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PRINCÍPIOS DE BIOLOGIA MOLECULAR MICROBIANA MICROBIOLOGIA BÁSICA PROF.MARIANA CALDEIRA RODRIGUES Por quê somos tão diferentes?? Por quê somos tão diferentes?? Variedade de características morfológicas, fisiológicas e ecológicas dos diversos grupos de microrganismos é controlada pela sua constituição genética em interação com o ambiente do qual fazem parte. Como surgiu toda essa diversidade? Como resultado da evolução: mutações e recombinação genética que ocorrem nos microrganismos que são capazes de viver em vários habitat. Novo habitat: fica sujeito à colonização quer pelos organismos pré-existentes quer por novos microrganismos que tenham surgido por mutação genética. Os microrganismos mais aptos para crescer e proliferar estabelecem-se nesse novo habitat. Assim, o ambiente está constantemente a selecionar os indivíduos mais adaptados. VISÃO GERAL - conceitos GENÉTICA: ciência da hereditariedade. Estudo do que são os genes, como eles transportam informação, como são replicados e passados para as gerações seguintes de células ou transmitidos entre organismos, e como a expressão de sua informação dentro de um organismo determina as características particulares daquele organismo. GENOMA: informação genética em uma célula. CÓDIGO GENÉTICO: grupo de regras que determina como uma sequência de nucleotídeos é convertida na sequência de aminoácidos de uma proteína. (relação entre os códons e os aa) CROMOSSOMOS: estruturas contendo DNA que transportam fisicamente a informação hereditária; os cromossomos contém os genes. A informação armazenada no DNA é arranjada em unidades hereditárias, agora conhecido como GENES, que controlam características identificáveis de um organismo. GENÓTIPO: composição genética de um organismo, a informação que codifica todas as características particulares do organismo. Representa as propriedades potenciais, mas não as propriedades em si. Em termos moleculares, o genótipo de um organismo é sua coleção de genes, todo o seu DNA. FENÓTIPO: propriedades reais, expressas, como a capacidade do organismo de realizar uma reação química em particular. O fenótipo, então, é a manifestação do genótipo. 12 de setembro de 2016Tema da Apresentação 8 VISÃO GERAL ÁCIDOS NUCLEICOS: macromoléculas que contém a informação para a determinação da sequência de aminoácidos (estrutura e função de todas as proteínas de uma célula). ÁCIDO DESOXIRRIBONUCLEICO (DNA): macromolécula composta de unidades repetidas denominadas nucleotídeos. Contém todas as informações necessárias para construir as células e tecidos de um organismo. Existem dois tipos bastante conhecidos de ácidos nucléicos: o DNA e o RNA Na composição do DNA, temos a formação da maior macromolécula celular, toda ela formada por nucleotídeos. VISÃO GERAL Cada nucleotídeo consiste em uma base nitrogenada (adenina, timina, citosina ou guanina), uma desoxirribose (um açúcar pentose) e um grupo fosfato. ÁCIDO DESOXIRRIBONUCLEICO = DNA ÁCIDO RIBONUCLEICO = RNA ESTRUTURA DO DNA A estrutura do DNA fornece um mecanismo para hereditariedade. Genes transportam informação biológica que deve ser copiada com precisão para a transmissão para a próxima geração, cada vez que uma célula se divide para formar duas células filhas. DNA codifica a informação através da ordem, ou sequência, dos nucleotídeos ao longo de cada vertente. VISÃO GERAL O DNA dentro de uma célula existe como longos filamentos de nucleotídeos, retorcidos em pares, para formar uma hélice dupla. Cada filamento possui uma fileira alternando açúcar e grupo fosfato (seu esqueleto de açúcar-fosfato) e uma base nitrogenada aderida a cada açúcar no esqueleto. As duas fitas são mantidas juntas por ligações de hidrogênio entre suas bases nitrogenadas. Os pares de bases sempre ocorrem de modo específico: a adenina sempre pareia com a timina, e a citosina sempre pareia com a guanina. 12 de setembro de 2016Tema da Apresentação 14 Todas as vezes que uma célula se divide para produzir células filhas, o DNA precisa se duplicar ou replicar dando origem a uma nova molécula de DNA (ANTES DA DIVISÃO CELULAR) com a mesma sequência de bases existente na original, assegurando, assim, que as funções que executam serão idênticas. A replicação do DNA envolve a separação das duas fitas parentais e a produção de duas novas fitas, tendo as parentais como molde. Cada nova molécula de DNA contém uma fita parental e uma fita recém-sintetizada, caracterizando a replicação semiconservativa. REPLICAÇÃO OU DUPLICAÇÃO DO DNA A capacidade das células para manter um elevado grau de ordem num universo caótico depende da duplicação exata de grandes quantidades de informação genética realizada sob a forma química de DNA. REPLICAÇÃO OU DUPLICAÇÃO DO DNA REPLICAÇÃO OU DUPLICAÇÃO DO DNA 12 de setembro de 2016Tema da Apresentação 19 Transcrição SÍNTESE DE PROTEÍNA - transcrição Embora a maioria dos genes codifique proteínas, os produtos finais de alguns genes são moléculas de RNA. A transcrição consiste na síntese de RNA usando DNA como molde. O processo é realizado por um complexo enzimático cuja enzima chave é a RNA polimerase, composta de várias subunidades e que realiza a polimerização do RNA a partir de um molde de DNA. A RNA polimerase nos procariotos é única, enquanto nos eucariotos são três - RNA polimerase I, II e III. SÍNTESE DE PROTEÍNA - transcrição Os RNAs formados durante a transcrição podem ser de três tipos: 1) mRNA (mensageiro)- “Informa” ao ribossomo a sequência de aminoácidos de uma proteína. Ocorre a transcrição para ler a cadeia molde Cria um mRNA Será lido pelos ribossomos no citoplasma OCORRE A FORMAÇÃO DA PROTEINA SÍNTESE DE PROTEÍNA - transcrição rRNA (ribossômico)- São componentes estruturais dos ribossomos. Os ribossomos são organelas constituídas de várias proteínas e são responsáveis pela síntese proteica. tRNA (transportador)- Cada tRNA se liga a um aminoácido e o transporta até um ribossomo durante a síntese. Os tRNA possuem na sua extremidade uma sequência de 3 nucleotídeos chamados anticódon, que são complementares a 3 nucleotídeos no mRNA chamados códons. SÍNTESE DE PROTEÍNA - transcrição Os RNAs produzidos nas células procarióticas e eucarióticas são moléculas de uma única fita composta de nucleotídeos de adenina, guanina, citosina e uracila. As enzimas responsáveis pela síntese dos RNAs são denominadas de RNA polimerases. SÍNTESE DE PROTEÍNA - transcrição Para que ocorra transcrição deve acontecer os seguintes fenômenos: 1.Presença de uma enzima: a RNA polimerase; 2.As pontes de hidrogênio se desfaçam; as duas fitas de DNA se afastem; 3.Nucleotídeos livres de RNA encaixem-se apenas numa das fitas de DNA, chamada fita ativa; 4.A molécula de RNA (fita única) destaque-se de seu molde de DNA e migre para o citoplasma; 5.As duas fitas de DNA tornem a parear, reconstituindo a molécula original. SÍNTESE DE PROTEÍNA - transcrição Em um eucarioto, o DNA nunca deixa o núcleo, de modo que suas informações devem ser copiadas. Esse processo de cópia é chamado de transcrição, e a cópia, de mRNA. A transcrição ocorre no citoplasma (procarioto) ou no núcleo (eucarioto). A transcrição é realizada por uma enzima chamada RNA-polimerase. Para formar o RNAm, o RNA-polimerase: 1. Liga-se ao filamento de DNA em uma sequência específica do gene chamada promotor. 2. Desenrola e desprende os dois filamentosde DNA. 3. Utiliza um dos dois filamentos de DNA como guia ou modelo. 4. Corresponde os novos nucleotídeos a seus complementos no filamento de DNA (G com C, A com U - lembre-se de que o RNA possui uracila (U), e não timina (T)). 5. Une esses novos nucleotídeos de RNA para formar uma cópia complementar do filamento de DNA (RNAm). 6. Interrompe quando encontra uma sequência de terminação de bases (códon de terminação). SÍNTESE DE PROTEÍNA - transcrição SÍNTESE DE PROTEÍNA - transcrição Sequência promotora: local onde a RNA polimerase começa a transcrição. Sequência terminal: local onde a RNA polimerase para a transcrição, liberando tanto a fita molde de DNA e a molécula de RNA mensageiro recém sintetizada. SÍNTESE DE PROTEÍNA - transcrição SÍNTESE DE PROTEÍNA A cópia em atividade da sequência (RNAm) deve ir para o local da construção, onde os trabalhadores criarão a nova proteína. Se a célula for procariótica (ex: bactéria E. coli), então, o local é o citoplasma. Se a célula for eucariótica (ex: célula humana), então, o mRNA deixa o núcleo através de grandes furos na membrana nuclear (poros nucleares) e segue para o retículo endoplasmático, no citoplasma. SÍNTESE DE PROTEÍNAS SÍNTESE DE PROTEÍNA - tradução • Síntese de proteínas ou tradução - corresponde à etapa final da transferência de informação genética, armazenada no DNA, para as moléculas de proteínas, que são os principais componentes estruturais e funcionais das células vivas. • Durante a tradução essa informação, expressa em um RNA, é utilizada para comandar a síntese de uma proteína. SÍNTESE DE PROTEÍNA - tradução O códon de iniciação é sempre o mesmo, AUG (linguagem genética), e corresponde ao aminoácido metionina (linguagem de proteína)= TRADUÇÃO. No processo de iniciação a porção menor do ribossomo associa-se ao RNAt da metionina e juntos passam a percorrer a molécula de RNAm até encontrar o códon AUG. A metionina é, portanto, o primeiro aminoácido da cadeia polipeptídica. Sequencia de códon CGA Aminoácido ARG= arginina SÍNTESE DE PROTEÍNA - tradução SÍNTESE DE PROTEÍNA - tradução SÍNTESE DE PROTEÍNA EM PROCARIOTOS A TRANSCRIÇÃO E A TRADUÇÃO OCORREM NO CITOPLASMA. SÍNTESE DE PROTEÍNA – dogma central da genética molecular Transferência de informação do DNA para o RNA e do RNA para as proteínas PENSE...
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