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� Identificação de marcas genéticas específicas que podem ser encontradas no DNA da mãe, do filho e do suposto pai. � O exame de DNA para fins de identificação pessoal e determinação de paternidade � maior avanço do século na área forense � Determinar paternidade com absoluta confiabilidade � Disputas legais para pensão alimentícia e herança � Casos criminais : estupro, rapto, troca ou abandono de crianças � Análise do DNA � perfil de DNA � minissatélites (VNTRs -Variable Number of Tandem Repeats) e microssatélites (STR - Short Tandem Repeat) � Sequências curtas e hipervariáveis � regiões polimórficas � mais de um alelo por locus polimórficas � mais de um alelo por locus � sequências repetitivas de 1 a 4 pb com distribuição ao longo do genoma. � Herança Mendeliana (os filhos sempre recebem metade dos alelos de origem materna e metade de origem paterna). � Repetição de 1 base: � GTAAAAAAAAAAAAAAAGGAT � Repetição de 2 bases: � GTCACACACACACACACAGGAT (dinucleotídeo)� GTCACACACACACACACAGGAT (dinucleotídeo) � Repetição de 3 bases: � GTCACCACCACCACCACCACGGAT (trinucleotídeo) � Repetição de 4 bases: � GTCAGACAGACAGACAGAGGAT (tetranucleotídeo) � Com 12-20 VNTR’s, é possível obter perfis genéticos praticamente indivíduo-específicos (DNA Fingerprinting) * TÉCNICAS • RFLP (Restriction Fragment Lenght Polymorphism). • PCR (Polymerase Chain Reaction). � Sangue � padrão-ouro; � células epiteliais da mucosa oral: saliva, pontas de cigarro, selos e envelopes, gomas de mascar, copos, tampas de caneta mordidas;de mascar, copos, tampas de caneta mordidas; � Pêlos e fios de cabelo; � Unhas; � Esfregaços; � Manchas de material biológico: líquido seminal, urina, saliva, sangue; � Tecidos de biópsias cirúrgicas; � Ossadas (carbonizadas ou não); � Tecidos mumificados ou congelados; � Células deixadas por impressão digital; � Dentes; � outras � Princípio do método: após clivagem por endonucleases, cada indivíduo tem um padrão de bandas específico com tamanhos determinados pela bandas específico com tamanhos determinados pela presença, ou não, do sítio da enzima e pela quantidade de repetições em tandem. Para que se possa visualizar, esses fragmentos devem ser hibridizados a sondas radioativas de seqüência invariável. � Figura 3 - Inclusão de paternidade (RFLP) com sondas MS1, MS31, MS43 e MS621. Na coluna 1, 2 e 3 observam-se as bandas de DNA da mãe, do filho e do suposto pai, respectivamente. Facilmente detectamos as bandas maternas(M), presentes no filho, sendo que as bandas paternas (P) estão também presentes no investigado. Os marcadores de peso molecular encontram-se nas laterais � Exclusão de paternidade (RFLP) com sondas MS31, MS43, MS205 e G3 (RFLP). Na coluna 1, 2, e 3, observam-se as bandas de DNA da mãe, do filho e do suposto pai, respectivamente. Facilmente detectamos as bandas maternas (M), presentes no filho, sendo que as demais são obrigatoriamente de origem paterna. O investigado não apresenta essas últimas. A coluna 4 representa a mistura do DNA do filho e do suposto pai. O marcador de peso molecular encontra-se na lateral esquerda. � Investigação de troca em maternidade. Na coluna 1, pode-se observar o DNA de uma das crianças analisado com as sondas unilocais ( RFLP ) MS205, MS1, MS31 e G3. Na coluna 2, o DNA de uma das mães, casada com o possível pai com DNA presente na coluna 4. Na coluna 3, encontramos o DNA da mãe verdadeira, que não estava de posse da criança, podendo-se facilmente observar que uma das suas bandas está sempre presente na criança (coluna 1). O possível pai (coluna 4) e sua esposa (coluna 2) foram excluídos da paternidade e da maternidade por não apresentarem alelos ou bandas de DNA em comum com a criança (coluna 1). A probabilidade de maternidade para a mãe da coluna 3 foi de 99,9%. A outra criança estava desaparecida. � Vantagem sobre os VNTR: a amostra a ser analisada pode ter uma quantidade inicial de DNA muito menor. � Mesmo existindo contaminação por DNA de � Mesmo existindo contaminação por DNA de outras espécies, a técnica de PCR é específica o suficiente para amplificar apenas o DNA humano � Em casos de estupro, é possível também o congelamento do DNA vaginal, extraído após a violação, permitindo realizar o estudo comparativo com o DNA � Algumas pessoas solicitam o estudo de suas características imunogenéticas, procurando deixar documentada, em forma de laudo médico, sua individualidade molecular. Os estudos podem ser os de perfil do DNA de STR. � Características importantes: � Também contém regiões polimórficas que permitem a “individualização”; � Homens recebem apenas do pai � permite � Homens recebem apenas do pai � permite traçar a linhagem paterna de um homem; � Identificação de paternidade sem o pai (p/ filhos); � Elucidação de estupro (mistura de DNA); Não identifica um indivíduo específico;� Não identifica um indivíduo específico; � Estudos históricos ou evolutivos;
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