CRISPR-Cas9 (NHEJ)

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Mecanismo de reparo NHEJ
CRISPR-Cas9
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É ativo em todo o ciclo celular;
Tem maior capacidade de reparo;
Não há exigência para modelo de reparo;
Possui maior velocidade de reparo;
Principal meio de reparo do DNA.
Introdução
1. Os finais clivados são reconhecidos pelo heterodímero Ku70/Ku80 
2. O Ku atua como scaffold e sinaliza para a kinase (DNA-PKcs) e duas subunidades de DNA ligase (XRCC4-ligase IV); juntamente com alguns fatoress acessórios (PAXX, XLF), esse complexo une as pontas do DNA.
3. O pareamento e o complexo que faz essa ligação é responsável pelo reparo.
Passos do Reparo
Deleções ou inserções no genoma podem criar novos padrões de leitura e/ou término prematuro da sequência gênica (Stop códon) que podem levar ao silenciamento do gene. 
As inserções e deleções resultantes do NHEJ são aleatórias e mudam de célula para célula.
Silenciamento Gênico
Distrofia muscular é causada por um gene.
Pode-se utilizar a Cas9 para fazer uma mutação a fim de silenciar o gene.
Distrofia Muscular
Cas9 é modificada e não consegue clivar sequências de DNA. Combinado com RNA guia vai clivar a região promotora. 
Esse complexo pode reduzir a atividade de transcrição e concomitantemente a expressão gênica.
Repressão transcricional (CRISPRi)