PCC BIOLOGIA MOLECULAR

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PCC BIOLOGIA MOLECULAR 
 
 Aluna: Paula Freagapani Agner 
 RA 1623759 
 
Atividade 
A sequência abaixo foi obtida de um banco de dados que armazena 
sequências. Essa sequência é fita simples e está representada seguindo a 
convenção, ou seja, de 5’ → 3’. 
 
GCCTTCAATGGCAAGCGGTCTGGAATCCTACTTCTTGAATCGGCACGGTG
TCATT 
ACGGGCGGGGGCCAGAACAACGTCCCTGGACATCACACCTAGCCCGTGC
GACGG 
CGGAAACCTTCGCCGGCGCAGGCTTCGACGTGACCCTCATCGCGGAACC
CTCCCC 
CACCCCAGTGTTGGCGTGGCTGGTGCGCTCACGGCGAATGGACGTGGGC
GTGCAG 
ATCACCGCCTCGCACAATCGAATTCAGGACAACGGCTACAAGCTGTACCT
GGACG 
GCGGCTCTCAGCTGGTCTCCCCCGCCGACCGGCAGATCGAGGAGCACAT
TGCCGC 
CCAGCCAACTGACGCGGCGAAGATCCCCCGCTCCGAGGCGAAGTCTGTA
GACCT 
GTCCGTAGTCTCCGGCTATGTCACCGAGCTAAGTACCCTGGTGGCCACCG
GCCGC 
CAATCCGAGCTGGCGCCGCGGCGGAAGCTGAAGATCCTCTACACCCCC 
ATGCACG 
GCGTGGGCGGCAATGCCCTGGAGTGGGCCTTACGTGAATTCGGCTTCGG
CAACGT 
GCACGCGGTGGCCTCGCAGCGCTGGCCGGACCCGACCTTCCCGACTGTG
GACTTC 
CCCAACCCTGAGGAGCCGGGTGCCACCGACGCGCTGCTGGAAGAAGCCC
GCGCC 
ATCGATGCGGACCTGCTGATCGCC CTGGATCCGGATGCGGACC 
 
Sabe-se que a enzima de restrição BamHI corta um DNA fita dupla do seguinte 
modo e no seguinte sítio 
 
. 
 a) Quantos sítios de restrição existem nessa sequência? 
 
Cinco sítios de restrição 
 
b) Faça uma pesquisa sobre os tipos de cortes das enzimas de restrição. 
Descreva-os e classifique o corte da enzima BamHI. 
 
As enzimas de restrição são endonucleases que podem ser purificadas a partir 
de bactérias e que reconhecem sequências específicas, com 4 a 8pb, clivando 
em seguida as duas cadeias de DNA nesse mesmo sítio; essas sequências 
designam-se por sítio de restrição e são normalmente curtas sequências, isto é, 
a sequência do sítio de restrição é a mesma em ambas as cadeias quando estas 
são lidas no sentido 5→ 3. 
Os sítios de clivagem são, portanto, definidos pela sequência de 
nucleotídeos, e é portanto esta que define o tamanho dos fragmentos obtidos. 
As diferentes enzimas de restrição apresentam especificidade para diferentes 
sequências o que permite escolher a(s) enzima(s) de restrição necessárias para 
clivar um fragmento de DNA com um determinado gene. 
As enzimas de restrição são produzidas através das bactérias, como 
mecanismo de defesa, contra infecção por fagos, as endonucleases tipo II são 
enzimas de restrição pode gerar dois tipos diferentes de cortes, dependendo se 
eles cortam ambas as cadeias no centro da sequência de reconhecimento, ou 
cada fio mais perto de uma 
das extremidades da sequência de reconhecimento. O primeiro corte vai gerar 
“termina sem corte” sem saliências nucleotídeos. Este último, gera “pegajoso” ou 
“coesa” termina, porque cada fragmento resultante de DNA tem uma saliência 
que complementa os outros fragmentos. 
Ambos são úteis em genética molecular para a tomada de ADN recombinante e 
proteínas. 
 
 c) O gel abaixo apresenta, na canaleta 1, um padrão de peso molecular onde 
as bandas representam sequências com 50bp, 80bp, 200bp e 1000pb. 
Suponha que o DNA acima tenha sido clivado pela enzima PvuII e represente, 
na canaleta 2, os fragmentos resultantes do corte. 
 
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