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RELATÓRIO DE PRÁTICA Rosilea de Oliveira 47604248 RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS ENSINO DIGITAL RELATÓRIO 02 DATA: ______/______/______ RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS: Microbiologia e Parasitologia DADOS DO(A) ALUNO(A): NOME: Rosilea de Oliveira MATRÍCULA: 47604248 CURSO: Nutrição POLO: Fael PROFESSOR(A) ORIENTADOR(A): Rosilma Melo TEMA DE AULA: PREPARAÇÃO E ESTERILIZAÇÃO DE MATERIAIS UTILIZADOS NA MICROBIOLOGIA CLASSIFICAÇÃO, COMPOSIÇÃO QUÍMICA E PREPARAÇÃO DE MEIOS DE CULTURA RELATÓRIO: 1. PREPARAÇÃO E ESTERILIZAÇÃO DE MATERIAIS UTILIZADOS NA MICROBIOLOGIA A. Dentre os procedimentos utilizados na preparação de materiais utilizados na microbiologia, qual a importância no tamponamento dos tubos de ensaio e dos Erlenmeyer com algodão hidrofóbico? O tamponamento dos tubos de ensaio e dos frascos Erlenmeyer com algodão hidrofóbico desempenha um papel fundamental na manutenção da esterilidade dos meios de cultura e soluções utilizadas em microbiologia. Esse procedimento impede a contaminação por microrganismos presentes no ambiente, ao mesmo tempo em que permite a troca gasosa necessária para o crescimento de determinadas culturas microbiológicas. O algodão hidrofóbico também evita o acúmulo de umidade excessiva, reduzindo a possibilidade de condensação e consequente proliferação de contaminantes. B. Qual material é utilizado para embalagem dos materiais que serão submetidos a processos de esterilização via estufa ou autoclave? RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS ENSINO DIGITAL RELATÓRIO 02 DATA: ______/______/______ Os materiais que serão submetidos à esterilização são embalados de maneira adequada para garantir a eficiência do processo. No caso da estufa de esterilização, normalmente são utilizados papéis kraft ou envelopes de papel grau cirúrgico, que suportam altas temperaturas e permitem a passagem de ar quente. Já na autoclave, os materiais podem ser embalados em papel grau cirúrgico, papel alumínio ou envoltos em panos específicos para autoclavagem, como tecidos de algodão ou papel crepado. C. Adicione uma ou mais fotos da preparação de materiais utilizados no laboratório de microbiologia. Utilização do algodão hidrofóbico para tamponamento dos tubos de ensaio e Erlenmeyer. Materiais sendo embalados com papel Craft para o processo de esterilização. RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS ENSINO DIGITAL RELATÓRIO 02 DATA: ______/______/______ D. Descreva o fundamento da técnica de esterilização de autoclavação, e porque alguns meios de cultura não podem ser autoclavados? A técnica de esterilização por autoclavação é baseada no uso de vapor de água sob alta pressão e temperatura para eliminar microrganismos e esporos. O processo ocorre geralmente a 121°C por 15 a 20 minutos, garantindo a destruição de agentes patogênicos e contaminantes microbiológicos. A autoclave funciona de maneira semelhante a uma panela de pressão, permitindo que o vapor penetre nas superfícies dos materiais e nos meios de cultura, assegurando sua esterilidade. 2. CLASSIFICAÇÃO, COMPOSIÇÃO QUÍMICA E PREPARAÇÃO DE MEIOS DE CULTURA A. Quanto a composição química como podemos classificar os meios de cultura? Os meus de cultura podem ser classificados em meio simples e complexos de acordo com a sua definição química de cada ingrediente presente no meio. Nutrient Broth é um exemplo de meio simples e McConkey Agar. Meios complexos são os que levam uma quantidade de ingredientes que não estão definidos. B. De acordo com os tipos de meios de cultura, no que diferem os meios sólidos, semissólidos e líquidos? Meios líquidos (caldos): não possuem ágar na composição e são utilizados para o crescimento de microrganismos em suspensão, testes bioquímicos e cultivo de microrganismos anaeróbicos. Exemplos: caldo nutritivo e caldo BHI. Meios semissólidos: possuem uma menor concentração de ágar (0,2% a 0,5%), conferindo uma consistência mais fluida. São usados para avaliar a motilidade bacteriana e testes bioquímicos específicos. RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS ENSINO DIGITAL RELATÓRIO 02 DATA: ______/______/______ Meios sólidos: contêm uma maior concentração de ágar (1,5% a 2%), formando uma superfície rígida que permite o isolamento e identificação de colônias. São fundamentais para o cultivo de microrganismos em placas de Petri e tubos inclinados. C. Adicione uma ou mais fotos das etapas de preparo do meio de cultura. Meio de cultura sendo pesado Diluição do meio de cultura Meio liquido Autoclavagem D. Descreva como deve ser feito o cálculo da pesagem do meio de cultura. E quais consequências são geradas por erro nesse cálculo na utilização desse meio? A pesagem do meio de cultura deve ser feita com base na concentração recomendada pelo fabricante. O cálculo segue a relação: Massa (g) = Concentração (g/L) × Volume desejado (L) RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS ENSINO DIGITAL RELATÓRIO 02 DATA: ______/______/______ Por exemplo, se um meio de cultura recomenda 40 g por litro e deseja-se preparar 250 mL (0,25 L), a quantidade necessária será: 40 0,25 = 10 Os erros na pesagem podem trazer consequências como a superconcentração do meio dificultando o crescimento bacteriano devido à osmolaridade elevada ou nutrientes em excesso, além de tornar meios sólidos excessivamente rígidos. Outro erro seria a baixa concentração resultando em um meio inadequado para o desenvolvimento microbiano, impedindo o crescimento de determinadas espécies. Erro na proporção de ágar, pode afetar a consistência do meio, prejudicando a aderência das colônias em meios sólidos ou a mobilidade dos microrganismos em meios semissólidos. TEMA DE AULA: TÉCNICAS ASSÉPTICAS DE ISOLAMENTO DE BACTÉRIAS COLORAÇÃO DE DIFERENCIAL DE GRAM RELATÓRIO: 1. TÉCNICAS ASSÉPTICAS DE ISOLAMENTO DE BACTÉRIAS A. O que é zona de esterilidade e qual sua importância para o manuseio de materiais microbiológicos? É a área livre de contaminantes, criada ao redor do local de trabalho por meio de técnicas assépticas. Essencial para evitar contaminação de amostras microbiológicas. B. Cite as principais técnicas utilizadas para realização de semeio bacteriano? Esgotamento em estrias (isolamento de colônias); Semeio em superfície (quantificação de bactérias); Puncionamento em meio semissólido (teste de motilidade); Semeio por espalhamento (distribuição uniforme em placas). RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS ENSINO DIGITAL RELATÓRIO 02 DATA: ______/______/______ C. Qual o objetivo da técnica de semeio por esgotamento? Por que a mesma é comumente utilizada nas análises clínicas? Visa obter colônias isoladas para identificação bacteriana. Nas análises clínicas, é essencial para diferenciar microrganismos presentes na amostra do paciente. D. Como visualmente pode-se identificar que um semeio bacteriano apresenta apenas um tipo de bactéria isolada? A presença de colônias homogêneas, com mesmas características de cor, forma e tamanho, indica um cultivo puro. 2. COLORAÇÃO DE DIFERENCIAL DE GRAM A. Qual o fundamento da coloração de Gram que permite a separação das bactérias em dois grandes grupos? Baseia-se na composição da parede celular bacteriana. Bactérias Gram-positivas possuem parede espessa de peptidoglicano, retendo o corante cristal violeta; Gram- negativas possuem parede fina, sendo descoloridas e coradas pela safranina. B. Geralmente quais formas bacterianas são classificadas como Gram positivas equais são classificadas como Gram-negativas? Gram-positivas: cocos (Staphylococcus, Streptococcus) e bacilos (Bacillus, Clostridium). Gram-negativas: bacilos (Escherichia coli, Pseudomonas) e cocos (Neisseria). RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS ENSINO DIGITAL RELATÓRIO 02 DATA: ______/______/______ C. Adicione uma foto ou mais da realização da coloração de Gram ou da leitura microscópica da lâmina. Gram Positivo Gram negativo D. Qual a importância da coloração de Gram na rotina clínica no laboratório de microbiologia? A coloração de Gram permite rápida identificação inicial das bactérias, auxiliando na escolha de antibióticos e diagnóstico de infecções. TEMA DE AULA: OBSERVAÇÃO DE LÂMINAS DE Schistosoma mansoni E PROTOZOÁRIOS RELATÓRIO: 1. OBSERVAÇÃO DE LÂMINAS DE CERCARIAS E OVOS DE Schistosoma mansoni A. Como o ser humano é contaminado pela forma infectante (cercarias) e contrai a esquistossomose? A infecção ocorre quando as cercárias, liberadas por caramujos do gênero Biomphalaria, penetram ativamente na pele durante o contato com água contaminada. Após a penetração, elas entram na corrente sanguínea e se desenvolvem no fígado, onde atingem a fase adulta e migram para os vasos mesentéricos, iniciando a postura dos ovos. RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS ENSINO DIGITAL RELATÓRIO 02 DATA: ______/______/______ B. Visto ao microscópio óptico, o ovo pode ser reconhecido pela presença de qual estrutura morfológica? Os ovos de Schistosoma mansoni são identificados pela presença de uma espícula lateral, uma projeção característica que facilita sua fixação nos tecidos e sua eliminação pelas fezes do hospedeiro. 2. OBSERVAÇÃO DE LÂMINA DE CISTOS DE Entamoeba histolytica A. Descrever a característica morfológica que permite a diferenciação entre os cistos da Entamoeba histolytica da Entamoeba coli. Os cistos de E. histolytica apresentam até 4 núcleos e são menores, enquanto os de E. coli possuem até 8 núcleos e são maiores. Essa diferenciação é fundamental em exames parasitológicos, pois E. histolytica é patogênica, podendo causar disenteria amebiana, enquanto E. coli é um comensal não patogênico. 3. OBSERVAÇÃO DE LÂMINA DE TROFOZOITO DE Giardia lamblia. A. Cite qual estrutura permite a fixação do trofozoíto da Giardia lamblia no intestino humano. O disco suctorial, localizado na superfície ventral do parasita, permite sua adesão à mucosa do intestino delgado, impedindo sua eliminação pelas fezes e favorecendo a colonização. Essa fixação pode causar inflamação e má absorção de nutrientes, resultando em sintomas como diarreia e perda de peso. 4. OBSERVAÇÃO DE LÂMINA DE Leishmania sp. A. Quais características morfológicas permitem a diferenciação das firmas evolutivas amastigota e promastigotas? Amastigota: forma arredondada ou oval, sem flagelo externo visível, encontrada no interior dos macrófagos do hospedeiro vertebrado (mamíferos, incluindo humanos). Promastigota: forma alongada, com flagelo anterior livre, encontrada no tubo digestivo do vetor invertebrado (flebótomo ou mosquito-palha), sendo a forma responsável pela transmissão para os hospedeiros vertebrados. 5. OBSERVAÇÃO DE LÂMINA DE TROFOZOITO DE Trichomonas vaginalis A. Quais as estruturas substituem as mitocôndrias no trofozoíto de Trichomonas vaginalis? RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS ENSINO DIGITAL RELATÓRIO 02 DATA: ______/______/______ Os trofozoítos de T. vaginalis não possuem mitocôndrias e, em seu lugar, possuem hidrogenossomos, organelas que participam do metabolismo energético em ambientes anaeróbicos. Esses hidrogenossomos produzem ATP por meio da fermentação de carboidratos e liberam hidrogênio molecular como subproduto. 6. OBSERVAÇÃO DE LÂMINA DE EPIMASTIGOTA DE Trypanosoma cruzi A. Descrever as diferenças morfológicas entre as formas evolutivas amastigota, epimastigota e tripomastigota de Trypanosoma cruzi, citando em qual hospedeiro elas são encontradas. Amastigota: forma arredondada, sem flagelo livre, encontrada dentro das células do hospedeiro vertebrado (mamíferos). Multiplica-se nos tecidos, causando destruição celular, principalmente no coração e no sistema digestivo. Epimastigota: forma alongada, com flagelo emergindo na região central do corpo celular. É encontrada no intestino do inseto vetor (barbeiro, Triatoma sp.), onde se replica. Tripomastigota: forma alongada e móvel, com flagelo livre e membrana ondulante, circula no sangue do hospedeiro vertebrado. É a forma infectante eliminada nas fezes do barbeiro e responsável pela transmissão ao humano. 7. OBSERVAÇÃO DE LÂMINA DE TAQUIZOITO DE Toxoplasma gondii A. Em que fase do ciclo evolutivo do Toxoplasma gondii, estão presentes os taquizoítos. E como eles podem infectar o ser humano? Os taquizoítos correspondem à fase de replicação rápida do Toxoplasma gondii durante a infecção aguda. Eles são altamente móveis e se disseminam rapidamente pelos tecidos. A infecção humana ocorre principalmente pela ingestão de oocistos presentes em alimentos ou água contaminados com fezes de gatos, consumo de carne crua contendo bradizoítos (cistos teciduais) ou pela transmissão transplacentária da mãe para o feto durante a gravidez. RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS ENSINO DIGITAL RELATÓRIO 02 DATA: ______/______/______ Referências BRASIL. Ministério da Saúde. Secretaria de Vigilância em Saúde. Guia de Vigilância Epidemiológica. 7. ed. Brasília: Ministério da Saúde, 2009. CACCIÒ, S. M.; BECK, R.; LALLE, M.; MARINCULIC, A.; POZIO, E. Giardia duodenalis assemblages A and B in humans: consistency and discrepancies between molecular and immunofluorescent assays. International Journal for Parasitology, v. 38, n. 12, p. 1529-1537, 2008. GARCIA, Lynne Shore. Diagnóstico Microbiológico. 5. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2016. NEVES, David Pereira. Parasitologia Humana. 13. ed. São Paulo: Atheneu, 2016. PRESCOTT, Lansing M.; HARLEY, John P.; KLEIN, Donald A. Microbiologia. 9. ed. Porto Alegre: Artmed, 2016. RIBEIRO, João C.; BACCI, Maria de Lourdes R. Microbiologia Básica. 2. ed. São Paulo: Manole, 2018. TORTORA, Gerard J.; FUNKE, Berdell R.; CASE, Christine L. Microbiologia. 12. ed. Porto Alegre: Artmed, 2017.