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GENÉTICA DE MICRO- ORGANISMOS GENOMA TODA a informação genética contida em uma célula Cromossomos Estruturas que transporta fisicamente a informação hereditária, contém os GENES Segmentos de DNA que codificam para os produtos funcionais Relembrando... A estrutura do DNA Outros conceitos importantes Genótipo: TODA a composição genética de um organismo. Fenótipo: Expressão do genótipo Cromossomo Procarioto X Cromossomo Eucarioto Procarioto Eucarioto 1 por célula Mais de 1 por célula DNA fita dupla circular DNA fita dupla linear Não é envolto por membrana nuclear - Envolto por membrana nuclear Histonas - like - proteínas - Histonas - proteínas - Pequeno - Grande (10x maior) Plasmídeos Na maioria ausentes Procariotos X Eucariotos DNA E. coli 1mm de comprimento= 10 vezes maior que toda a célula Plasmídeos Moléculas de DNA, dupla fita Autorreplicantes, Circulares, 1 a 5% do cromossomo bacteriano. • Fator F: plasmídeo conjugativo • Plasmídeos de dissimilação •Plasmídeos: produção de toxinas e produção de bacteriocinas • Fatores R: fatores de resistência Topoisomerase: desenovelamento do DNA Helicase REPLICAÇÃO DO DNA - Semiconservativa - Sentido síntese 5’ – 3’ TRANSCRIÇÃO Sentido se síntese: 5’ – 3’. CÓDIGO GENÉTICO Em procariotos código de iniciação é a formilmetionina Degeneração: 64 códons, 20 aminoácidos TRADUÇÃO TRADUÇÃO TRANSCRIÇÃO E TRADUÇÃO SIMULTÂNEA EM BACTÉRIAS Alterações fenotípicas Alterações genotípicas Variabilidade genética em micro-organismos Recombinação gênica Mutações Transferência gênica Alterações genotípicas 1)- Mutação – geralmente resultante de deleção, inserção ou substituição de um ou mais nucleotídeos. - Resultam em pequenas alterações genéticas (uma em vários milhões de células) . 2)- Recombinação – troca de genes entre duas moléculas de DNA. - Provoca alterações mais significativas. Mutações Gene alterado= proteína (enzima) alterada Desvantagem: Enzima inativa (sequencia de aa alterada) Pode ser letal para a célula Vantagem: gene MUTANTE = Características que beneficiem a célula Mutantes resistentes crescendo dentro de uma zona de inibição célula ou organismo com gene não alterado – Selvagem frequência baixa – ao acaso/espontaneamente Agentes mutagênicos Tipos de Mutação Mutação de ponto (substituição de bases): Neutra: aa igual (código degenerado) Errônea (missense): aa diferente Ex: anemia falciforme (alteração no gene da globina) • Sem sentido (nossense): proteína incompleta – stop códon. Tipos de Mutação Deslocamento do quadro de leitura (tradução): adição ou perda de um ou mais nucleotídeos, gerando proteínas não funcionais Ter uma boa mãe ... Adição de um nucleotídeo: d Deleção de um nucleotídeo: t Ter umd abo amã e.. Eru mab oam ãe. Resultado: sequência de aa alterados e consequentemente uma proteína inativa; Ocorrem ao acaso, espontaneamente Agentes mutagênicos todo agente químico ou físico que torne a frequência de mutação maior que a espontânea: indução da mutação Químico: substâncias que reagem com o DNA - Nitrato de sódio, fenol e compostos fenólicos, glutaraldeído, óxido de etileno, formaldeído, ácido nitroso (HNO3), aflatoxina (Aspergillus flavus)... . Análogos de nucleosídeos: AZT. Físico: Radiações (Luz UV), raios X, sol Identificação de Mutantes • Seleção direta: detecção de células mutantes em detrimento das células parentais não mutadas. - adição de antibiótico ao meio – seleção de resistentes - adição de vírus – resistência ao vírus Mutação ocorre ANTES da exposição ao antibiótico ou vírus Seleção indireta: placas réplica Seleciona uma célula que não pode realizar uma função, que perdeu a capacidade Ex: cél. bacteriana que perdeu a capacidade de sintetizar o aa histidina Mutante auxotrófico: Micro-organismo com necessidade nutricional ausente na cél. parental Placa réplica Recombinação gênica É troca de genes entre duas moléculas de DNA, para formar novas combinações de genes em um cromossomo Eucariotos: ocorre entre dois cromossomos homólogos: MEIOSE (fenômeno crossing-over). Procariotos: -Transformação, conjugação e transdução - Transferência gênica vertical: descendentes - Transferência gênica horizontal: bactérias As bactérias não-encapsuladas vivas absorveram material genético das encapsuladas mortas pelo calor e passaram a produzir cápsula, o que lhes conferiu a capacidade de causar doença. As bactérias não-encapsuladas foram transformadas em encapsuladas. Transformação - célula receptora adquire DNA solúvel no meio (decorrente da lise celular) - célula competente – sofreu alterações na parede celular que as tornaram permeavéis a grandes moléculas de DNA Conjugação é um processo de transferência de genes que requer o contato célula-célula: plasmídeo F. o DNA é transferido diretamente de uma célula doadora (F+ ) para uma célula receptora (F- ). Bactérias Gram negativas: plasmídeos transportam genes que codificam para a síntese de pili sexuais. Bactérias Gram positivas: produção de moléculas aderentes de superfície que fazem as células entrarem em contato direto umas com as outras. Transdução DNA bacteriano é transferido de uma célula doadora para uma célula receptora através de um virus. Fago transdutor – bacteriófago Transdução generalizada: ciclo lítico – adsorção, penetração, replicação, montagem e liberação - pode haver o empacotamento de fragmentos de DNA da célula hospedeira, gerando partículas denominadas partículas transdutoras, que correspondem ao capsídeo viral contendo em seu interior DNA bacteriano. TRANSDUÇÃO GENERALIZADA TRANSDUÇÃO ESPECIALIZADA - Transposons São elementos que mudam de posição dentro do genoma. Podem estar presentes no cromosssomo ou no plasmídeo. Também chamados de “genes saltadores”. Podem afetar a expressão de outros genes – baixa frequência 10-5 a 10-7 por geração. Não se auto-duplicam. Molécula de DNA dupla fita com extremidades repetidas e invertidas;
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