Fundamentos de Imunohematologia em Banco de Sangue

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE
CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE
DEPARTAMENTO DE MEDICINA CLÍNICA
CURSO DE MEDICINA
DISCIPLINA DE DOENÇAS DO SISTEMA LINFOHEMATOPOIETICO
FUNDAMENTOS DE IMUNOHEMATOLOGIA
 Linduarte V de Morais
 Prof. Adjunto IV
NATAL – 2011
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1.Reações Antígeno-Anticorpo
1. Determinante antigênico - Epítopo
2. Reações cruzadas
3. Afinidade
4. Avidez
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Reações cruzadas: similaridade de epítopos na estrutura de Ag complexos
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2. Fatores que influenciam as reações Ag/Ac
1. Anticorpos completos e incompletos
2. Efeitos da carga elétrica da superfície
3. Pré-tratamento das hemácias por enzimas
4. Utilização de meios protéicos
5. Utilização de globulina anti-humana
6. Efeito do pH
7. Efeito da temperatura
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3.Sistema Complemento
3.1 - Vias de ativação
Via Clássica
Via Alternativa
Via das Lecitinas
3.2 - Sequência de ativação
3.3 - C3 convertase e C5 convertase
3.4 - Complexo de ataque à membrana 
 Hemólise
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Imunohematologia- Histórico
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3. Sistema ABH
3.1 Antígenos ( A , B , H )
3.2 Sub-grupos
	A ( A1, A2, A3, A int, A end...)
	B ( Bx , Bw ) 
3.3 Classe de anticorpos
3.4 Fenótipo Bombay
3.5 Menor gravidade na DHPN
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1.a Classificação Direta - Antígenos
1.b Classificação Reversa – Anticorpos
1.c Temperatura da reação
1.CLASSIFICAÇÃO SANGUÍNEA
 Tipagem ABO
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Exemplo
antiA antiB antiAB antiRh Hcia A Hcia B resultado
 + + + + o o AB fator Rh + 
 
 o o o + + + O fator Rh +
	 
2.Classificação Sanguínea
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Fator Rh e DHPN
Fisiopatologia
Antígeno envolvido
Resposta imune
Condições necessárias para ocorrer a DHPN
Diagnóstico
Prevenção
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Sistema Rh
1.Introdução
2. Histórico 
a- 1939 -Levine e Stetson
b – 1940 - Landsteiner e Wiener
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Suspensão de hemácias em solução fisiológica (NaCl a 0,85%) constitui sistema estável = hemácias mantêm distância = equilíbrio entre cargas elétricas das hemácias e a nuvem iônica que as circundam
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HEMAGLUTINAÇÃO
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POTENCIAL ZETA: Diferença de potencial criada entre a nuvem de cátions 
atraídas pelas cargas elétricas negativas da membrana celular e meio 
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 A força de repulsão entre as hemácias depende do potencial zeta.
 Z =  . Z = Potencial zeta
 D √  = Eletronegatividade da hcia
 D = Constante dielétrica do meio
  = Força iônica do meio
POTENCIAL ZETA
↓ potencial zeta → Aglutinação = POTENCIAL ZETA CRíTICO (PZC)
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Redução da carga elétrica das hemácias ():
 - Tratamento enzimático: bromelina, papaína, ficina, tripsina → remove fragmentos de proteínas e ↓ carga elétrica
b) Variação da composição do meio:
 - Adição de substâncias macromoleculares: albumina bovina, polietilenoglicol → alteram (  ) a constante dielétrica do meio (D)
 - Modificação da força iônica (): usando solução de baixa força iônica 
 
 
MODIFICAÇÃO DO POTENCIAL ZETA
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POTENCIAL ZETA CRÍTICO E CLASSES DE ANTICORPOS
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POTENCIAL ZETA
 (mV)
 - 23		Aglutinação impossível a partir deste ponto.
 - 18		Potencial Zeta crítico para IgM.
 - 16		Potencial Zeta de uma suspensão de hemácias (NaCl 0,85%).
 - 10		Potencial Zeta crítico para IgG.
 - 7		Aglutinação inespecífica abaixo deste ponto.
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Fonte: P. Rouger e C. Salmon; La pratique de l´agglutination des Érythrocytes et du Test de Coombs
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FATORES QUE INFLUENCIAM O POTENCIAL ZETA
1- pH: ótimo para ligação Ac-Ag eritrocitário = 6,5 e 7,5
2- Temperatura: Ac IgM = 4oC e 22oC 
 Ac IgG = 37oC
3- Concentração de Acs: excesso de Acs = efeito prozona,
 excesso de Ag = sensibilização 
4- Localização e número de sítios antigênicos: 
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Reação Ag – Ac in vitro
Estágios
1o- Sensibilização: Ac liga-se ao epítopo = invisível
	 * geralmente IgG
				
2o Reação de aglutinação: (Ac – aglutinina) ou hemólise 			visível
	 *geralmente IgM	
 
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TESTES IMUNO-HEMATOLÓGICOS
 Pesquisa
Aglutinação
Hemaglutinação 
Hemólise
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Reação de Aglutinação
Anticorpo se liga com 2 sítios antigênicos iguais, porém situados em partículas diferentes.
Reações falso-negativas:
 - quantidade pequena de anticorpos (AC)→ partícula com AC. preso à superfície, não forma ponte.
 - quantidade grande de AC→fenômeno de pró-zona
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Reação de Aglutinação
Técnicas mais usadas:
HEMAGLUTINAÇÃO DIRETA
Teste de Coombs Direto
HEMAGLUTINAÇÃO INDIRETA
Teste de Coombs Indireto
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hemaglutinação
DIRETA
INDIRETA
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Fonte: Dra. Lilian Lilian Castilho Castilho
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Fonte: Dra. Lilian Lilian Castilho Castilho
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Fonte: Dra. Lilian Lilian Castilho Castilho
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Fonte: Dra. Lilian Lilian Castilho Castilho
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Fonte: Dra. Lilian Lilian Castilho Castilho
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Identificação de Anticorpos
Fundamento- Teste de Coombs Indireto
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1. Blood Groups in man
Race ed. Backwell
2. Hemoterapia- Fundamentos e prática
Bordin ed. Atheneu
3. Técnicas Modernas de Banco de Sangue e Transfusão
Harmening ed.Revinter
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