Imunocromatografia IgG e IgM para Toxoplasmose

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Imunocromatografia e IgM para Estácio Toxoplasmose Apresentação 1. OBJETIVO Neste experimento, você vai ver como é realizado o diagnóstico imunocromatográfico de e IgM para toxoplasmose na prática clínica. Estima-se que quase 50% da população esteja infectada cronicamente com o parasita causador dessa patologia. Assim, diagnóstico é fundamental em toda a população, mas especialmente para grupos de risco, como gestantes e pacientes imunodeprimidos. Nesse sentido, a sorologia de e IgM tem um bom nível de detecção de doença passada ou atual, respectivamente. Já a imunocromatografia possibilita a realização de um teste seguro e rápido, fornecendo um diagnóstico confiável para direcionar a conduta clínica. Ao final deste experimento, você deverá ser capaz de: entender o processo e o sistema de detecção qualitativa e diferencial de anticorpos anti-IgG e anti-IgM anti-Toxoplasma gondii (T. gondii); avaliar os resultados de testes imunocromatográficos com resultados rápidos; interpretar os resultados e correlacioná-los com doenças clínicas. 2. ONDE UTILIZAR ESSES CONCEITOS? Saber realizar a interpretação de ensaios cromatográficos para IgG e IgM, assim como conhecer suas limitações técnicas e significados clínicos, é pré-requisito para o desenvolvimento de competências e habilidades experimentais que possibilitam o diagnóstico de doenças como a toxoplasmose. Esse diagnóstico se faz especialmente útil na triagem de mulheres gestantes, uma vez que a toxoplasmose congênita traz sérias consequências ao bebê. teste possibilita, ainda, identificar se a infecção é recente ou não.3. EXPERIMENTO Neste experimento, você vai realizar teste de imunocromatografia para IgG/IgM de toxoplasmose. Você vai fazer a pipetagem da amostra para o kit de testagem e visualizar como se realiza esse teste rápido. 4. SEGURANÇA Nesta prática, serão utilizados luvas, máscara e jaleco, também chamado de guarda-pó. O manuseio de amostras possivelmente contaminadas por microrganismos como o Toxoplasma gondii, se respeitadas as recomendações das boas práticas laboratoriais e a utilização de equipamentos de proteção individual (EPIs), oferece pouco risco de contaminação. As luvas evitam contaminação com agentes nocivos à pele e microrganismos, a mascára protege contra possíveis aerossóis contaminados e o jaleco protege tronco, os membros superiores e parte dos membros inferiores de eventuais respingos que possam ocorrer. 5. CENÁRIO ambiente do experimento apresenta uma bancada livre com o kit e as amostras dispostos sobre ela, além de pipetas e caixas de ponteiras. Você vai selecioná-los e utilizá-los de modo a garantir a correta execução dos experimentos. Bons estudos.Sumário teórico IMUNOCROMATOGRAFIA DE IgG E IgM PARA TOXOPLASMOSE A toxoplasmose é uma parasitose causada pelo protozoário Toxoplasma gondii, que tem a característica de ser intracelular obrigatório. Estima-se que cerca de 50% da população possa estar cronicamente infectada por esse parasita, e o diagnóstico clínico precisa ser auxiliado pelo diagnóstico laboratorial nesses casos. A contaminação do paciente ocorre sem que ele tenha conhecimento e pode não estar correlacionada com os gatos, que por muito tempo foram considerados a única forma de infecção. A ingestão de frutas, água e verduras contaminadas com o oocisto, e até mesmo de carnes malcozidas e contaminadas por cistos, aparenta ser a principal causa de infecção. Clinicamente, a toxoplasmose pode ser dividida em cinco classes: Infecção em imunocompetentes; Infecção na gravidez; Infecção congênita; Infecção ou reativação em pacientes imunodeficientes; Infecções oculares; Os sinais e sintomas apresentados por um paciente infectado pelo Toxoplasma gondii podem variar desde febre, com dor de cabeça e garganta, além de manchas avermelhadas no corpo, até convulsões, perda de coordenação motora e problemas de audição e visão. Como se pode perceber, são sinais e sintomas inespecíficos, que podem ser confundidos com várias outras doenças. Todas as apresentações clínicas supracitadas não trazem sinais e sintomas que possam direcionar a um diagnóstico clínico de toxoplasmose. Em qualquer uma dessas classes, também pode haver comprometimento neurológico dos pacientes, pois o Toxoplasma gondii apresenta habilidade de colonizar o sistema nervoso. Nesses casos, o comprometimento é permanente e as sequelas dependerão de quais áreas foram afetadas. A chamada toxoplasmose oftalmológica também é uma forma que acaba por deixar paciente com sequelas permanentes, pois afeta estruturas ocularesresponsáveis pela formação da imagem, e a perda da visão parcial ou total é uma realidade nesses casos. Diante do exposto, existe uma grande necessidade de suporte diagnóstico laboratorial rápido e eficiente. Testes que são baseados em visualização direta do toxoplasma podem ser demorados, e isso pode significar um agravamento dos sintomas do paciente, com sequelas permanentes. Os testes imunocromatográficos são, então, uma alternativa para um diagnóstico sorológico rápido, inclusive para a toxoplasmose. Esses testes são vendidos na forma de kit, contendo um cassete, em que é realizado o teste, e um tampão diluente. Para o kit de diagnóstico imunocromatográfico da toxoplasmose IgG e IgM (Figura 1), o cassete é constituído por: uma espécie de almofada embebida com antígenos recombinantes de gondii combinados com ouro coloidal e anticorpo controle, também conjugada com ouro coloidal; uma tira de membrana de nitrocelulose contendo três linhas: duas teste (linhas G e M) e uma controle. TOXO TOXO ID ID I C SFigura 1 Kit de teste imunocromatográfico de detecção de toxoplasmose IgG/IgM. cassete da esquerda não está usado e o da direita está reativo para e IgM. teste é feito com a adição de uma gota (cerca de 10µL) da amostra normalmente soro, mas alguns testes também aceitam amostras de sangue total. Em seguida, deve-se incluir tampão fornecido pelo kit. Essa mistura, então, irá migrar, por ação capilar, pelo cassete, até chegar à tira de nitrocelulose. Caso haja anticorpos IgM anti-T. gondii na amostra, estes irão se ligar nos conjugados de gondii presentes no cassete. mesmo ocorrerá se houver anti-T. gondii. Quando esse imunocomplexo passar pelas linhas M e G, ocorrerá a formação de um novo conjugado, por estarem embebidas de anticorpos IgM e anti-humanos. Isso significa que eles irão se ligar, caso tenham se formado, nos complexos de IgM e/ou anti-T. gondii. Na linha controle, há a presença de anticorpo controle. Caso seja positivo para IgM ou IgG, haverá a formação de uma linha vermelha na marcação das linhas M e/ou G. Sempre deverá haver a formação da linha vermelha controle, pois indica que o teste é válido. Caso não haja essa formação, teste deverá ser repetido. Os resultados podem ser surgimento de uma linha vermelha M, indicando presença de anticorpos IgM anti-T. gondii; uma linha vermelha G, indicando presença de anticorpos anti-T. gondii; ambas as linhas M e G ficarem vermelhas, significando presença de ambos os anticorpos IgM e IgG anti-T. gondii; ou, ainda, não haver formação de linha vermelha nem em M nem em G, significando um resultado negativo. Se, em todos esses casos, a linha controle aparecer, os resultados são válidos. A presença de IgM na amostra do paciente pode indicar que houve uma infecção recente pelo T. gondii ou, até mesmo, que a infecção está ativa. IgM tende a persistir por cerca de quatro semanas, quando passa a ser substituído pelo IgG. A presença de significa uma infecção antiga por T. gondii. A presença dos dois anticorpos significa a conversão de imunoglobulinas, e provavelmente não há infecção ativa no momento. Todos os resultados devem ser cruzados com os dados clínicos do paciente, para resultados mais confiáveis. Esse teste é excelente para triagem e diagnóstico rápido da toxoplasmose, fornecendo resultados que podem encaminhar paciente para tratamento mais rapidamente, minimizando as possíveis sequelas. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICASGOMEZ, Carlos A. et al. Evaluation of three point-of-care tests for detection of Toxoplasma immunoglobulin and IgM in the United States: proof of concept and challenges. Open Forum Infectious Diseases, V. 5, n. 10, 2018. Disponível em: https://doi.org/10.1093/ofid/ofy215. Acesso em: 4 jul. 2021. KHAN, H.; NOORDIN, R. Serological and molecular rapid diagnostic tests for Toxoplasma infection in humans and animals. European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases, 39, 19-30, 2020. Disponível em: Acesso em: 4 jul. 2021. LYKINS, J. et al. Rapid, inexpensive, fingerstick, whole-blood, sensitive, specific, point-ofcare test for anti-Toxoplasma antibodies. PLOS Neglected Tropical Diseases, 12, n. 8, 2018. Disponível em: https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0006536. Acesso em: 4 jul.2021. WASSEF, R.; ABDEL-MALEK, R. Validity of a new immunochromatographic test in detection of Toxoplasma gondii in cancer patients. Journal of Parasitic Diseases, 43, p. 83-86, 2019. Disponível em: https://doi.org/10.1007/s12639-018-1063-2. Acesso em: 4 jul. 2021.Roteiro algetec+ INSTRUÇÕES GERAIS 1. Neste experimento, você irá analisar o diagnóstico da toxoplasmose, doença provocada pelo protozoário Toxoplasma gondii. 2. Utilize a seção "Recomendações de Acesso" para melhor aproveitamento da experiência virtual e para respostas às perguntas frequentes a respeito do Laboratório Virtual. 3. Caso não saiba como manipular Laboratório Virtual, utilize o "Tutorial" presente neste Roteiro. 4. Caso já possua familiaridade com Laboratório Virtual, você encontrará as instruções para realização desta prática na subseção "Procedimentos". 5. Ao finalizar experimento, responda aos questionamentos da seção "Avaliação dos Resultados". RECOMENDAÇÕES DE ACESSO DICAS DE DESEMPENHO Para otimizar a sua experiência no acesso aos laboratórios virtuais, siga as seguintes dicas de desempenho: Feche outros aplicativos e abas: Certifique-se de fechar quaisquer outros aplicativos ou abas que possam estar consumindo recursos do seu computador, garantindo um desempenho mais eficiente. Navegador Mozilla Firefox: Recomendamos uso do navegadorMozilla Firefox, conhecido por seu baixo consumo de recursos em comparação a outros navegadores, proporcionando uma navegação mais fluida. Aceleração de hardware: Experimente habilitar ou desabilitar a aceleração de hardware no seu navegador para otimizar desempenho durante acesso aos laboratórios virtuais. Requisitos mínimos do sistema: Certifique-se de que seu computador atenda aos requisitos mínimos para acessar os laboratórios virtuais. Essa informação está disponível em nossa Central de Suporte. Monitoramento do sistema: Utilize Gerenciador de Tarefas (Ctrl + Shift + Esc) para verificar o uso do disco, memória e CPU. Se estiverem em 100%, considere fechar outros aplicativos ou reiniciar a máquina para otimizar desempenho. Teste de velocidade de internet: Antes de acessar, realize um teste de velocidade de internet para garantir uma conexão estável e rápida durante uso dos laboratórios virtuais. Atualizações do navegador e sistema operacional: Mantenha seu navegador e sistema operacional atualizados para garantir compatibilidade e segurança durante o acesso aos laboratórios. PRECISA DE AJUDA? Em caso de dúvidas ou dificuldades técnicas, visite nossa Central de Suporte para encontrar artigos de ajuda e informações para usuários. Acesse a Central de Suporte através do link: https://suporte- virtual.algetec.com.br Se preferir, utilize os QR Codes abaixo para entrar em contato via WhatsApp ou ser direcionado para a Central de Suporte. Estamos aqui para ajudar! Conte conosco!? DESCRIÇÃO DO LABORATÓRIO MATERIAIS NECESSÁRIOS Kit teste-rápido Toxoplasmose (tampão diluente; placa teste); Micropipeta de 10 µL; Papel toalha; Pisseta com álcool 70; Pisseta com hipoclorito de sódio; Ponteira para micropipeta; Suporte para tubo de coleta; Tubo de coleta com amostra de soro. PROCEDIMENTOS SEGURANÇA DO EXPERIMENTO Higienize as mãos na pia. Coloque os equipamentos de proteção individual localizados no "Armário de EPIs": jaleco, luvas, óculos de proteção e máscara.Higienize a bancada com hipoclorito de sódio, em seguida, passe álcool 70%. ADICIONANDO A AMOSTRA NA PLACA TESTE Retire a placa teste da embalagem. Pipete 10 µL da amostra de soro do tubo de coleta. Transfira para o "espaço S" da placa teste e descarte a ponteira. Adicione duas gotas do diluente no poço de solução tampão da placa teste. REALIZANDO LEITURA Aguarde 15 minutos até a finalização do teste. Realize a leitura da placa e informe no laudo o resultado obtido. AVALIANDO RESULTADOS Siga para a seção "Avaliação dos Resultados", neste roteiro, e responda de acordo com o que foi observado nos experimentos. AVALIAÇÃO DOS RESULTADOS 1. Qual protozoário provoca a doença em estudo? 2. Descreva o ciclo de vida do parasito e medidas profiláticas. TUTORIAL VIRTUALAB SEGURANÇA DO EXPERIMENTOLave as mãos clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a pia. Visualização Visualize armário de EPIs clicando com o botão esquerdo do mouse na câmera com nome "Armário de EPIs" ou através do atalho do teclado "Alt+2". Visualização Alt+1 Pia Alt+2 Armário de EPIs Alt+3 Bancada Abra o armário de EPIs clicando com botão esquerdo do mouse sobre as portas.Visualização Alt+1 Pia Alt+2 Armário de EPIs Alt+3 Bancada ABRIR/FECHAR PORTA Selecione os EPIs necessários para a realização do ensaio clicando com botão esquerdo do mouse sobre eles. Nesse experimento, é obrigatório uso de jaleco e luvas. Visualização Alt+1 Pia Alt+2 Armário de EPIs Alt+3 Bancada JALECO i Peça de roupa utilizada por profissionais de saúde e de outras áreas para USAR proteção individual durante o serviço, servindo como uma barreira corporal Feche as portas do armário clicando com botão esquerdo do mouse sobre as portas.Visualização Alt+1 Pia Alt+2 Armário de EPIs Alt+3 Bancada ABRIR/FECHAR PORTA Visualize a bancada clicando com botão esquerdo do mouse na câmera com nome "Bancada" ou através do atalho do teclado "Alt+3". Visualização Alt+1 Pia Alt+2 Armário de EPIs Alt+3 Bancada Higienize a bancada clicando com o botão esquerdo do mouse sobre a almotolia com hipoclorito de sódio.Visualização Alt+1 Pia Alt+2 Armário de EPIs Alt+3 Bancada HIPOCLORITO DE SÓDIO Pisseta contendo solução de I PASSAR HIPOCLORITO NA hipoclorito de sódio utilizada frequentemente como desinfetante MESA Limpe com o papel toalha clicando com botão esquerdo do mouse sobre papel toalha. Visualização Alt+1 Pia Alt+2 Armário de EPIs Alt+3 Bancada PAPEL TOALHA i Utilizado para secagem das mãos, limpeza de e até PASSAR PAPEL NA MESA mesmo para absorver líquidos. Higienize a bancada clicando com botão esquerdo do mouse sobre a almotolia com álcool a 70%.Visualização Alt+1 Pia Alt+2 Armário de EPIs Alt+3 Bancada ÁLCOOL 70% Pisseta contendo álcool na concentração de 70% utilizada para PASSAR ÁLCOOL NA MESA matar a maioria dos micro-organismo ADICIONANDO A AMOSTRA NA PLACA TESTE Retire a placa teste clicando com botão esquerdo do mouse sobre a embalagem indicada. Visualização Alt+1 Pia Alt+2 Armário de EPIs Alt+3 Visão geral Alt+4 Resultado Kit teste-rápido Toxoplasmose i Caixa utilizada para armazenar kit teste-rápido para toxoplasmose. RETIRAR NOVA CAIXA Mova a micropipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a micropipeta e selecione a opção "Colocar em amostra sorológica".Visualização Alt+1 Pia Alt+2 Armário de EPIs Alt+3 Visão geral Alt+4 Resultado Colocar no suporte Colocar em Amostra sorológica Homogeneizar Trocar ponteira Reajustar volume Mova a micropipeta clicando com o botão direito do mouse sobre a micropipeta e selecione a opção "Colocar em poço menor". Visualização Alt+1 Pia Alt+2 Armário de EPIs Alt+3 Visão geral Alt+4 Resultado Colocar no suporte Colocar em Poço Menor Homogeneizar GETEC Trocar ponteira Reajustar volume Troque a ponteira clicando com botão direito do mouse sobre a micropipeta e selecione a opção "Trocar ponteira".Visualização Alt+1 Pia Alt+2 Armário de EPIs Alt+3 Visão geral Alt+4 Resultado Colocar no suporte Colocar em Poço Menor Homogeneizar GETEC Trocar ponteira Reajustar volume Adicione o diluente clicando com o botão esquerdo do mouse sobre diluente. Visualização Alt+1 Pia Alt+2 Armário de EPIs Alt+3 Visão geral Alt+4 Resultado GETEC Diluente Solução contendo tampão fosfato salino. 0 DESPEJAR NA PLACA REALIZANDO LEITURA Aguarde por 15 minutos ou avance o tempo clicando com botão esquerdo do mouse em "Avançar".Visualização Alt+1 Pia Alt+2 Armário de EPIs Alt+3 Visão geral Alt+4 Resultado 00 00:00:11.6 Avançar ALGETEC Informe o resultado obtido clicando com botão esquerdo do mouse sobre os espaços indicados. Visualização Alt+1 Pia Alt+2 Armário de EPIs TOXO Alt+3 Visão geral Alt+4 Resultado LAUDO PARA TESTES RÁPIDO TOXOPLASMOSE IDENTIFICAÇÃO DO PACIENTE M Nome: G Sexo: (x) Feminino ( Masculino Data de Nascimento: TESTE RÁPIDO PARA DETECÇÃO DE ANTÍGENOS PARA TOXOPLASMOSE Amostra: Sangue Total Método: Imunocromatografia INTERPRETAÇÃO DO RESULTADO Reagente Observação: Não Reagente Não foi evidenciado a presença de anticorpos. Verificar resposta Verifique a resposta clicando com o botão esquerdo do mouse em "Verificar resposta".Visualização Alt+1 Pia Alt+2 Armário de EPIs TOXO Alt+3 Visão geral Alt+4 Resultado LAUDO PARA TESTES RÁPIDO - TOXOPLASMOSE M G IDENTIFICAÇÃO DO PACIENTE Nome: Sexo: (x) Feminino Masculino Data de Nascimento: TESTE RÁPIDO PARA DETECÇÃO DE ANTÍGENOS PARA TOXOPLASMOSE Amostra: Sangue Total Método: Imunocromatografia INTERPRETAÇÃO DO RESULTADO Reagente Observação: Não Reagente Não foi evidenciado a presença de anticorpos. Verificar resposta AVALIANDO OS RESULTADOS Siga para a seção "Avaliação dos Resultados", neste roteiro, e responda de acordo com o que foi observado nos experimentos.Pré Teste Na realização de um teste imunocromatográfico de e IgM para toxoplasmose, um técnico 1) adicionou menor quantidade de reagente. Que implicação essa ação pode ter? A) Pode não haver a migração por capilar para a área de reação e leitura do teste. B) Pode haver coagulação da amostra e dificuldade de leitura do teste. C) teste pode indicar resultados fortes que impedem a leitura correta. A utilização de testes rápidos no diagnóstico e triagem em serviços de saúde auxiliou os 2) pacientes a receberem tratamento adequado de forma mais rápida e assertiva. Entre as doenças beneficiadas por esse tipo de teste, encontra-se a toxoplasmose. Assinale a alternativa que contém o fundamento metodológico aplicado nesse tipo de teste, inclusive para a toxoplasmose: A) Imunoprecipitação. B) Aglutinação. C) Imunocromatografia. Para a realização da imunocromatografia e IgM de toxoplasmose, qual a forma correta de 3) obtenção do material biológico do paciente? A) O paciente deve já trazer a amostra coletada de sua residência. B) Punção capilar na ponta do dedo. C) Por meio de aspirados da medula. Foi realizado o teste de um paciente para toxoplasmose por imunocromatografia IgG/IgM. 4) resultado apresentado foi positivo para IgG. que isso significa? A) Significa que o paciente está com infecção ativa por toxoplasma. B) Significa que está havendo a transição de imunoglobulinas. C) Significa que o paciente teve infecção por toxoplasma algum tempo atrás. Um resultado de teste de imunocromatografia IgG/IgM para toxoplasmose estava sendo 5) executado e apresentou seguinte resultado: controle sem surgimento de reação e reação positiva para IgM. paciente apresentava sintomatologia condizente com toxoplasmose. Pode-se aceitar esse resultado? A) resultado pode ser aceito, pois é corroborado pela clínica do paciente. B) resultado deve ser aceito com ressalvas e encaminhado ao médico. C) Não se pode aceitar resultado, pois controle não apresentou reação.Experimento Acesse laboratório: Conteúdo interativo disponível na plataforma de ensino!Pós Teste 1) A toxoplasmose é uma doença de difícil diagnóstico clínico, pois seus sinais e sintomas são muito inespecíficos. Acerca de seu agente etiológico, assinale a alternativa correta. A) É um helminto intracelular obrigatório. B) É um vírus intracelular obrigatório. C) É um protozoário intracelular obrigatório. 2) Os testes imunocromatográficos são utilizados na triagem de pacientes de inúmeras doenças, incluindo a toxoplasmose. Acerca desse teste, assinale a alternativa correta. A) É utilizado para detecção de anticorpos IgA contra a toxoplasmose. B) Nos testes imunocromatográficos para a toxoplasmose, é testado somente IgM. C) É um teste que consegue indicar uma infecção recente ou antiga por T. gondii. 3) Um paciente foi encaminhado ao laboratório de análises clínicas para a realização de teste imunocromatográfico e IgM para toxoplasmose. Qual amostra deve ser coletada para esse fim? A) Urina. B) Sangue total. C) Líquor. 4) Paciente de 23 anos se apresenta no posto básico de saúde para uma consulta, queixando-se de febre e dores de cabeça sem explicações aparentes. Após inquérito clínico, médico levanta várias hipóteses diagnósticas, inclusive toxoplasmose. Ele explica que necessita que paciente realize um teste imunocromatográfico IgM e IgG para toxoplasmose, para fechar ou não diagnóstico. Assinale a alternativa que traga uma explicação plausível do porquê de médico não afirmar se tratar de toxoplasmose somente pela anamnese.A) Os sinais e sintomas de toxoplasmose são inespecíficos. A hipótese diagnóstica pode ser levantada pela história clínica do paciente, mas diagnóstico deve ser suportado por exames laboratoriais. B) Os testes laboratoriais para diagnóstico de toxoplasmose são uma obrigatoriedade, mas não são recomendados para o diagnóstico do paciente e o início do tratamento. C) A solicitação dos exames laboratoriais somente deve ser feita quando o paciente apresentar agravamento do quadro. No caso em questão, médico precipitou-se ao solicitar os exames imediatamente à consulta. 5) Paciente recebe diagnóstico de teste imunocromatográfico IgM de toxoplasmose com resultado de reagente para e IgM. Sua amiga, que não é da área da saúde, insiste para que refaça teste em outro laboratório, pois está errado. A amiga da paciente está correta? A) A amiga está correta, pois o teste fornece, como resultado, se há presença de anticorpos IgM ou e não os dois. B) A amiga está incorreta, pois teste pode apresentar tal resultado caso a paciente esteja em transição de imunoglobulina. C) A amiga errou ao solicitar que o teste seja refeito em outro laboratório. erro no teste deve estar em não apresentar o controle.