Relatorio de Bioquimica Cinética Enzimatica

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE PELOTAS - UFPEL
INSTITUTO DE QUÍMICA E GEOCIÊNCIAS - DPTº DE BIOQUÍMICA I
GRADUAÇÃO EM MEDICINA
DISCIPLINA DE BIOQUÍMICA I
NARA LUISA ALVES DE SOUZA
THAINÁ SANTOS FARIA
THAYNÁ ANGELO DOS REIS
RELATÓRIO DA AULA PRÁTICA: CINÉTICA ENZIMÁTICA 
PELOTAS 
2025
SUMÁRIO
1- RESULTADO E DISCUSSÃO
1. RESULTADOS E DISCUSSÃO
1.1 Efeito da variação da concentração da enzima
Com o propósito de analisar o impacto da variação na concentração da enzima, procedeu-se ao ajuste dos dados apresentados na Tabela 1.
Tabela 1 – Efeito da Variação da Concentração da Enzima
	TUBO
	Concentração da Enzima
(mg/mL)
	Absorbância
	1
	0
	0
	2
	0,1
	0,063
	3
	0,2
	0,235
	4
	0,4
	0,517
	5
	0,8
	0,892
	6
	1
	1,231
Com base nos dados apresentados na Tabela 1, foi viabilizado o ajuste correspondente, cuja representação gráfica pode ser observada na Figura 1.
A análise da Figura 1 permite inferir que a absorbância se eleva proporcionalmente ao aumento da concentração da enzima, evidenciando, portanto, uma relação direta entre esses dois parâmetros. Dessa forma, à medida que a quantidade de enzimas no meio se eleva, há um incremento na presença de agentes redutores, o que resulta em uma maior formação do produto. Esse fenômeno ocorre devido à ação catalítica da enzima invertase, que promove a hidrólise da sacarose, gerando glicose e frutose.
O acréscimo na absorbância pode ser atribuído ao aumento da quantidade de produto formado, o que provoca um desvio na passagem da luz, influenciando diretamente os valores registrados pelo espectrofotômetro. Ademais, a confiabilidade do ajuste realizado é corroborada pelo coeficiente de correlação obtido (R² = 0,9921), o qual se apresenta extremamente próximo da unidade, indicando a elevada precisão do modelo adotado.
 Figura 1 – Gráfico Concentração de proteínas (mg/mL) x Absorbância
1.2 Efeito da Variação no Tempo de Incubação
Tabela 2 – Efeito da Variação no tempo de incubação
	TUBO
	Tempo de Incubação
(min)
	Absorbância
	1
	-
	-
	2
	0
	0,766
	3
	5
	0,904
	4
	10
	1,112
	5
	15
	1,570
Para analisar o efeito da variação no tempo de incubação, foram utilizados os dados da tabela 2 para plotar o gráfico tempo (min) em função x absorbância.
Pode-se constatar, por meio da Figura 2, que a elevação do tempo de incubação resulta em um incremento na absorbância, fenômeno que pode ser justificado pela maior concentração de glicose e frutose presentes no meio. A incubação propicia um ambiente com condições ideais para a proliferação microbiana, favorecendo a atividade enzimática e, consequentemente, a produção dos referidos monossacarídeos. Dessa forma, torna-se evidente a existência de uma correlação direta entre o tempo de incubação e a absorbância, reforçando a influência desse fator no comportamento do sistema analisado. O valor de R² =0,9265 indica que o modelo linear se ajusta bem aos dados, explicando 92% da variação da variável resposta.
 Figura 2 – Gráfico Tempo de Incubação (min) x Absorbância 
1.3 Efeito da variação do pH do tampão sobre a atividade enzimática
Tabela 3 - Efeito da variação do pH do tampão sobre a atividade enzimática
Para analisar o efeito da variação do pH do tampão sobre a atividade enzimática, foram utilizados os dados da tabela 3 para plotar o gráfico pH x absorbância.
O experimento sugere que a enzima comprovada apresenta maior atividade em pH ácido e reduz sua atividade em pH neutro ou alcalino. Isso pode ser característico de enzimas como a invertase, que atua na hidrólise da sacarose em meio ácido. Observa-se abaixo na figura 3.
Figura 3 – Gráfico variação do pH x Absorvância
1.4 - Efeito da variação da concentração do substrato
Tabela 4 - Efeito da variação da concentração do substrato
Para analisar o efeito da variação da concentração do substrato, foram utilizados os dados da tabela 4 para plotar o gráfico concentração de substrato x absorbância.
Observa-se na figura 4 abaixo, que a absorbância aumenta rapidamente com o aumento da concentração de substrato ([S]), atingindo um platô. A partir desse ponto, a absorção se estabiliza, indicando que a atividade enzimática atingiu um ponto de saturação.
Esse comportamento segue a cinética enzimática de Michaelis-Menten, em que:
🡪Em concentrações baixas de substrato, a atividade aumenta proporcionalmente à concentração de substrato.
🡪Em concentrações altas, a enzima atinge sua capacidade máxima (Vmax), pois todos os seus sítios ativos estão ocupados.
A estabilização da absorção sugere que a enzima atingiu sua velocidade máxima (Vmax) e a adição de mais substrato não aumenta mais a atividade.
Figura 4 – Gráfico da variação da Concentração do Substrato x Absorvância
QUESTÕES
1- Descreva ação enzimática da invertase. 
A invertase (sacarase ou β-frutosidase) é uma enzima que catalisa a sacarose em glicose e frutose. Esse processo ocorre por meio da quebra da ligação glicosídica entre os monossacarídeos, em meio aquoso. Essencial para a digestão e metabolismo de carboidratos em diversos organismos.
2- Como se pode determinar a concentração dos produtos da reação catalisada pela invertase? 
A concentração de glicose e frutose pode ser determinada por diversos métodos, incluindo:
Teste de DNS (ácido 3,5-dinitrossalicílico): Mede açúcares redutores, pois tanto a glicose quanto a frutose podem reduzir o reagent 3,5-dinitrosalicilato (de cor amarelo forte) a 3-amino-5-nitro-salicilato (de cor laranja-marrom forte) formando um complexo colorido que pode ser quantificado espectrofotometricamente.
3- Qual o Km obtido para a invertase? Qual o seu significado? 
O Km é a concentração de substrato na qual a velocidade da reação atinge metade da sua velocidade máxima (Vmax). O valor obtido para a invertase foi de aproximadamente 0,0004 mol/L, significando que a invertase tem alta afinidade pela sacarose, pois o Km indicou um valor baixo.
4- Qual o pH ótimo determinado para a invertase? Qual o seu significado? 
O pH ótimo da invertase geralmente está entre 4,5 e 5,5, a depender da fonte da enzima. Isso significa que a atividade enzimática é máxima nessa faixa de pH. Fora desse intervalo, a estrutura da enzima pode ser afetada, reduzindo sua eficiência devido à desnaturação ou alterações na interação com o substrato.
5- Que tipo de inibidor é a frutose? 
A frutose atua como um inibidor competitivo da invertase. Como a frutose é um dos produtos resultantes da catalisação da sacarose, ela pode competir pelo sítio ativo da enzima, reduzindo a taxa de conversão da sacarose sem afetar o Vmax (se houver acréscimo de sacarose, o efeito pode ser revertido). Isso demonstra um mecanismo típico de regulação, comum em vias metabólicas para evitar a superprodução de compostos.
6- De posse dos dados, calcular a atividade específica da invertase presente no extrato bruto de levedura.
1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	0	0.63600000000000001	1.67	1.9430000000000001	1.958	1.958	1.958	1.958	1.958	1.958	[S]
Absorbância
Efeito da Variação da Concentração da Enzima
Absorbância	
0	0.1	0.2	0.4	0.8	1	0	6.3E-2	0.23499999999999999	0.51700000000000002	0.89200000000000002	1.2310000000000001	Concentração da invertase (mg/mL)
Absorbância
Efeito da Variação no Tempo de Incubação
Absorbância	
0	5	10	15	0.76600000000000001	0.90400000000000003	1.1120000000000001	1.57	Tempo de Incubação
Absorbância
1	2	3	4	5	6	7	0	1.978	1.966	1.9690000000000001	1.889	1.78	1.4870000000000001	pH
Absorbância
image1.png
image2.png