Seminarios Genética 2

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Citogenética Classica e Citogenética Molecular
Introdução:
1591-1608 – primeiros contatos com a citologia;
Sachariassen Jansen desenvolve o microscópio composto;
Verdadeiro marco inicial foi em 1663, com o matemático e microscopista Hooke;
2 séculos para o surgimento da teoria celular;
Desde Mendel, a genética e citologia colocaram os conhecimentos em uma área em comum, Citogenética;
Expandiu-se para diversos áreas da biologia:
Taxonomia;
Bioquímica;
Medicina Clinica;
Melhoramento animal;
Melhoramento Vegetal;
Englobamento de todos os estudos em torno de cromossomos :
Condensados ou descondensados;
Em conjunto ou isolados;
Toda a morfologia cromossômica;
Organização;
Função e replicação;
Variações cromossômicas;
Evolução.
A citogenética é uma das fontes geradoras de questionamentos que impulsionaram a genética molecular, embasando as áreas de tecnologia de ponta, como a biotecnologia e a engenharia genética, permanecendo junto às mesmas, como um dos recursos de avaliação em várias pesquisas dessa natureza.
Cromossomos
São filamentos espiralados de cromatina, compostos pela associação de DNA e proteínas;
Estrutura: Telômero, Centrômero, Satélite;
Divididos em sexuais e autossomos .
Estrutura Cromossômica 
Sexuais e Autossomos 
Os cromossomos de uma célula são facilmente analisados e estudados na fase de metáfase , quando estão condensados ao máximo e seus genes são transcritos em baixos níveis.
Citogenética Clássica
Desenvolveu-se principalmente a partir do início do século passado e seu crescente progresso acompanhou o aprimoramento de técnicas e equipamentos de microscopia;
Define -se como a ciência que estuda os componentes celulares portadores da informação genética, cromossomos. 
Técnicas de bandeamentos
Diferencial
Seletivo
Técnica :
Amostra de sangue;
Centrifugação (sedimentação dos leucócitos) ;
Meio de cultura e estimulação da divisão com a adição de um agente mitogênico ;
Incubação (multiplicação celular);
Adição de solução de colchicina;
Células paradas na fase de metáfase acumulam-se na cultura.
Adição de solução hipotônica para tumefar as células ,lisando e liberando os cromossomos, mantendo-os intactos.
Cromossomos são fixados e espalhados em laminas, corados por varias técnicas.
Bandeamento Diferencial :
Bandas Q : diferenciação longitudinal, baseando na coloração dos cromossomas pela mostarda de quinacrina e fluorescência emitida usando luz ultravioleta;
Bandas G: Os cromossomos são tratados com tripsina (desnaturação de proteínas) e corados com Giemsa. Cada par de cromossomos cora-se num padrão típico de bandas claras e escuras.
Mais Usada
Bandas R: Os cromossomos recebem pré- tratamento com calor antes da coloração Giemsa. Nesse caso, as bandas claras e escuras resultantes (bandas R) são o inverso das produzidas por bandeamento G.
Bandeamento Seletivo : 
Bandas C: os cromossomos são tratados com solução de hidróxido de bário e corados com Giemsa. Com este método, são coradas regiões específicas em que o cromossomo apresenta DNA altamente repetitivo, como nas regiões dos centrômeros e em outras regiões cromossômicas correspondendo à heterocromatina constitutiva.
Bandas T: marcam as regiões teloméricas dos cromossomos. Telômero é a ponta ou a extremidade terminal de cada cromossomo. Tem a função de manter a estabilidade e a integridade cromossômicas.
Bandeamento C de roedor
Cariótipo de Hamster com telômeros corados
Bandas NOR: os cromossomos são corados em suas regiões satélites, ou seja, na região organizadora do nucléolo (constrição secundária). A prata (Ag) é um dos corantes mais usados.
Cariótipo de Roedor com coloração NOR
Aplicações
Uma das principais aplicações do bandeamento cromossômico é a identificação de cromossomopatias, que são definidas como quaisquer síndromes causadas por anomalias cromossômicas.  
Anomalias Cromossômicas
Numéricas:
 Ocorrem com a mudança da quantidade de cromossomos.( aneuploidia e poliploidia)
Estruturais: 
Ocorrem quando o cromossomo se quebra e se reconstitui logo em seguida.
Síndrome de Down
Síndrome de Edwards
Síndrome de Patau
Síndrome de Klinefelter
Síndrome de Turner
Síndrome do duplo-Y
Síndrome do poli-X
síndrome de cri-du-chat
Citogenética Molecular
A Citogenética Molecular nos anos 90 foi utilizada como exame auxiliar da citogenética convencional, por permitir na amniocentese um resultado rápido em 48 horas sobre as principais cromossomopatias associadas à idade materna elevada e à translucência nucal aumentada.
Estudo dos cromossomos, de sua estrutura e sua herança aplicado à prática da genética médica, analisando os cromossomos e seus cariótipos mostra que o procedimento de analise é cada vez mais importante em várias áreas da medicina.
Marcação de cromossomos ou segmentos cromossómicos 
Em algumas situações, má formação cromossômica impede a identificação do complemento cromossômico
FISH(fluorescent in situ hybridization);
 CGH (hibridação genômica comparativa);
 
SKY ou FISH espectral.
FISH
(fluorescent in situ hybridization)
Uso de sondas, sequencia de DNA ligadas a fluorocromos 
DNA complementar
Sondas de painting:
ligam-se a todas as posições de um cromossomo específico. 
Sondas centroméricas :
permitem identificar alterações a nível do centrómero
Sondas de sequência única (génicas):
 permitem identificar micro-deleções
Sondas subteloméricas:
 permitem identificar translocações atípicas 
CGH 
(hibridação genómica comparativa)
Técnica utilizada para fazer um screening de todo o genoma;
Detectar diferenças no número de cópias de qualquer sequência de DNA.
Utilizada para estudos de alterações submicroscópicas;
Ganhos de DNA e amplificação
Perdas de DNA e deleções
SKY ou FISH espectral 
Detecção simultânea dos cromossomos em metáfase;
Sondas de painting
Spectral karyotyping of the M35/01 melanoma cell line. A) A representative metaphase spread shown as an inverted DAPI image. B) SKY spectral image of chromosomes. C)Spectral classification of melanoma cell line M35/01 (each chromosome was assigned a pseudo color according to its measured spectrum)
Artigo:
Bibliografia 
https://www.bioscience.org/2006/v11/af/1927/fulltext.php?bframe=figures.htm
http://www.cnpt.embrapa.br/biblio/do/p_do85.pdf
http://www.fleury.com.br/medicos/educacao-medica/manuais/manual-hematologia/pages/a-citogenetica-classica-e-molecular.aspx
http://www.fciencias.com/2014/07/13/tecnicas-de-analise-cromossomica
http://www.ciencianews.com.br/index.php/publicacoes/artigos-cientificos/aplicacoes-da-citogenetica-e-da-genetica-molecular-em-leucemias/
http://laboratoriogene.info/DXPN/QF-PCR.htm