RELATÓRIO DE GRAM

Prévia do material em texto

RELATÓRIO REFERENTE À AULA PRÁTICA INTITULADA COMO 
“VERIFICAÇÃO DA PRESENÇA DE LACTOBACILOS VIVOS EM LEITE 
FERMENTADO POR COLORAÇÃO DE GRAM”, DA DISCIPLINA 
“MICROBIOLOGIA E IMUNOLOGIA; MÓDULO DE MICROBIOLOGIA GERAL”, 
MINISTRADA POR DÉBORA LEANDRO RAMA GOMES. 
O RELATÓRIO FOI FEITO POR ROBERTHA BACH BARRETO E GABRIELLA 
DE PAULO PAULA, ACADÊMICAS DO CURSO DE BACHAREL EM 
FARMÁCIA DO IFRJ – CAMPUS REALENGO. 
 
 
 
 
 
 
INTRODUÇÃO 
 
Os lactobacilos são bactérias anaeróbias do gênero facultativa, gram positiva, 
com formato de bastenete (bacilo), que convertem lactose e outros açúcares 
simples em ácido lático. Eles ajudam a prevenir infecções e doenças causadas 
por outras bactérias, não combatendo diretamente estes microorganismos 
prejudiciais, mas ajudam a reduzir sua proliferação através de seus antibióticos 
naturais, principalmente devido à competição por nutrientes. Os lactobacilos 
são inúmeros e se reproduzem muito rápido, desta forma, não permitem a 
sobra de nutrientes para as bactérias patogênicas. Quando ocorre um 
desequilíbrio na proporção entre bactérias saprófitas (ajudam a manter o 
intestino saudável) e patológicas (causadoras de doenças), manifesta-se um 
estado conhecido como disbiose. 
 
OBJETIVO 
Verificar a presença de lactobacilos vivos no leite fermentado, a fim de 
confirmar a formulação descrita na embalagem. 
 
MATERIAS E REAGENTES 
 Leite fermentado da marca “Yakult”; 
Para a realização da verificação, foram disponibilizados pelo Laboratório de 
Bases Biológicas do IFRJ Campus Realengo, os seguintes materiais: 
 Lâmina; 
 Alça bacteriológica de aço inox; 
 Bico de Bunsen; 
 Óleo de imersão; 
 Microscópio óptico; 
Para a realização da verificação, foram disponibilizados pelo Laboratório de 
Bases Biológicas do IFRJ Campus Realengo, os seguintes reagentes: 
 Cristal violeta 
 Lugol – Iodo 
 Álcool - acetona 
 Fucsina – safranina 
PROCEDIMENTOS E COLORAÇÃO DE GRAM 
Referencial teórico 
A coloração de Gram foi desenvolvida em 1884 pelo bacteriologista 
dinamarquês Hans Christian Gram, que é uma técnica de coloração para 
diferenciação de microorganismos através de cores, para serem observados ao 
microscópio ótico. O mecanismo da coloração de Gram se refere à composição 
da parede celular, sendo que as Gram positivas possuem uma espessa 
camada de peptideoglicano e ácido teicoco, e as Gram negativas, uma fina 
camada de peptideoglicano, sobre a qual se encontra uma camada composta 
por lipoproteínas, fosfolipídeos, proteínas e lipopolissacarídeos. 
 
Procedimento 
I) Utilizando a alça bacteriológica esterilizada por flambagem, esfregou-
se na lâmina, cerca de 20 μL do material Yakult, com movimentos 
circulares para que o material não fosse comprometido. 
 
II) Para a fixação do material, a lâmina é rapidamente passada no bico 
de Bunsen. 
 
III) Em seguida, corou-se a mesma com Cristal Violeta, deixando-o agir 
por um minuto. Terminado o tempo, a lâmina foi lavada com um filete 
de água corrente, na posição vertical. Esse processo resultou na cor 
roxa, porque os carboidratos da parede celular da bactéria se ligaram 
ao Cristal Violeta. 
 
 
IV) O próximo passo foi a utilização do Lugol, que também foi deixado 
agir por um minuto. O processo de lavagem foi repetido, resultando 
em um roxo mais escuro devido à presença do Lugol. 
 
 
V) Aplicou-se por 30 segundos o álcool-acetona, repetindo o processo 
de lavagem, resultando em uma cor mais clara, pela presença do 
álcool-acetona que “descolore” parcialmente a lâmina, devido à 
diminuição do diâmetro dos poros da camada de peptideoglicano da 
parede, e extração dos lipídeos. 
 
 
VI) Por último, foi aplicado por 45 segundos o contra corante Fuscina. 
Repetiu-se o processo de lavagem, resultando na cor rosa. 
 
 
RESULTADOS E DISCUSSÃO 
 
Não apareceu nenhum lactobacilo vivo na lâmina do Yakult. 
 
O resultado deveria ser: 
 
 
 
Na imagem acima, observada pelo microscópio óptico ampliado 1000 
vezes, tem-se a lâmina contendo lactobacilos vivos em forma de 
bastonete no leite fermentado Chamyto, da marca Nestlé. 
 
 
CONCLUSÃO 
 
Realizou-se a verificação de lactobacilos vivos no leite fermentado da 
marca “Yakult”, onde os mesmo não foram encontrados, contrariando 
o descrito no rótulo. Já no leite fermentado da marca “Chamyto, 
Nestlé”, obteve-se resultado positivo à presença dos lactobacilos 
vivos, confirmando a propaganda da empresa. 
 
 
BIBLIOGRAFIA E REFERÊNCIAS 
 
TORTORA, G.J.; FUNKE, B.R.; CASE, CL. Microbiologia. 10. ed., 
Porto Alegre: Artmed, 2010.