HISTOLOGIA Técnicas Histológicas

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TÉCNICAS HISTOLÓGICAS
Prof. Daniel Machado
danielescorsim@yahoo.com.br
UniFOA
Centro Universitário de Volta Redonda
DISCIPLINA: HISTOLOGIA
 Preparação dos tecidos analisados através da microscopia de luz; 
 O exame ao microscópio é feito geralmente por luz transmitida;
 A luz deve atravessar o objeto a ser examinado;
 É necessária a obtenção de fragmentos dos tecidos estudados;
 Os fragmentos são coletados em lâminas muito finas e transparentes.
TÉCNICAS HISTOLÓGICAS
oculares
objetivas
mesa
Micrométrico 
Macrométrico 
Luz incidente
base
MICROSCÓPIO ÓPTICO
luz
MICROSCÓPIO ÓPTICO
MICROSCÓPIO ELETRÔNICO
Etapas das técnicas histológicas
 Obtenção do material
 Fixação dos tecidos
 Desidratação
 Inclusão
 Microtomia (corte em fatias finas)
 Coloração
 Montagem de lâminas
VISÃO GERAL DO PROCESSAMENTO DE TECIDOS
Os tecidos devem ser preparados de modo 
a preservar sua estrutura original. 
1. OBTENÇÃO DO MATERIAL
- Retirada de pequenos pedaços dos órgãos a serem analisados 
VISÃO GERAL DO PROCESSAMENTO DE TECIDOS
- Fixar os tecidos
- Mínimo de dano aos tecidos 
- Varia de acordo com o material usado
VISÃO GERAL DO PROCESSAMENTO DE TECIDOS
2. FIXAÇÃO
- Preserva as estruturas do tecido
- Impede a proliferação de microorganismos
- Mantém as estruturas próximas a realidade 
Glutaraldeído, formol e formaldeído
Fixador
3. DESIDRATAÇÃO , INCLUSÃO E MICROTOMIA 
 A espessura do tecido a ser analisado na lâmina deve ser delgado
 O material deve ser atravessado por um raio de luz
 Os tecidos devem ser preparados para receber um meio “endurecedor”
VISÃO GERAL DO PROCESSAMENTO DE TECIDOS
Desidratação:
 
- Imersão numa bateria de soluções alcoólicas (conc. crescentes)
- Substituição da água pelo álcool
VISÃO GERAL DO PROCESSAMENTO DE TECIDOS
Diafanização: 
- Imersão numa bateria de soluções com xilol
- Substituição do álcool pelo xilol
VISÃO GERAL DO PROCESSAMENTO DE TECIDOS
Inclusão em parafina:
 
- Imersão numa bateria de parafina líquida
- Substituição do xilol pela parafina líquida
Emblocamento: 
- Resfriamento da parafina líquida
- Endurecimento do material biológico
- Pronto para a microtomia (cortes ultrafinos)
MICRÓTOMO
VISÃO GERAL DO PROCESSAMENTO DE TECIDOS
Hematoxilina e Eosina
Hematoxilina (básico) – afinidade por regiões ácidas da célula
Eosina (ácido) – afinidade por regiões básicas da célula
VISÃO GERAL DO PROCESSAMENTO DE TECIDOS
4. COLORAÇÃO 
Os cortes apresentam-se incolores após a microtomia
 Coloração visa contrastar as estruturas teciduais
 A maioria dos corantes age de acordo com as interações entre subst. 
ácidas ou básicas
COLORAÇÕES HISTOLÓGICAS – Hematoxilina-Eosina
Tricromo de Gomori Tricromo de Masson 
COLORAÇÕES HISTOLÓGICAS
PAS
Picrosirius
COLORAÇÕES HISTOLÓGICAS
- Microscopia de luz
- Microscopia de contraste de fase 
- Microscopia Confocal 
- Microscopia de Fluorescência
Métodos em Microscopia
MICROSCOPIA DE CAMPO CLARO
Fixação
Desidratação
Inclusão
Microtomia
Montagem dos cortes
Coloração
Lamínula
MÉTODOS EM MICROSCOPIA
 Microscopia de Contraste de fase
- Sistema de lentes
- Luz muda de velocidade em estruturas com 
índice de refração diferentes
- Estruturas mais claras e escuras
- Células vivas
Espécimes transparentes????
CONTRASTE DE FASE
CONTRASTE DE FASE
MÉTODOS EM MICROSCOPIA
 Microscopia confocal
- Plano focalizado de cada vez
- Reconstrução tridimensional
Imagens NÃO são compostas de 1 plano
Superposições em foco simultâneo
Vasos sanguíneos da retina a partir do disco óptico
5 dias após a fertilização
Glicogênio em neurônios
• Direta: Anticorpo fluorescente (fluorocromo)
 
• Indireta: Adicionar um fluorocromo
 Anticorpos → ligação específica ao antígeno 
 Localizar moléculas-alvo
Microscópio de fluorescência
Filtros seletivos → apenas a luz do corante usado 
é detectada
 Microscopia Fluorescência
MÉTODOS EM MICROSCOPIA
MICROSCOPIA DE FLUORESCÊNCIA
# Imunocitoquímica Direta
Reação antígeno-anticorpo auxiliando a localização de 
estrutura celulares 
Marcação direta
MICROSCOPIA DE FLUORESCÊNCIA
 Imunocitoquímica:(anticorpo secundário)
Marcação indireta
Flurocromo verde (1 canal) Vermelho e amarelo (2 canais)
Glomérulo: Anti-IgM
T. cruzi
C. botulinum
Imunohistoquímica: receptores de estrogênio
Imunomarcação HER2
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