A tecnologia do DNA recombinante

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A tecnologia do DNA recombinante
 
Cada  fragmento de DNA, que  foi  clivado e separado do  resto do material genético,  contém um ou mais
genes.  Lembre­se  que  cada  gene  origina  uma  proteína,  portanto  ao  estudarmos  o  gene  estamos
estudando a proteína que ele codifica.
Mas o que devemos fazer para estudar o gene?
Devemos  introduzi­lo no material genético (no DNA) de um hospedeiro para que ocorra a transcrição do
gene, em mRNA, e a tradução em proteína.
O hospedeiro  é  um  organismo  que  se  multiplica  (se  reproduz)  rapidamente,  como  por  exemplo,  as
bactérias.  Quando  as  bactérias  se  reproduzem  por  bipartição  elas  transmitem  ao  seus  “filhos”  o  seu
material  genético,  portanto  se  neste material  conter  o  fragmento  de  DNA  de  estudo,  em  pouco  tempo
teremos milhões de bactérias com o gene.
 
O  plasmídio  é  o  material  genético  circular  não  ligado  ao  cromossomo  que  fica  espalhado  pelo
hialoplasma das bactérias. Ele sofre o mesmo processo do DNA cromossomal de transcrição e tradução,
além de, se multiplicar a cada divisão celular, passando uma cópia para cada célula “filha”.
 
 
O plasmídio é  retirado das células bacterianas para que se possa  inserir o gene de estudo, para depois
recolocá­lo na bactéria.
 
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Para entendermos melhor vamos conhecer esse processo passo a passo (acompanhe na figura):
1. Os pesquisadores querem estudar um gene humano que produz uma proteína que não se sabe a
função.
2. Os  pesquisadores  “recortam”  (utilizando  enzimas  de  restrição),  do  DNA  humano,  o  gene  de
interesse.
3. Esse  fragmento de DNA contendo o gene é multiplicado por PCR para obtermos várias  cópias do
mesmo fragmento (ou da mesma informação).
4. A mesma enzima que clivou o gene do DNA humano é utilizada para clivar o plasmídio bacteriano.
Lembre­se que o fragmento de DNA, ao ser clivado, gera pontas adesivas que são complementares
ao plasmídio se este for clivado com a mesma enzima.
5. A  seguir  o  plasmídio  clivado  é misturado  com  os  fragmentos  de  DNA  (contendo  o  gene)  e  uma
enzima  chamada  ligase  “cola”  os  fragmentos  ao  plasmídio,  produzindo  o  chamado  DNA
recombinante. Isso feito, o DNA recombinante é introduzido em uma bactéria hospedeira.
6. A bactéria hospedeira é colocada em um meio nutritivo seletivo, apenas aquelas que possuem o
DNA recombinante crescem, formando colônias. Após muitas gerações de bactérias, o produto da
expressão  dos  genes,  as  proteínas  humanas,  são  purificadas  das  bactérias  (são  separadas  das
proteínas das bactérias).
 
 
Esse método produz uma grande quantidade de proteínas humanas possibilitando assim, seu
estudo.
 
 
 
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