Pratica de Curva glicêmica

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GLICOSE 
 Método: Enzimático (glicose oxidase/peroxidase) – Trinder
 Bibliografia: Trinder, P. Determination of glucose in blood using glicose oxidase with na alternative oxygen acceptor. Ann. Clin. Biochem. 6:24-7, 1969.
 Material biológico: plasma, soro, líquor, líquidos ascíticos, sinovial e pleural. Anticoagulante de escolha = fluoreto da Bioclin (inibidor da glicólise).
 Princípio:
Glucose + O2 + H2O ácido glucônico + H2O2
2 H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol antipirilquinonimina + 4H2O
A intensidade da cor vermelha formada é diretamente proporcional à concentração de glicose presente na amostra.
 Reativos:
a. Reativo de cor: tampão 100 mmol/L, pH 7,4; fenol≥ 1mmol/L; glicose oxidase ≥ 20 KU/L; peroxidase ≥ 2000 U/L; azida sódica 15 mmol/L e 4-aminoantipirina ≥ 300 umol/L. Conservar entre 2-8 ºC.
b. Padrão de glicose (100 mg/dL): conservar entre 2-8 ºC.
 Técnica:
Em tubos de ensaio marcados Amostra, Controle, Padrão e Branco pipetar:
	
	Amostra
	Padrão
	Branco
	Reativo de cor
	1,0 mL
	1,0 mL
	1,0 mL
	Amostra
	10 µL
	---
	---
	Padrão
	---
	10 µL
	---
	Água destilada
	---
	---
	10 µL
Misturar vigorosamente e colocar os tubos no Banho-Maria a 37ºC durante 10 minutos. Ler em 505 nm.
 Observações:
a. O método obedece a Lei de Lambert Beer até 500 mg/dL.
b. O produto colorido é estável por 60 minutos.
c. O plasma contendo 2,0 mg de fluoreto/mL de sangue é estável durante 24 horas à temperatura ambiente e 48 horas à 4ºC . Se usar soro, o mesmo deve ser separado das células o mais rápido possível.
d. Ácido ascórbico (resultado falsamente diminuído) e hipoclorito (resultado falsamente aumentado) interferem na dosagem de glicose por este método.
e. Valores de bilirrubina até 8 mg/mL, hemoglobina até 160 mg/mL e triglicérides até 750 mg/dL não produzem interferências significativas. Acima destes valores realizar o Branco Amostra; isto é, misturar 1,0 mL de NaCl 150 mmol/L com 10 µL de amostra. Medir a absorbância em 505 nm, acertando o zero com água destilada. Diminuir a absorbância assim obtida do teste e calcular a concentração.
Cálculo:
Absorbância Amostra x conc. Padrão = mg/dL
Absorbância Padrão
 Valores de referência:
Plasma ou soro
Glicemia em jejum: 70 a 99 mg/dL
(soro ou plasma colhido após jejum de 10 a 16 horas)
Glicemia pós-prandial: <140 mg/dL
(determinação da glicemia 2 horas após a ingestão de alimentos contendo 100 g de carboidratos)
Glicemia pós-sobrecarga: <140 mg/dL
(determinação da glicemia 2 horas após a ingestão de uma dose padronizada de 75 g de glicose).
Líquor: 40 a 70 mg/dL ou 2/3 da glicemia
 Interpretação clínica:
	
	Glicemia em jejum
	Normal
	<100 mg/dL
	Intolerante à glicose
	≥ 100 e <126 mg/dL
	Diabético
	≥ 126 mg/dL em 2 ocasiões distintas
 Patologia clínica:
Hiperglicemia: Diabetes Mellitus primário, Diabetes Mellitus secundário (hipertireoidismo, síndrome de Cushing, acromegalia, feocromocitoma), intolerância à glicose.
Hipoglicemia: Hipoglicemia de jejum – insulinoma tumores extra-hepáticos, insuficiência da supra-renal, insuficiência hipofisária, doença hepática grave, alcoolismo.
 Hipoglicemia pós-prandial: hipoglicemia alimentar, funcional ou reativa, Diabetes Mellitus na fase inicial.
TESTE ORAL DE TOLERÂNCIA À GLICOSE (GTT), TESTE DE SOBRECARGA ORAL À GLICOSE OU CURVA GLICÊMICA
1. Recomendações (preparo do paciente):
a. 3 dias antes da realização do teste o paciente deve ingerir pelo menos 150 g de carboidratos por dia.
b. a atividade física deve ser aquela considerada normal para o indivíduo.
c. o teste não deve ser realizado em pacientes acamados ou hospitalizados.
d. não ingerir álcool na véspera.
e. o teste deve ser realizado pela manhã com o paciente em jejum de 10 a 16 horas (ingestão de água é permitida)
f. o paciente não deve estar fazendo uso de medicamentos que interfiram no metabolismo de carboidratos e se tiver com infecção deverá comunicar.
g. durante o teste o paciente deve permanecer em repouso e sem fumar.
h. não usar fitas reagentes para o diagnóstico pois não são tão precisas.
2. Dose de sobrecarga de glicose:
a. 75 g para homens e mulheres não-grávidas.
b.1,75 g/Kg de peso de crianças até 12 anos (até no máximo de 75 g)
c. 100 g para gestantes.
3. Procedimento:
3.1. para homens, mulheres não grávidas e crianças:
a. coletar amostra de sangue em jejum. 
b. administrar, por via oral, uma solução contendo 75 g (adulto) ou 1,75 g/kg de peso (criança) de glicose dissolvida em 300 mL de água aromatizada, preferencialmente com limão. Ingerir num tempo máximo de 5 minutos.
c. aos 30, 60, 90 e 120 minutos após a sobrecarga coletar amostras de sangue.
d. aos 60 e 120 minutos coletar amostras de urina (a coleta não é obrigatória).
e. determinar a concentração de glicose no sangue e pesquisar a glicosúria.
3.2 para gestantes:
3.2.1 Teste de triagem:
a. administrar, por via oral, 50 g de glicose.
b. coletar amostra de sangue 1 hora após a sobrecarga.
3.2.2.Teste diagnóstico:
a. coletar amostra de sangue em jejum
b. administrar, por via oral, 100 g de glicose dissolvida em 300 mL de água. Ingerir num tempo máximo de 5 minutos.
c.coletar amostras de sangue nos tempos de 1,2 e 3 horas após a sobrecarga.
d.determinar a concentração de glicose mas amostras de sangue.
4. Critérios para interpretação da curva:
Segundo ADA ( Associação Americana de Diabetes):
a. para adultos (não gestantes e crianças):
	
	Glicemia em jejum
	Teste de tolerância oral à glicose (aos 120 minutos)
	Normal
	< 100 mg/dL
	< 140 mg/dL
	Intolerante
	≥ 100 e < 126 mg/dL
	≥ 140 e < 200 mg/dL
	Diabetes Mellitus
	≥ 126 mg/dL
	> 200 mg/dL
b. para gestantes 
	
	Teste de triagem (50 g)
	Teste diagnóstico (100 g)
	Jejum
	---
	95 mg/dL
	1 hora
	140 mg/dL
	180 mg/dL
	2 horas
	---
	155 mg/dL
	3 horas
	---
	140 mg/dL
Teste de triagem: > 140 mg/dL realizar o teste oral de sobrecarga à glicose.
Diagnóstico de Diabetes gestacional: quando pelo menos 2 dos valores obtidos no teste diagnóstico forem atingidos ou ultrapassados.