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16/04/2025 1 REPLICAÇÃO-TRANSCRIÇÃO Prof. Dr. Erik Saenz 2025 Replicação Transcrição Tradução Proteína Transcrição Reversa Replicação de RNA Dogma Central 16/04/2025 2 Replicação do DNA O mecanismo de replicação está baseado no pareamento das bases da dupla hélice do DNA. A estrutura do DNA contém a informação necessária para perpetuar sua sequência de bases Processo de biossíntese de DNA onde, a partir de uma molécula de DNA pré-existente formam-se duas moléculas filhas contendo uma das fitas da molécula mãe original. A Estrutura do DNA Fornece as Bases da Hereditariedade A cópia do material hereditário é possível graças a natureza complementar das fitas do DNA (pareamento de bases)... PROCESSO SEMICONSERVATIVO Cada dupla-hélice filha é composta de uma fita velha (conservada) e uma fita nova (recém-sintetizada) A replicação produz duas moléculas completas e idênticas a partir de uma molécula de DNA original 16/04/2025 3 Replicon: Unidade do DNA onde está ocorrendo um evento de replicação Replicon: 1. Cada cromossomo eucariótico constitue vários replicons e todos são ativados uma única vez no ciclo celular ainda que não simultaneamente Origem de Replicação Polimerases de DNA: As enzimas que sintetizam DNA A síntese de DNA ocorre pela adição de nucleotídeos a extremidade 3´OH da cadeia em crescimento. O precursor da síntese é o desoxiribonucleosídeo 5´trifosfato Sentido da síntese sempre é 5’ 3’ A replicação é um processo extremamente fiel. As DNA- polimerases tem atividade revisora 16/04/2025 4 Desoxiribonucleosídeo 5´trifosfato (precursor) Fita sendo polimerizada Fita molde Atividade revisora 3’ 5’ garante a fidelidade da replicação 16/04/2025 5 Proteínas presentes na origem de Replicação de E.coli DnaA Reconhece a origem e abre a dupla fita em sítios específicos DnaB (helicase) Desenrola o DNA DnaC Auxilia a ligação de DnaB na origem HU Proteína do tipo histona que estimula a iniciação Primase (DnaG) Sintetiza os primers de RNA Single strand binding (SSB) Liga a fita simples de DNA RNA polimerase Facilita a ação da DnaA DNA girase Alivia a tensão torsional gerada pela abertura da dupla-fita Dam Metilase Metila as sequências GATC na OriC SSB Liga a fita simples de DNA DnaB (helicase) Desenrola o DNA Primase (DnaG) Sintetiza os primers de RNA DNA Polimerase III Sintese da fita nova DNA Polimerase I Preenche as lacunas e excisa os primers DNA Ligase Liga os fragmentos DNA girase Superenrolamento O complexo de replicação A proteína DNA B (helicase) é responsável pelo movimento para frente da forquilha Cada core catalítico da DNA PolIII sintetiza uma das fitas-filhas A primase sintetiza os iniciadores Proteínas SSB mantem as fitas parentais separadas DNA girase (topoisomerase) retira o superenrolamento DNA Ligase. 16/04/2025 6 Resumindo... Uma maquinaria de replicação, que envolve proteínas e enzimas, sintetiza o novo DNA A DNA-polimerase é a enzima responsável pela polimerização do novo DNA A seqüência de nucleotídeos de uma nova fita do DNA é ditada pela fita molde As fitas novas são sintetizadas em direções opostas (contínua e descontínua) A polimerização sempre ocorre na direção 5` 3` Fragmentos são unidos e duas fitas contínuas são formadas Um primer de RNA é utilizado na síntese da nova fita (e posteriormente removido) Replicação Transcrição Tradução Proteína - Processo para síntese de todos os RNAs da célula - Reflete o estado fisiológico da célula - O conjunto de genes expressos em uma dada situação é variável - Processo catalisado pelas RNAs polimerases Transcrição Reversa Replicação de RNA Transcrição 16/04/2025 7 Principais Tipos de RNA RNA mensageiro (mRNA): contém a informação genética para a sequência de aminoácidos das proteínas RNA transportador (tRNA): identifica e transporta os aminoácidos até o ribossomo RNA ribossômico (rRNA): constituinte dos ribossomos DNA fita codificadora DNA fita molde RNA transcrito Transcrição 16/04/2025 8 Síntese de RNA: formação da ligação fosfodiester envolve o ataque nucleofílico do 3’ OH da cadeia crescente no fosfato do carbono 5´do ribonucleosídeo trifosfatado que será incorporado A RNA polimerase não requer um iniciador (primer) para iniciar a síntese do RNA Bolha de transcrição Fita molde RNA polimerase Direção da transcrição 5´ 3´ 16/04/2025 9 Requerem proteínas auxiliares: fatores de transcrição RNA polimerases de eucariotos RNA polimerase especifica vão sintetizar um RNA específico Início da Transcrição Reconhecimento e Ligação ao promotor Deslocamento da subunidade sigma 16/04/2025 10 Promotores de genes bacterianos Região -10Região -35 Posição +1 Promotores de genes transcritos pela RNApol II Tata Binding Protein Complexo TFIID 16/04/2025 11 Promotores de genes transcritos pela RNApol III e I: A TBP também é componente dos complexos de iniciação de transcrição destes promotores Proteínas necessárias para transcrição a partir de promotores reconhecidos pela RNA Pol II 16/04/2025 12 Genes eucarióticos são em geral interrompidos por introns 16/04/2025 13 Etapas para geração do transcrito maduro (hnRNA) Transcrição e adição do 5´ CAP Clivagem, splicing e poliadenilação (Calda de Poli-A) Splicing: remoção dos introns 16/04/2025 14 Poliadenilação: Adição da cauda poli (A) na extremidade 3´do hnRNA (transcrito primário): ~200 Adeninas Sequencia sinal para poliadenilação Etapas envolvidas na expressão de genes em eucariotosTranscrição Processamento Transporte Tradução Citoplasma Núcleo 16/04/2025 15 Prof. Dr. Erik Saenz TRADUÇÃO 2024 rRNA mRNA tRNA RNA ribossômico: Componentes da maquinaria de síntese de proteínas presente nos ribossomos. RNAr correspondem a 85 % do RNA total da célula, e são encontrados nos ribossomos (local onde ocorre a síntese protéica). Todas as formas de RNA são sintetizadas por enzimas (RNA polimerases) que obtêm informações em moldes de DNA. RNA mensageiro: Contêm a informação para a síntese de proteínas. RNAm representam cerca de 5% do RNA celular total. RNA transportador: Transporta aminoácidos para que ocorra a síntese de proteínas. RNAt correspondem a 10% do RNA total da célula, e são denominados de adaptadores. TIPOS DE RNA 16/04/2025 16 RNA RIBOSSÔMICO 50S 30S 70S 60S 40S 80S Eucariontes Procariontes RNA MENSAGEIRO 16/04/2025 17 -Estrutura secundária com grampos e alças formando um trevo -Alto número de bases modificadas depois da sua transcrição -Carregar os aminoácidos RNA TRANSPORTADOR • A ligação entre códon do RNAm e anticódon do RNAt é antiparalela; • O códon é lido de 5’ para 3’; o anticódon também deve ser lido de 5’ para 3’. Portanto a primeira base do códon pareia com a última base do anticódon; RECONHECIMENTO DOS CODÓNS PELO tRNA 16/04/2025 18 • Procariotos: Shine-delgarno (Ribosome Binding Site) • Eucariotos: Consenso de Kosak – hipótese do “scanning” pelo ribossomo – necessidade do 5’ CAP GCCRCCAUGG TRADUÇÃO Iniciação TRADUÇÃO Alongamento 16/04/2025 19 • Complexo protéico que auxilia na montagem da estrutura 3D de uma proteína TRADUÇÃO Chaperonas Código Genético • “Dicionário” → correspondência da sequencia de nucleotídeos levando à sequencia de aminoácidos; • Códon → 3 bases nucleotídicas no RNAm que codificam cada aminoácido (“palavra”); • Códon: – RNAm →A, G, C e U; – “escrita” da direção 5’ para 3’; – 64 combinações diferentes de bases;’ 16/04/2025 20 O código genético "padrão" AUG é também sinal de iniciação CÓDIGO GENÉTICO aminoácidos com quatro códons aminoácidos com seis códons aminoácidos com três códons aminoácidos com dois códons aminoácidos com um códon CÓDONS DE FINALIZAÇÃO: UAA,UGA e UAG indica o termino da sequência de aminoácidos e da proteina CÓDON DE INICIAÇÃO AUG: • indica ondea sequência de aminoácidos da proteína começa. •AUG codifica o aminoácido Metionina (Met) 16/04/2025 21 Acabou!