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BIOQUÍMICA CLÍNICA: Dosagens de Colesterol Total e Triacilglicerol Relatório da disciplina de Bioquímica Clínica, elaborado pelo grupo 1, solicitado pelo docente Jefferson. SÃO PAULO 2016 INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE INDICE 1. INTRODUÇÃO..................................................................................................1 2. OBJETIVOS......................................................................................................2 3. MATERIAIS E METODOS................................................................................3 3.1 DETERMINAÇÃO DE COLESTEROL TOTAL.................................................3 3.2 DETERMINAÇÃO DE TRIGLICÉRIDES..........................................................3 4. DISCUSSÕES...................................................................................................5 4.1 COLESTEROL TOTAL.....................................................................................5 4.1.2 LIPOPROTEINAS..........................................................................................5 4.2 TRIGLICÉRIDES..............................................................................................6 5. RESULTADOS...................................................................................................7 6. CONCLUSÃO.....................................................................................................8 7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS...................................................................9 1 1. INTRODUÇÃO Colesterol é um composto químico lipídico que integra com a membrana das células do organismo. A maior parte do colesterol é sintetizada no fígado (cerca de 70 a 80%) e é transportada no sangue por proteínas especiais, que são as lipoproteínas, encarregadas da distribuição deste colesterol por todas as células do corpo. O colesterol compõe as membranas celulares dos eucariotos que a proporciona fluidez as membranas impedindo a rigidez da membrana, é um precursor dos sais biliares, hormônios esteroides: progesterona, glicocorticoides, mineralocorticoides, androgênios e estrogênios e vitamina D. O colesterol pode ser de origem exógena: são provenientes através da dieta. Ou endógenas: são sintetizadas pelo próprio organismo. As lipoproteínas consistem em um conjunto composto por proteínas e lipídeos, organizados de modo a facilitar o transporte dos lipídeos pelo plasma sanguíneo. A estrutura básica das lipoproteínas é idêntica, o que varia é o tamanho e proporção entre os seus componentes. A fração proteica é composta por apoproteínas, enquanto que a parte lipídica é formada por colesterol, triglicerídeos e fosfoglicerídeos. 2 2. OBJETIVOS Através do sistema enzimático-colorimétrico, realizar a determinação quantitativa dos triglicérides e colesterol total em amostras de soro/plasma, por reação de ponto final. 3 3. MATERIAIS E MÉTODOS 3.1. Determinação de Colesterol Total Para o procedimento de determinação de colesterol total foram utilizados os seguintes materiais: 3 cubetas 1 Espectrofotômetro 3 tubos de ensaio 2 pipeta automática Amostra Padrão Reagente No processo de determinação de colesterol total foram realizados os seguintes procedimentos: Em um tubo de ensaio (tubo branco) foram pipetados 1,0mL de reagente; em seguida em um segundo tubo de ensaio (tubo teste) pipetou-se 0,01mL da amostra e 1,0ml do reagente, em um, outro tubo de ensaio (tubo padrão) adicionou-se 0,01ml do padrão e 1,0ml do reagente, após estes procedimentos, ambas as amostras foram homogeneizadas e incubadas por 10 minutos em banho-maria a 37°C. Após esse tempo, através do sistema colorimétrico (no feixe de luz visível) o aparelho foi acertado no zero com a amostra do tubo branco, em seguida foram realizadas as leituras das amostras para determinar as absorbâncias do teste e do padrão do colesterol total. 3.2. Determinação de Triglicérides Para o procedimento de determinação de triglicérides foram utilizados os seguintes materiais: 3 cubetas 3 tubos de ensaio 2 pipetas automáticas Amostra Padrão Reagente de cor Espectrofotômetro 4 Na determinação de triglicérides foram seguidos os seguintes passos: em um tubo de ensaio (tubo branco) foram pipetados 1000μL do reagente de cor, no tubo teste (segundo tubo) adicionou-se 10μL da amostra e 1000μL do reagente de cor, no terceiro tubo de ensaio (tubo padrão) foram adicionados 10μL do padrão e 1000μL do reagente de cor. Após esses processos ambas foram homogeneizadas e incubadas em banho-maria a 37°C durante 10 minutos, logo após o aparelho (espectrofotômetro) foi zerado com amostra do tubo branco e em seguida foi realizada a leitura d o teste e do padrão para obtenção de sua absorbância. 5 4. DISCUSSÕES 4.1. Colesterol Total O colesterol é o esterol mais abundante encontrado nos tecidos humanos. Compõem as lipoproteínas de baixa densidade (LDL) e membranas celulares sendo, também, substância precursora na síntese dos hormônios esteróides e ácidos biliares. (MOTA, 2009) Somente 25% do colesterol plasmático são provenientes da dieta, o restante é sintetizado pelo metabolismo, fundamentalmente, pelo fígado, a partir do acetil CoA. Uma parte do colesterol hepático é transformada em ácidos biliares excretados pela bile. Por outro lado, os sais de ácidos biliares formam complexos com o colesterol promovendo maior excreção deste composto. O colesterol plasmático ocorre tanto na forma livre (30% do total) como esterificado (70% do total). (MOTA, 2009) O colesterol plasmático é afetado tanto por fatores intraindividuais quanto por fatores interindividuais. As medidas da colesterolemia são influenciadas pela dieta (a quantidade e a composição da gordura da dieta afeta os níveis de colesterol plasmático), por exercícios físicos, pois quando executados de forma regular tendem a aumentar o colesterol HDL com pequenas reduções também do colesterol total plasmático; pela Idade, pois com a idade o colesterol plasmático eleva o que, provavelmente, esteja relacionado com a dieta, e também o sexo, pois as mulheres antes da menopausa o colesterol plasmático encontra-se diminuído e o colesterol- HDL consequentemente elevado. (MOTA, 2009) O colesterol é uma substância semelhante à gordura com função importante em muitos processos bioquímicos do organismo. Ele é um importante constituinte das membranas das células e das lipoproteínas que são as proteínas que transportam o colesterol no sangue. É também precursor dos ácidos biliares e de alguns hormônios e da vitamina D. (MORIGUCHI, 2016) Sem uma quantidade adequada de colesterol no sangue a vida não seria possível. Sua importância decorre do fato de que seu excesso no sangue é um dos principais fatores de risco da aterosclerose. Ele encontra-se distribuído por todo o corpo humano. A grande parte do colesterol circulante é produzida pelo fígado (cerca de 70%) e somente cerca de 30% provém da dieta. (MORIGUCHI, 2016) 4.1.2. Lipoproteínas 6 As lipoproteínas são classificadas de acordo com a sua densidade, sendode alta densidade ou de baixa densidade, as HDL (lipoproteínas de alta densidade), são chamadas de “bom colesterol” ou não aterogênicas, elas exercem importante papel na concentração do colesterol nos tecidos. As HDL também atuam no retorno do colesterol dos tecidos periféricos para o fígado, onde é removido na forma de ácidos biliares em processo denominado “transporte reverso do colesterol”. As HDL tem ação protetora contra a doença arterial coronária. Os níveis de colesterol HDL são dependentes do sexo e da idade. (MOTA, 2009) As lipoproteínas de baixa densidade (LDL) são vulgarmente chamadas de “colesterol ruim” e são formadas, principalmente, na circulação a partir das VLDL e, provavelmente, da degradação dos quilomícrons. É a partícula lipídica mais aterogênica no sangue, pois o colesterol LDL constitui ao redor de dois terços do colesterol total plasmático. Os níveis elevados de LDL estão diretamente associados no prognóstico de risco de aterosclerose coronariana. (MOTA, 2009) O colesterol total corresponde á somatória das suas frações: o HDL (lipoproteína de alta densidade), LDL (lipoproteína de baixa densidade) e VLDL (lipoproteína de densidade muito baixa) . Essas lipoproteínas, formadas por lipídeos e proteínas, fazem o transporte dos lipídeos no organismo. (GALANTE; DE ARAUJO, 2014) Além das lipoproteínas HDL e LDL também existem as IDL (lipoproteína de com densidade intermediaria), VLDL (lipoproteína de densidade muito baixa) e os quilomicrons (partículas lipoproteicas e menos densas). (DIAS GARCIA CARNEIRO et al., 2011) 4.2. Triglicérides São formados por três ácidos graxos e um glicerol, são sintetizados no fígado e no intestino e as formas mais importantes de armazenamento e transporte de ácidos graxos. O excesso de triglicérides no soro provoca neste uma coloração esbranquiçada, ate mesmo leitosa, denominada de lipemia. Os ácidos graxos são depositados nos tecidos musculares e adiposos, servindo assim como reserva energética. (GALANTE; DE ARAUJO, 2014) 7 5. RESULTADOS Na aula pratica foram realizadas as determinações do colesterol total e dos triglicérides em amostras de sangue. Para sabermos o valor de cada um tivemos que realizar os seguintes cálculos: Determinação do Colesterol Total: Absorbância do teste = 0,409 e absorbância do padrão = 0,490, para estas determinações foram utilizados esse valores na formula a seguir: 𝑐𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 (𝑚𝑔/𝑑𝑙) = 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑏â𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑜 𝑡𝑒𝑠𝑡𝑒 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏â𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑜 𝑝𝑎𝑑𝑟ã𝑜 𝑋200, ou seja, colesterol total (mg/dl)= 0,409 0,490 𝑥200 = 166,94𝑚𝑔/𝑑𝑙 Determinação do triglicérides: absorbância do teste= 0,362 e absorbância do padrão=0,708, para a determinação do triglicérides foi utilizado os cálculos a seguir, obedecendo a Lei de Lambert-Beer: 𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎çã𝑜 𝑑𝑜 𝑡𝑒𝑠𝑡𝑒 = 𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑎çã𝑜 𝑑𝑜 𝑝𝑎𝑑𝑟ã𝑜 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏â𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑜 𝑝𝑎𝑑𝑟ã𝑜 𝑥 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏â𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑜 𝑡𝑒𝑠𝑡𝑒, ou seja, 𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎çã𝑜 𝑑𝑜 𝑡𝑒𝑠𝑡𝑒 𝑚𝑔/ 𝑑𝑙 200 0,708 𝑥0,362 = 102, 25𝑚𝑔/𝑑𝑙. Determinação do colesterol LDL, foi determinado através da equação de Friedwald: colesterol total (mg/dl) – (HDLc + VLDLc), ou seja, 166,94mg/dl – (40mg/dl + 20,45mg/dl)= 166,94mg/dl – 60,45mg/dl= 106,49mg/dl. Determinação de Índice de Castelli I: 𝐶𝑜𝑙. 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝐻𝐷𝐿𝑐 , ou seja, 166,94𝑚𝑔/𝑑𝑙 40𝑚𝑔/𝑑𝑙 = 4,17𝑚𝑔/𝑑𝑙 Determinação do Índice de Castelli II: 𝐿𝐷𝐿𝑐 𝐻𝐷𝐿𝑐 , ou seja, 106,49𝑚𝑔/𝑑𝑙 40𝑚𝑔/𝑑𝑙 = 2,66𝑚𝑔/𝑑𝑙 Determinação do VLDLc: 𝑇𝐺 5 , ou seja, 102,25 5 = 20,45𝑚𝑔/𝑑𝑙 8 6. CONCLUSÃO De acordo com os valores obtidos de colesterol total e triglicérides em comparação com os valores de referencias: Colesterol total 166, 94mg/dl, desejável < 200mg/dl HDLc 40mg/dl, ótimo < 40mg/dl LDLc 106, 49mg/dl, ótimo < 100mg/dl Triglicérides 102, 25mg/dl, desejável < 150 Índice de Castelli I 4,17mg/dl, bom até 5,1mg/dl Índice de Castelli II 2,66, bom até 3,3mg/dl Podemos concluir que os níveis de colesterol total e triglicérides deste paciente encontram-se dentro dos limiares aceitos, podemos ainda concluir que através dos valores obtidos com os cálculos dos índices de Castelli, que este individuo não apresenta risco coronariano. 9 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS DIAS GARCIA CARNEIRO, Andreza et al. Lipoproteinas. 2011. Disponível em:<http://pt.slideshare.net/andrezadias965/lipoprotenas-26798614>. Acesso em: 06 maio 2016. GALANTE, Fernanda; DE ARAUJO, Marcos Vinicius Ferreira (Org.). Fundamentos de bioquímica: para universitários, técnicos e profissionais da área da saúde. 2. ed. São Paulo: Rideel, 2014. MORIGUCHI, Emílio. DISLIPIDEMIAS. 2016. Disponível em: <https://www.abcdasaude.com.br/geriatria/dislipidemias>. Acesso em: 06 maio 2016. MOTA, Valter Teixeira. Bioquimica clinica para o laboratorio: principios e interpretação. 5. ed. Rio de Janeiro: Medbook,2009.
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