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17/06/2013 1 Núcleo Estrutura geral do núcleo Componentes do núcleo interfásico: •Envelope nuclear •Lamina nuclear •Cromatina •Nucléolo •Nucleoplasma Envelope nuclear Envelope Nuclear: •membrana nuclear dupla: MNI e MNE •presença de poros nucleares •MNE com continuidade com retículo endoplasmático •lamina nuclear aderida à MNI •ribossomas aderidos à MNE * FIs aderidos à MNE Microscopia eletrônica do núcleo: poros, lâmina, envelope 17/06/2013 2 Lâmina nuclear *rede fibrosa *proteínas lâminas A, B, C *proteínas dos filamentos intermediários (citoesqueleto) *fosforilação durante mitose Lamina nuclear: esquema Envelope nuclear durante ciclo celular Ligação entre citoesqueleto, membrana nuclear, lamina nuclear e nucleoesqueleto Interação entre desmina (FI) e a membrana nuclear externa anti-desmina Sonda DAPI Cromatina *Heterocromatina (constitutiva e facultativa) *Eucromatina 17/06/2013 3 Cromatina Eucromatina: * mais ativa em termos de transcrição (sintese de RNAm e RNAt) * menos condensada Heterocromatina: * menos ativa em termos de transcrição (sintese de RNAm e RNAt) * mais condensada Nucleoplasma água íons (Ca e Mg) nucleotídeos ATP e GTP enzimas sais Troca de material entre núcleo e citoplasma Que moléculas saem do núcleo e que moléulas entram? saem: RNAm, RNAt, RNAr, e sub-unidades ribossomais entram: proteínas nucleares Microscopia eletrônica dos poros nucleares Modelo do poro nuclear 17/06/2013 4 Translocação para o núcleo por sinalizador que expõe o sinal de localização nuclear (NLS) Experimento: bloqueio da translocação para o núcleo por mutação no NLS Translocação do fator de transcrição NFAT1 do citoplasma para o núcleo Controle: NFAT no citoplasma Tratamento com uma molécula extraída da membrana do T. Cruzi: NFAT no núcleo Controle com outra molécula: NFAT no citoplasma Nucléolo Funções: *síntese de RNA ribossomal *pré-montagem das sub-unidades ribossômicas Subunidades ribossomais 40 S e 60 S Polissomas ou poliribossomas Poli-ribossoma = vários ribossomas participando (junto com uma molécula de RNAm) da sintese de uma proteína 17/06/2013 5 Microscopia eletrônica de polissomas Endereçamento de proteínas Golgi REL RER núcleo membrana mitocondria Sintese proteica: * Poli-ribossomas livres no citoplasma * Poli-ribossomas aderidos à membrana do reticulo endoplasmático Destinos de proteínas (Protein sorting): I – poliribossomas livres no citoplasma: citoplasma, citoesqueleto, núcleo, mitocôndrias, peroxissomas. II – poliribossomas aderidos à membrana do RER: (Via de Secreção) RER, REL, complexo de Golgi, lisossomas, membrana plasmática, vesículas de secreção Esquema geral de endereçamento Proteínas sintetisadas em poliribossomas livres no citoplasma Presença na proteína de um pequeno peptideo sinalisador que será reconhecido na membrana externa da organela de destino final. Ex: nuclear localiztion signal (NLS) nas proteinas nucleares 17/06/2013 6 Direcionamento de proteinas da via de secreção (protein sorting) Como as proteínas são transportadas entre RE-Golgi-MP-MEC ? • dentro de vesículas • as vesículas andam sobre trilhos de microtúbulos • as vesículas fazem reconhecimento via receptores-ligantes (ex: clatrinas, COPI, COPII) Microtúbulos e MAPs motoras promovem transporte de vesículas nas células: quinesina e dineína dineína e quinesina possuem: 2 cabeças com atividade ATPásica e caudas de ligação à vesiculas região próxima ao núcleoregião próxima a membrana retrógrado
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