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19/08/2016 1 REPLICAÇÃO Profa. Dra. Ana Cristina P. Veiga-Menoncello Células filhas Crescimento celular e replicação dos cromossomos Divisão celular Segregação cromossômica Ciclo Celular A replicação do DNA A replicação do DNA necessita de várias atividades enzimáticas que devem agir de forma integrada e sequencial atuando de maneira coordenada nos estágios de início, alongamento e término. O conjunto de proteínas que atuam na replicação é denominado “Replissomo” 19/08/2016 2 Estrutura do DNA Blocos de construção do DNA Fosfato açúcar Fosfato açúcar Nucleotídeo Esqueleto Açúcar - Fosfato Dupla hélice do DNA Fita S Fita S’ Dupla hélice do DNA parental Fita S molde Fita S’ nova Fita S’ molde Fita S nova 19/08/2016 3 Fita iniciadora Fita molde Desoxirribonucleosídeo trifosfatado a ser incorporado Extremidade 5’ Extremidade 3’ Extremidade 5’ • Replicação semiconservativa e semidescontínua • DNA – Polimerases • Proteínas auxiliares (helicases, proteínas SSB, primases, ligase e topoisomerases) • Origem de replicação • Bolha de replicação • Forquilha de replicação • Adição de nucleotídeos é sempre no sentido 5’-P para 3’-OH (5’ 3’) • Fita líder ou contínua • Fita atrasada ou descontínua – fragmentos de Okazaki Características da Replicação do DNA Origens de replicação em procariotos • Sequências ricas em A e T Origens de replicação em eucariotos • Sequências ricas em A e T em fungos e leveduras, denominadas “sequencias autônomas de replicação ARS” • Sítio de ligação para proteínas iniciadoras; complexo denominado ORC (Complexo de reconhecimento de origem) 19/08/2016 4 Telômero Origem de replicação Centrômero Intérfase Origem de replicação Início da replicação Replicação completa 2 moléculas-filhas de DNA Proteína Primase Etapa Inicial da Replicação em Eucariotos Posicionamento de helicases e SSB Origem de replicação Local de abertura da hélice do DNA Síntese do iniciador (primer) de RNA Etapa de Alongamento da Replicação DNA Polimerases DNA Polimerases + DNA ligase Início da síntese da fita líder Primers de RNA iniciam a síntese da fita descontínua Fita descontínua da forquilha 1 Fita contínua da forquilha 2 Fita descontínua da forquilha 2Fita contínua da forquilha 1 Forquilha 1 Forquilha 2 19/08/2016 5 Ação da enzima DNA Polimerase Molde da fita líder Fita líder recém- sintetizada DNA polimerase sobre a fita líder DNA primase Hélice do DNA original DNA helicase Molde da fita descontínua Fita recém- -sintetizada DNA polimerase sobre a fita descontínua (terminando um fragmento de Okazaki) Novo fragmento de Okasaki Primer de RNA Proteína ligadora do DNA simples fita SSB Cinta deslisante e montador de cinta Problema do Enrolamento Ação de topoisomerase Rápida rotação da hélice é necessária Molde da fita descontínua DNA polimerase na fita-líder Molde da fita líder Etapa de Término da Replicação em eucariotos Fita original Fita descontínua incompleta, recem-sintetizada Ligação da telomerase Direção da síntese do telômero Telomerase com molde de RNA ligado A Telomerase alonga a extremidade 3’ (síntese de DNA a partir de um molde de RNA) A DNA polimerase completa a síntese da fita descontínua (síntese de DNA a partir de um molde de DNA) DNA Polimerase
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