Estudo de imunologia np1

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Imunologia Clínica
Estudo do sistema imunológico
Anticorpos (Ac): 
· São glicoproteínas
· 5 diferentes subtipos: IgA, IgG, IgE, IgD e IgM 
· Presentes livres no soro, mucosas, interstício e em membrana de linfócitos B (receptores)
· Produzidos em resposta a estímulos antigênicos 
· São bifuncionais (exceto IgD)
Antígeno (Ag):
Substância que induz a resposta imunológica, podendo ou não ser reconhecida como uma ameaça pelo sistema imune.
Tem 2 propriedades essenciais:
· Antigenicidade: capacidade de ser estranho 
· Imunogenicidade: capacidade de gerar resposta imune específica 
Características - Estranheza, Alto peso molecular, Complexidade química, Possibilidade de ser degradado.
Epitopo: 
 é a parte ativa da molécula do antígeno que promove a resposta imunológica, também chamado de determinante antigênico. 
Reação Ag/Ac:
Tem natureza química que podem ser de Ligações de pontes de H+, força eletrostática, interação hidrofóbica 
Combinação é específica e pode ocorrer em 2 estágios 
Neutralização: acontece principalmente com vírus. Os Ac se ligam aos epítopos e são neutralizados.
Opsonização: sinalização. Ac não conseguem por si só neutralizar as bactérias por serem células maiores, então sinalizam o sistema imune para que outros sistemas de defesa sejam ativados para eliminá-las
Características da interação:
Especificidade
Reversibilidade: depende de alguns fatores como o grau de afinidade do Ac pelo Ag, por exemplo 
Afinidade: medida em termos de Ko. Mede o quão forte é o Ac ao epítopo
Avidez: Quanto mais ligações a antígenos um anticorpo é capaz de fazer, maior será a sua avidez. Medida das forças de ligação entre os sitios de ligação e determinantes antigenicos. Mede quanto tempo o Ac foi exposto ao Ag
Reação cruzada: é quando o anticorpo se liga aos antígenos estruturalmente relacionados a um antígeno homólogo. Quando o Ag tem fragmento similar a outro pode produzir Ac pequenos. Ocorrem em ligação de baixa afinidade 
IgM( -) , IgG (-) = não teve contato 
IgM (+), IgG (-) = contato recente, inicial
IgM (-), IgG (+) = teve contato antigo 
IgG = fase crônica/ tardia
IgM = Fase aguda.
Discussão dos conceitos 
O que é Ag e qual a diferença entre antigenicidade e imunogenicidade?
R: Ag – antígeno é a substância estranha ao organismo que desencadeia a produção de anticorpos 
Antigenicidade: capacidade de ser estranho 
Imunogenicidade: capacidade de provocar resposta imune.
Fatores que determinam a imunogenicidade do Ag?
R: Complexidade, peso, tipo de ligação, estrutura.
Resposta imune humoral: mediação por Acs policlonais. Por que?
R: Macrófagos quebram os Ags e os deixam expostos os seus diferentes epítopos, onde diferentes linfócitos produzirão Ac para cada um dos epítopos do mesmo Ag.
O que são Ags recombinantes?
R: Ags produzidos sinteticamente com o epítopo dominante, replicando e ampliando para a identificação do vírus.
São proteínas que são produzidas por meio de técnicas de engenharia genética. Eles são gerados a partir de fragmentos de DNA que codificam a sequência de aminoácidos de um antígeno específico. Após a clonagem do DNA que codifica o antígeno, as células hospedeiras são cultivadas em condições otimizadas para produzir a proteína em grande quantidade.
Parâmetros para validação de um teste sorológico 
Sensibilidade: • É a porcentagem de pacientes com determinada Condição/doença para os quais, se o teste é utilizado, se obtém resultados positivos. São denominados “verdadeiros positivos “. Quanto maior a sensibilidade, maior o poder do teste detectar a condição ou doença.
Especificidade: É a porcentagem dos indivíduos que não tem a condição ou doença e ao utilizar-se o teste apresenta resultados negativos. São denominados “verdadeiros negativos “ . Os testes com alta especificidade (> 99%) e que são negativos em indivíduos sadios ou que apresentam sintomas similares Mas não apresentam a condição/doença, são muito úteis para Confirmar o diagnóstico.
Eficiência: É a porcentagem correta do resultado dos testes, verdadeiros positivos e verdadeiros negativos. 
Teste qualitativo: positivo/ negativo 
Semi- quantitativo: Diluição ( maior diluição positivo é o resultado, título da diluição)
Quantitativo: apresenta valores absolutos do que foi analisado 
Limiar de reatividade ou cut off: Limiar de reatividade ou cut off é a região de corte do teste sorológico
Técnicas Laboratoriais
Principais características das respostas Imunes Adquiridas:
· Especificidade: anticorpo para um antígeno específico 
· Memória: tem contato apenas 1x com o antígeno e cria memória 
· Especialização: respostas categorizadas
· Auto Limitação: controle 
· Não reatividade ao próprio: Linfócitos T = reação no Timo de maturação. Se no processo de seleção o linfócito T, ainda no Timo, reagem as nossas próprias células, estas sofrem apoptose para evitar que saiam na corrente sanguínea destruindo células próprias ( quando isso ocorre, se dá origem a doenças autoimunes)
Principais características dos ensaios que utilizam anticorpos 
Especificidade: indica que o teste identificará somente o Ag ou o Ac desejado.
Quanto maior a especificidade, menor a ocorrência de resultados falsos -positivos e reações cruzadas.
Sensibilidade: inerente ao método estritamente relacionada com a quantidade mínima de Ag ou Ac que poderá ser detectada.
Principais métodos 
1 Reagentes NÃO marcados
· Reação de precipitação 
· Reação de aglutinação ( feito no lab, teste de hemaglutiação, semi quantitativo, diluição seriada)
Primeiros testes a serem realizados, Exigem alta quantidade de Ac/Ag para sua 
realização – Baixa Especificidade;
Não possuem metodologias eficazes para a Detecção da interação Ag/Ac – Baixa Sensibilidade
2 Reagentes Marcados
· Ria – radioativo ️ : Imunodifusão simples ou dupla. Interação Ag/Ac
 realizada em meio sólido
· ELISA – ação de enzimas, reagem com cor : O teste identifica e quantifica Ag ou Ac, utilizando um dos dois Conjugados com enzimas ( fosfatase alcalina, peroxidase, B galactosidase) . Principais tipos são indireto, sanduíche, competição e captura.
· Imunofluorescência (IFA) – potencializado com fluorescência para ver a reação . Anticorpos ou antígenos são conjugados a uma substância (fluorocromo), que, quando excitada por radiações UV, Emite luz no espectro visível. A reação é feita em lâminas de microscopia e a Observação no microscópio com luz UV. Principais fluorocromos: fluoresceína (isotiocianato de Fluoresceína – FITC) e rodamina (isotiocianato de tetrametil Rodamina – TRICT). Tipos: direta, indireta ou sanduíche.
· Western Bloting : Eletroforese de proteínas. 
O gráfico abaixo mostra em que momento a reação acontece. Para que a reação aconteça precisa ter um ponto de equivalência (equilíbrio entre Ag/Ac)
Zona de excesso de Ac ou Ag pode ocorrer um falso negativo, e a reação não fica evidente. Isso acontece quando se trabalha com reagentes não marcados
Banco de sangue 
Os serviços hemoterapicos no Brasil são regidos pela RDC n° 57, 16 de dezembro de 2010 da Anvisa, e portaria n° 1353, 14 junho/ 2011 Ministério da saúde 
Ciclo do sangue 
Candidato a doação – cadastramento – triagem feita por profissional com ens superior (geralmente psicólogos) – se inapto (saída) ; se Apto – coleta sangue e amostras – fracionamento – sangue em quarenta – testes sorológicos e imuno hematológicos – hemocoponentes e exames de acordo –se não (sangue descartado) - se sim (Sangue liberado) 
Fracionamento de hemocoponentes: o sangue é centrifugado e fracionado em concentrado de hemácias ( onde o armazenamento deve ser feito em temperatura de 2- 8 ° C), concentrado de plaquetas ( armazenamento de 20- 22°C) e concentrado de plasma ( armazenamento de -20°C)
Testes sorológicos: realizados testes sorológicos para identificação de infecções transmitidas pelo sangue. 
· Hepatite B : marcador HBsAg; Anti HBc
· Hepatite C: Anti HCV
· Chagas: Anti T. cruzi
· HIV : Anti-HIV ½ + HIV Ag/Ac
· HTLV : Anti-HTLV I/II
· Sífilis: Anti-T.pallidum ou não-treponêmico
Os testes sorológicos devem obrigatoriamente ter registro ANVISA(art. 72)
E ter alta sensibilidade (art. 98)
Imunohematologia
✓ Tipo sanguíneo (ABO)
✓ Fator Rh
✓ Pesquisa de Ac Irregulares
✓ Hemoglobina S
✓ Fenotipagem eritrocitária 
✓ Estudo HLA
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