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Daniela Cristina Ferreira Departamento de Biologia e Zoologia IB-UFMT NATUREZA E ESTRUTURA DO MATERIAL HEREDITÁRIO Histórico da Descoberta do DNA Estrutura da molécula de DNA Johan Friedrich Miescher (1868) análise de leucócitos de pus isolamento de núcleos identificação de uma substância ácida contendo fósforo NUCLEÍNA (= ÁCIDO NUCLEICO) Albrecht Kossel (1890) análises químicas ácido nucleico identificação das bases nitrogenadas (A, T, C, G) DNA – Desoxiribonucleic acid ADN – Ácido desoxirribonucleico ou Proteínas ? MATERIAL HEREDITÁRIO bactéria Streptococcus pneumoniae para infectar camundongo - pneumonia (Fred Griffith - médico) Experimento de Griffith (1928) - princípio da TRANSFORMAÇÃO linhagem S (smooth - lisa) - parede com cápsula de polissacarídeo (proteção às células de defesa do hospedeiro) morte do hospedeiro linhagem R (rough - rugosa) - sem cápsula de polisacarídeo sobrevivência do hospedeiro Experimento: bactérias da linhagem S calor morte bactérias da linhagem R linhagem letal linhagem inofensiva linhagem S (lisa) linhagem R (rugosa) transmissão de material genético das bactérias mortas (S) para as vivas (R) TRANSFORMAÇÃO da linhagem inofensiva R em linhagem letal transmissão do gene para formação de cápsula de polissacarídeo transmissão de material genético das bactérias mortas (S) para as vivas (R) TRANSFORMAÇÃO da linhagem inofensiva R em linhagem letal transmissão do gene para formação de cápsula de polissacarídeo Análise de sangue – constatando a presença da bactéria virulenta S Deste fato, podia-se ter duas explicações: 1. As bactérias S mortas haviam ressucitado, o que seria um absurdo. 2. As bactérias R haviam sido transformadas em bactérias S por algum tipo de substância liberada pelas bactérias mortas. Essa substância foi chamada de “princípio transformante” e essa transformação das bactérias R em S, foi chamada de transformação bacteriana. MATERIAL GENÉTICO – DNA ou PROTEÍNAS ? alta temperatura alteração da estrutura protéica destruição de proteínas manutenção do DNA MATERIAL GENÉTICO – outro ? Experimento de Oswald T. Avery, Collin M. MacLeod e Maclyn McCarty (1943) Oswald T. Avery Collin M. MacLeod Maclyn McCarty (S) bacteriófagos T2 (vírus que infectam bactérias) Alfred Hershey e Marta Chase (1952) Experimento de Hershey-Chase DNA marcado P32 proteína marcada S35 DNA – Desoxiribonucleic acid ADN – Ácido desoxirribonucléico Estrutura do DNA ? MATERIAL HEREDITÁRIO Erwin Chargaff (bioquímico) (década de 1940) no. bases A = no. bases T no. bases C = no. bases G no. bases purinas = no. bases pirimidinas A/T = 1 C/G = 1 A+G/C+T = 1 Rosalin Elsie Franklin (1952) King’s College (Londres) Química - cristalografia de raios X CRISTALOGRAFIA DE RAIOS X técnica para obter informação sobre a posição dos átomos em uma estrutura com um arranjo ordenado de moléculas incidência de raios X difração dos raios X padrão que pode ser fotografado análise do padrão produzido - gera informações sobre a estrutura tridimensional dos cristais da estrutura analisada DNA processo de cristalografia por raio-X padrão resultante de difração – estrutura tridimensional do DNA James Watson (1928-presente) James Watson e Francis Crick (1953) Francis Crick (1916-2004) Cambridge University (Inglaterra) Zoólogo Físico Cambridge University (Inglaterra) ESTRUTURA TRIDIMENSIONAL DO DNA Cálculos: - distância entre as bases (0.34nm) - comprimento do período (3.4nm) - ângulo da hélice (36 graus) estrutura helicoidal 10 bases por giro da molécula Prêmio Nobel em Fisiologia e Medicina (1962) - 1953 - DUPLA HÉLICE: ELEGÂNCIA E ESTABILIDADE uma das moléculas biológicas mais elegantes uma das moléculas biológicas mais estáveis DNA isolado do “Homem do Gelo” (5.300 anos) encontrado em 1991 DNA isolado de ossos fossilizados de Neandertais (30.000 anos) FOSFATO NUCLEOTÍDEOS AÇÚCAR - desoxirribose BASE - adenina (A), timina (T), guanina (G) e citosina (C) BLOCOS DE CONSTRUÇÃO DO DNA BLOCOS DE CONSTRUÇÃO DO RNA maioria dos organismos material genético = DNA Heinz Fraenkel-Conrat e Bea Singer (1956) estudos com vírus do mosaico do tabaco TMV (infecta plantas de tabaco) molécula única de ácido nucleico circundada por um cilindro de proteínas FOSFATO NUCLEOTÍDEOS AÇÚCAR - ribose BASE - adenina (A), uracila (U), guanina (G) e citosina (C) BLOCOS DE CONSTRUÇÃO DO RNA FOSFATO - átomo de fósforo ligado a 4 átomos de oxigênio - se liga ao carbono 5’ do açúcar 5’ 4’ 3’ 2’ 1’ AÇÚCAR - pentose (com 5 átomos de carbono: 1’ a 5’) 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ AÇÚCAR - desoxirribose AÇÚCAR - ribose 5’ 5’ 4’ 4’ 3’ 3’ 2’ 2’ 1’ 1’ HIDROXILA BASES (bases nitrogenadas) – se ligam ao carbono 1’ do açúcar 5’ 4’ 3’ 2’ 1’ PURINAS PIRIMIDINAS Adenina (A) e Guanina (G) Citosina (C), Timina (T) e Uracila (U) (1 anel de seis lados + 1 anel de cinco lados) (1 anel de seis lados) Timina: 5-metilpirimidina-2,4(1H,3H)-dion Adenina: 9H-purina-6-amino Citosina: 2-oxi-4-aminopirimidina Guanina: 2-amino-6-oxipurina 5’ 4’ 3’ 2’ 1’ açúcar (ribose ou desoxirribose) + base NUCLEOSÍDEO 5’ 4’ 3’ 2’ 1’ açúcar (ribose) + base + fosfato RIBONUCLEOTÍDEO 5’ 4’ 3’ 2’ 1’ açúcar (desoxirribose) + base + fosfato DESOXIRRIBONUCLEOTÍDEO - molécula de fita dupla - nucleotídeos - fosfato - bases nitrogenadas (A, T, G, C) - açúcar desoxirribose ESTRUTURA DO DNA fitas orientadas de forma antiparalela nucleotídeo BLOCOS DE CONSTRUÇÃO DO DNA FITA DUPLA DO DNA nucleotídeos FITA DUPLA DO DNA no. bases A = no. bases T no. bases G = no. bases C no. bases purinas = no. bases pirimidinas A/T = 1 C/G = 1 A+G/C+T = 1 Erwin Chargaff (bioquímico) (década de 1940) COMPOSIÇÃO DE BASES DE DNA DE DIFERENTES ORGANISMOS E. coli levedura ouriço-do-mar rato homem A T G C PROPORÇÃO A/T G/T A+G=T+C 26,0 31,3 32,8 28,6 30,6 23,9 32,9 32,1 28,4 30,3 24,9 18,7 17,7 21,4 19,5 25,2 17,1 18,4 21,5 19,9 1,09 0,95 1,02 1,01 1,00 0,99 1,09 0,96 1,00 0,98 1,04 1,00 1,00 1,00 0,99 LIGAÇÃO - PONTES DE HIDROGÊNIO LIGAÇÃO - PONTES DE HIDROGÊNIO Por que “pontes de hidrogênio” ? Por que 2 pontes entre A-T e 3 pontes entre G-C ? - - - - - + + + + + 3’ 3’ 3’ LIGAÇÃO FOSFODIÉSTER C filamento polinucleotídico Por que “ligações fosfodiéster” ? R R grupos contendo C FOSFO ÉSTER DUPLA HÉLICE filamentos complementares com polaridade inversa (fitas antiparalelas) - ponta 5’ - grupo fosfato ligado ao C5’ do açúcar - ponta 3’ - grupo OH ligado ao C3’ do açúcar FILAMENTO POLINUCLEOTÍDICO A B Z DNA A –menos hidratado e mais compacto; hélice com giro para direita DNA B –mais hidratado e menos compacto; hélice com giro paradireita (mais comum) DNA Z -DNA metilado; hélice com giro para a esquerda FORMAS ENCONTRADAS EM SISTEMAS BIOLÓGICOS NATURAIS Fenda menor (12 A) Fenda maior (22 A) (1A = 10-10m) DNA B - molécula de fita simples - nucleotídeos - fosfato - bases nitrogenadas (A, U, G, C) - açúcar ribose ESTRUTURA DO RNA nucleotídeos polinucleotídico (ligações fosfodiéster) fita simples DNA - fita dupla RNA - fita simples ESTRUTURA DO DNA NÍVEIS ESTRUTURA PRIMÁRIA ESTRUTURA SECUNDÁRIA ESTRUTURA TERCIÁRIA estrutura dos nucleotídeos estrutura tridimensional do DNA compactação do DNA nos cromossomos Procariontes (bactérias) Eucariontes (animais, plantas, fungos) CÉLULA ANIMAL Eucariontes (animais, plantas, fungos) CÉLULA VEGETAL Exceto em alguns vírus, o DNA funciona como o material genético em todos os organismos exitentes na Terra; De acordo com o modelo de Watson-Crick ,o DNA existe sob a forma de uma hélice dupla de orientação para a direta, As fitas da hélice dupla são antiparalelas e se conservam unidas por pontes de hidrogênio entre bases nitrogenadascomplementares; A estrutura do DNA proporciona os meios de armazenamento e de expressão das informações genéticas, O RNA apresenta muitas semelhanças com o DNA , mas existe principalmente como uma molécula de fita simples; Em alguns vírus, o RNA funciona como o material genético. Natureza do Material Genético: Próxima Aula DUPLICAÇÃO TRANSCRIÇÃO TRADUÇÃO
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