium botulinum ✔Produz neurotoxinas – Toxina Botulínica (substância natural mais tóxica conhecida) que atua na junção neuromuscular interrompendo a liberação de acetilcolina, inibindo a contração muscular:PARALISIA FLÁCIDA ✔ Enterotoxina responsável por intoxicação alimentar em adultos PARALISIA RÍGIDA PARALISIA FLÁCIDA BOLORES E LEVEDURAS Candida albicans ✔Fungo unicelular não filamentoso de células esféricas ou ovaladas ✔Se reproduz por brotamento e forma pseudohifas ✔Adere ao epitélio humano na forma de levedura e exige pseudohifas para invadir tecidos profundos ✔Habita a microbiota normal humana ✔Patógeno oportunista ✔Agente de infecções cutâneomucosas e sistêmicas BOLORES E LEVEDURAS Candida albicans MICOTOXINAS ✔Metabólitos secundários da biossíntese fúngica, com elevada toxicidade para humanos e animais, em pequenas quantidades ✔Associadas a fungos toxigênicos dos gêneros Aspergillus, Fusarium , Penicillium ✔A presença de contaminação fúngica por longos períodos de estocagem, pode oferecer condições adequadas ao desenvolvimento do fungo e à produção de micotoxinas ✔ Vias de exposição à micotoxinas : 🗉 Ingestão de prod. contaminados; Via dérmica; Via inalatória ✔A exposição a micotoxinas pode produzir efeitos carcinogênicos, mutagênicos, teratogênicos e imunossupressores MICOTOXINAS MICOPLASMAS ✔Menores organismos procarióticos , considerados parasitas, com capacidade de autorreplicação ✔Bactérias sem parede celular, de formas e tamanhos variáveis ( 0,2 – 0,3µ), não se coram pelo Gram ✔Patogênicos para animais e plantas ✔No homem colonizam o revestimento epitelial dos tratos respiratório e urogenital ✔Contaminantes frequentes em culturas de células e tecidos ✔Sua presença não produz turbidez nos meios de cultura nem alterações celulares visíveis MICOPLASMAS
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