Análise de Sêmen: Objetivos e Processo

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MANAUS – AM
2023
OBJETIVOS DA ANÁLISE DE SÊMEM
Medir a capacidade de fecundação do homem.
• Auxiliar no diagnóstico e tratamento de
infertilidade;
• Avaliar a eficácia de uma vasectomia;
• Em medicina legal, na identificação de um fluído
como sêmen;
• Melhorar a qualidade dos espermatozoides usados
no laboratório;
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O líquido seminal é composto por quatro
frações, produzidas nos testículos, nos
epidídimos, nas vesículas seminais, na
próstata e nas glândulas bulbouretrais.
Os espermatozoides compreendem
somente 5% do volume total ejaculado, o
restante dos fluidos é produzido com o
intuito de manter, nutrir e permitir que
os espermatozoides sobrevivam e
alcancem o oócito.
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Os testículos são compostos por túbulos
seminíferos, nos quais as células germinativas e as
células de Sertoli estão localizadas.
As células de Sertoli proporcionam os nutrientes e o
suporte necessário às células germinativas para que
elas passem pelas mitoses e meioses
(espermatogênese).
Ao final da espermatogênese, os espermatozoides
imaturos (imóveis) passam para o epidídimo, no
qual amadurecem e desenvolvem os movimentos
do flagelo.
Eles permanecem armazenados no epidídimo até o
momento da ejaculação.
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Durante a ejaculação, os espermatozoides
passam através dos ductos deferentes para os
ductos ejaculatórios, que recebem também o
fluido proveniente das vesículas seminais.
As vesículas seminais produzem a maior parte
do fluido seminal (60–70%), contendo uma
grande concentração de frutose.
Os espermatozoides metabolizam a frutose
para produzir a energia necessária aos
batimentos flagelares e à sua propulsão pelo
trato reprodutor feminino.
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A próstata, localizada abaixo da bexiga,
circunda a uretra superior e auxilia na
propulsão dos espermatozoides pela uretra por
meio de contrações durante a ejaculação.
Em torno de 20–30% do volume seminal é
composto pelo fluido ácido produzido pela
próstata, contendo altas concentrações de
fosfatase ácida, ácido cítrico, zinco e enzimas
proteolíticas responsáveis pela coagulação e
pela liquefação do sêmen após a ejaculação
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As glândulas bulbouretrais, localizadas abaixo
da próstata, contribuem com aproximadamente
5% do volume do ejaculado, na forma de um
muco alcalino que auxilia a neutralizar a acidez
das secreções prostáticas.
Também é importante que o sêmen tenha um
pH alcalino para neutralizar a acidez vaginal,
resultado da flora vaginal normal.
Sem essa neutralização, a motilidade
espermática fica diminuída
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COLETA
O ideal é que a amostra de sêmen seja coletada por
masturbação, pois os preservativos comerciais têm
agentes espermicidas.
Nos casos em que seja impossível esse método de
coleta, é possível coletar com preservativos
especiais, de poliuretano e sem lubrificantes.
A bexiga deve ser esvaziada anteriormente à coleta
e caso haja suspeita de ejaculação retrógrada
(quando o sêmen reflui para o interior da bexiga),
pode-se coletar uma amostra de urina pós-
ejaculação para verificar a presença de
espermatozoides.
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COLETA
O laboratório deve fornecer o recipiente de
plástico ou de vidro, com abertura larga e
tampa de rosca para a coleta.
A amostra deve ser coletada após 2 a 5 dias de
abstinência sexual para que seja fidedigna
quanto à viabilidade e à contagem de
espermatozoides.
Tempos de abstinência superiores a 5 dias
geram volumes maiores de ejaculado e
diminuição na motilidade.
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MANIPULAÇÃO DAS AMOSTRAS
Todas as amostras de sêmen são possíveis
reservatórios de HIV e de vírus das hepatites B
e C.
Por isso, é essencial tomar as precauções de
biossegurança.
O descarte das amostras e do material em
contato com elas é feito como resíduo
biológico.
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ASPECTOS MACROSCÓPICOS
O primeiro parâmetro a ser analisado é a liquefação.
Imediatamente após a coleta, o sêmen é uma massa
semissólida coagulada.
Em raros casos, a amostra não coagula.
A amostra fica completamente liquefeita geralmente em torno
de 15 a 20 minutos após a coleta, quando mantida em
temperatura ambiente.
Em alguns casos, pode demorar até 60 minutos para completar
a liquefação.
Porém, caso demore mais que 60 minutos, pode haver uma
deficiência na secreção prostática.
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ASPECTOS MACROSCÓPICOS
Quanto à aparência, o sêmen normal apresenta coloração branco-
opalescente e é levemente translúcido.
A amostra fica mais translúcida em casos de baixa concentração
espermática.
Maior opacidade e coloração mais esbranquiçada podem indicar a
presença de leucócitos e infecções do trato reprodutivo.
Se a coloração estiver avermelhada, indica a presença de hemácias,
o que não é comum.
A coloração amarelada pode indicar contaminação por urina,
abstinência prolongada e também pode ocorrer em pacientes com
icterícia ou em uso de algumas vitaminas ou medicações.
A urina é tóxica para os espermatozoides e afeta a avaliação da
motilidade.
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ASPECTOS MACROSCÓPICOS
Para a avaliação do volume, pode-se pesar o
recipiente vazio e, depois, com a amostra.
Então calculamos o volume, estimando a densidade
do sêmen como 1 g/ml (varia entre 1,043 e 1,102
g/ml).
Não é recomendado medir na pipeta, pois pode-se
perder entre 0,3 e 0,9 ml em razão da dificuldade
em capturar toda a amostra.
O volume normal varia entre 2 e 5 ml.
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ASPECTOS MACROSCÓPICOS
O volume ode estar aumentado em períodos de
intensa abstinência ou em casos de inflamações nas
glândulas acessórias.
A diminuição no volume está associada à
infertilidade e pode indicar obstrução do ducto
ejaculatório ou ausência bilateral dos ductos
deferentes, em que as vesículas seminais são pouco
desenvolvidas ou ausentes.
Também pode ser resultado da perda de parte da
amostra, de ejaculação parcialmente retrógrada ou
de deficiência androgênica.
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ASPECTOS MACROSCÓPICOS
A viscosidade se refere à consistência do fluido e pode estar
relacionada à liquefação.
Amostras que não estão completamente liquefeitas
apresentam grumos e alta viscosidade.
As amostras normais são pipetadas com facilidade e
formam um fio fino de não mais que 2 cm quando liberadas
da pipeta.
Amostras que formam fios maiores que 2 cm são
consideradas com aumento de viscosidade.
A viscosidade pode ser relatada como normal, alta ou baixa.
O aumento da viscosidade dificulta a motilidade.
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ASPECTOS MACROSCÓPICOS
O pH do sêmen reflete o equilíbrio entre os pHs das
secreções das glândulas acessórias, principalmente da
secreção básica das vesículas seminais e da secreção ácida
prostática.
Deve ser medido preferencialmente sempre num mesmo
tempo após a ejaculação, mas o ideal é que seja medido em
até 1 hora após a ejaculação, pois ele é influenciado pela
perda de CO2 .
O pH normal varia entre 7,2 e 7,8, podendo estar
aumentado em infecções agudas das glândulas acessórias.
Pode estar abaixo de 7 se houver contaminação por urina,
obstrução dos ductos ejaculatórios ou em malformações das
vesículas seminais
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ASPECTOS MICROSCÓPICOS
A investigação microscópica inicial serve para termos uma
visão geral da amostra.
Para isso, podemos utilizar uma preparação a fresco
contendo 10 µl de amostra em uma lâmina coberta por uma
lamínula.
Em um primeiro momento, precisamos observar, em
aumento de 100x, se há filamentos de muco, agregação ou
aglutinação espermática, a presença de células epiteliais,
células redondas (leucócitos e células progenitoras dos
espermatozoides) e cabeças ou caudas isoladas de
espermatozoides.
Em seguida, em aumento de 200x, avaliamos a motilidade
e, no caso da utilização de câmara de Neubauer, verificamos
a diluição necessária para a contagem dos espermatozoides.
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ASPECTOS MICROSCÓPICOS
A agregação não específica de espermatozoides é definida
como a aderência de espermatozoides imóveis uns aos outros,
a filamentos, a outros tipos celulares ou a restos celulares.
A aglutinação,que se refere especificamente a
espermatozoides móveis aderidos entre si, pode ocorrer entre
as cabeças, entre as caudas ou de forma mista, devendo-se
relatar o maior tipo de aglutinação observada.
A aglutinação é classificada em graus, de 1 a 4.
A presença de aglutinação não é suficiente para se deduzir uma
causa imunológica de infertilidade, mas é sugestiva da
presença de anticorpos antiespermatozoides (AEEs), que
podem ser investigados de forma mais específica por outras
metodologias.
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CONCENTRAÇÃO DE ESPERMATOZOIDES
Apesar de sabermos que somente um
espermatozoide é necessário para fertilizar o
oócito, a concentração espermática é um
parâmetro que se relaciona ao tempo para
alcançar a gestação e também às taxas de
gestação.
Os valores considerados normais são os
superiores a 20 milhões de espermatozoides
por ml, com as concentrações entre 10 e 20
milhões/ml sendo consideradas limítrofes.
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CONCENTRAÇÃO DE ESPERMATOZOIDES
A contagem total de espermatozoides por ejaculado é
obtida através da multiplicação da concentração pelo
volume da amostra.
As contagens totais superiores a 40 milhões por ejaculado
são consideradas normais (20 milhões/ ml × 2 ml).
A contagem de espermatozoides é feita normalmente na
câmara de Makler ou na câmara de Neubauer.
Pode ser utilizada uma diluição de 1:20 em água destilada
(para imobilizar os espermatozoides) e facilitar a contagem.
Porém, com a prática, torna-se possível contar os
espermatozoides móveis.
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CONCENTRAÇÃO DE ESPERMATOZOIDES
Na câmara de Neubauer, são contados geralmente os
quatro cantos e o centro do quadrante central, mesmo
local onde são contadas as hemácias em outros fluidos
biológicos.
A câmara de Makler foi desenvolvida especialmente para
a contagem de espermatozoides e não requer diluições
de amostra.
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AVALIAÇÃO DA MOTILIDADE
A presença de espermatozoides capazes de se movimentar de
forma linear e progressiva é essencial para a fertilidade,
considerando que uma vez tendo alcançado o colo do útero, os
espermatozoides precisam passar pela mucosa uterina, pelas
tubas de falópio e alcançar o oócito.
A avaliação laboratorial da motilidade é feita, na maioria das
vezes, de forma subjetiva, em amostras não diluídas, em que é
feita uma classificação dos graus de motilidade.
A Organização Mundial da Saúde recomenda a classificação
em: móveis progressivos (MP), móveis não progressivos (NP) e
imóveis (I).
Os resultados são reportados como
percentual de cada categoria de
motilidade.
Os valores de referência são iguais ou
acima de 40% para a motilidade total
(MP + NP) e igual ou superior a 32% para
móveis progressivos.
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AVALIAÇÃO DA VITALIDADE
Dentre os espermatozoides imóveis, é importante verificar se
eles estão viáveis para determinar a causa da infertilidade.
Um dos métodos para avaliação da vitalidade é a coloração
com eosina ou eosina-nigrosina.
A membrana dos espermatozoides mortos sofre danos e, como
consequência, é capaz de captar o corante eosina, corando o
espermatozoide de um tom rosado.
Os espermatozoides vivos, com a membrana íntegra, não
captam o corante, permanecendo incolores.
O corante nigrosina pode ser utilizado para formar um fundo
escuro e facilitar a visualização dos espermatozoides vivos.
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AVALIAÇÃO DA MORFOLOGIA
Do mesmo modo que percentuais altos de
espermatozoides imóveis levam à infertilidade,
espermatozoides com alterações morfológicas também
são incapazes de fertilizar o oócito.
Anormalidades na morfologia da cabeça do
espermatozoide levam a dificuldades na penetração no
oócito, enquanto que anormalidades morfológicas da
peça intermediária e da cauda levam a alterações na
motilidade.
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O espermatozoide maduro é constituído das seguintes partes:
Cabeça: contém um núcleo e um capuz 
acrossômico no qual se concentram 
enzimas proteolíticas que facilitam a 
penetração no oócito.
Fragmento médio: também chamado de 
corpo, contém mitocôndrias que geram a 
energia necessária para o deslocamento do 
espermatozoide.
Cauda: confere movimentação ao 
espermatozoide. Contém ATP armazenado.
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CÉLULAS REDONDAS
As células redondas presentes na amostra incluem as
células progenitoras dos espermatozoides (espermátides
e espermatócitos) e também os leucócitos,
predominantemente os polimorfonucleares.
Os leucócitos no sêmen são determinados por
imunohistoquímica ou mais comumente após coloração
da peroxidase (neutrófilos).
MÉTODOS DE COLORAÇÃO PARA ESPERMATOZÓIDES
- Método de Giemsa (diferentes tipos de leucócitos);
- Método de Papanicolaou modificado (mais
amplamente utilizado, melhor para caracterizar os
espermatozoides);
- Método de Bryan-Leishman (Células germinativas);
- Método Shorr (simples, rápida, morfologia
espermática);
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AVALIAÇÃO MICROBIOLÓGICA
A presença de mais de 1 milhão de leucócitos/ml é indicativa
de infecção, que ocorre frequentemente na próstata.
As infecções urogenitais são responsáveis por
aproximadamente 15% das causas de infertilidade masculina.
Alguns dos principais microrganismos envolvidos nos casos em
que ocorre a produção de autoanticorpos antiespermatozoides
são Ureaplasma urealyticum, Mycoplasma hominis, Chlamydia
trachomatis e Herpes simplex.
Outros microrganismos, como a Candida albicans, afetam a
motilidade dos espermatozoides por se aglutinarem com as
suas cabeças.
A Escherichia coli também pode causar aglutinação e
imobilização espermática.
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TESTES IMUNOLÓGICOS
Como os anticorpos antiespermatozoides (AEEs) podem ser
encontrados tanto no homem como na sua parceira, eles
podem ser detectados em diversos tipos de amostras,
como no soro, no muco cervical e no líquido seminal.
Não é comum que ambos os parceiros apresentem AEEs;
de fato eles ocorrem com mais frequência no homem.
Suspeita-se da presença de anticorpos no homem quando
são observados grumos de espermatozoides durante um
exame de rotina.
Já a presença desses anticorpos na mulher se apresenta
como uma análise seminal normal na presença de
infertilidade inexplicada.
TESTES IMUNOLÓGICOS
Porém, os AEEs podem estar presentes mesmo na
ausência de aglutinação espermática e a aglutinação
também pode ser causada por outros motivos.
Os AAEs presentes no sêmen pertencem principalmente
às classes imunoglobulina A (IgA) e imunoglobulina G
(IgG).
Os anticorpos imunoglobulina M (IgM), por serem
maiores, raramente são encontrados no sêmen.
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