22GE aula09 analise com enzimas de restricao

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Análise com Enzimas de Restrição 
 
Enzimas de restrição são encontradas nas bactérias e são utilizadas para cortar o 
DNA de vírus que possam penetrar em seu citoplasma. São proteínas que 
reconhecem e cortam o DNA em pontos específicos, geralmente em sequências de 
4 a 8 pares de bases, chamados palíndromos. Elas reconhecem sequências curtas 
de bases nitrogenadas e clivam o DNA dentro ou na proximidade da sequência de 
reconhecimento. Diferentes enzimas de restrição reconhecem e clivam diferentes 
sítios de restrição. Elas são indispensáveis na análise da estrutura dos 
cromossomos, no sequenciamento de DNA, no isolamento de genes, na criação de 
moléculas novas de DNA que podem ser clonadas e em técnicas como RFLP. Uma 
característica marcante de muitos desses sítios de clivagem é que eles possuem 
uma dupla simetria rotacional, isto é, a sequência de reconhecimento é palindrômica 
e os sítios de clivagem são simetricamente posicionados. Há 2 tipos distintos de 
clivagens: a) Os dois cortes ocorrem no eixo de simetria da sequência específica, 
gerando extremidades abruptas. b) Os cortes são feitos simetricamente, porém fora 
do eixo de simetria, gerando extremidades coesivas. Esses dois tipos de clivagens e 
suas consequências estão mostrados nas figuras abaixo: 
 
 
Dois tipos de clivagem feitas por enzimas de restrição. As setas indicam os sítios de 
clivagem. As linhas pontilhadas representam o centro de simetria da sequência. 
 
 
 
 
 
 
 
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As setas indicam a ponte fosfodiester clivada pelas enzimas EcoRI e HindIII. A linha 
pontilhada indica o eixo de simetria do palíndromo. A linha laranja mostra o corte 
oblíquo das duas enzimas, que geram extremidades coesivas 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Ação da enzima de restrição EcoR1, com geração de extremidades colantes e união de 
fragmentos de DNA de origens distintas