Exercicios Mapas de Restricao

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1. Consulte o mapa de restrição do plasmídeo pVU1 e o esquema da 
separação electroforética realizada apresentados, e indique qual ou quais 
foram as enzimas utilizadas em cada um dos ensaios de restrição (1 a 6). 
 
 
BamHI: 
PvuI: 
PvuI/ BamHI: 
BamHI/ HindIII: 
HindIII/ PvuI: 
Bam HI/ HindIII/ PvuI: 
 
 
2. As enzimas de restrição BanI, HaeII e SacI foram usadas na construção 
do mapa de restrição do plasmídeo pNUT. Efectuaram-se digestões 
simples e múltiplas, e os produtos de digestão foram analisados em gel 
de agarose. Os resultados obtidos estão representados no esquema 
seguinte: 
 
 
Construa o mapa de restrição do plasmídeo pNUT para as enzimas BanI, 
HaeII e SacI, indicando no esquema a posição relativa dos diferentes 
sítios de restrição. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
3. Um determinado plasmídeo recombinante foi hidrolisado com diferentes enzimas de 
restrição, foram feitas hidrólises simples, duplas e triplas. Os fragmentos obtidos, 
provenientes de cada uma das hidrólises estão representados na tabela. Construa o mapa 
de restrição do plasmídeo. 
 
Enzimas Tamanho dos fragmentos de DNA (pb) 
Bgl II 12200 
KpnI 12200 
XbaI 12200 
Bgl II + kpnI 11000 e 1200 
Bgl II + XbaI 7200 e 5000 
kpnI + XbaI 6200 e 6000 
Bgl II + kpnI + XbaI 6000, 5.000 e 1200 
 
 
4. Um fragmento de DNA humano de 5kb, com extremidades coesivas EcoRI, foi 
clonado num plasmídeo pESTeSL. O plasmídeo recombinante foi hidrolisado 
separadamente com EcoRI e com BamHI. Adicionalmente, uma terceira hidrólise foi 
feita utilizando ambas as enzimas ao mesmo tempo (EcoRI e BamHI). Os fragmentos 
resultantes das 3 hidrólises foram resolvidos por electroforese em gel de agarose. 
Construa o mapa de restrição do plasmídeo. 
O esquema do gel, após a electroforese, está abaixo representado: 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
EcoRI BamHI 
EcoRI 
+ 
BamHI M (kb) 
10 
9 
8 
7 
6 
5 
4 
3 
2 
1 
 
5. O esquema abaixo representa um gel de agarose onde foram analisados vários 
produtos da hidrólise de um DNA (linear) desconhecido com várias enzimas de 
restrição. Com os dados fornecidos no gel construa o mapa de restrição desta molécula 
de DNA, indicando a posição relativa dos locais de reconhecimento para cada uma das 
enzimas de restrição e o tamanho dos fragmentos de DNA (em kb) entre cada local. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
EcoRI BamHI HindIII 
EcoRI 
BamHI 
EcoRI 
HindIII 
BamHI 
HindIII M (kb) 
50 
40 
30 
20 
10