Relatório microbiologia geral- coloraçao de gram

Prévia do material em texto

Diferenciação microscópica de microrganismos pela coloração de gram
1.Introdução
A coloração de Gram é um dos procedimentos de coloração mais úteis para classificação das bactérias. Ela recebeu este nome em homenagem a seu descobridor, o bacteriologista Hans Cristian Joaquim Gram. Em 1884, Gram analisou que as bactérias adquiriram cores diferentes, quando tratadas com corantes distintos. Isso permitiu classificá-las em dois grandes grupos: as que ficavam roxas, que foram chamadas de Gram positivas, e as que ficavam vermelhas, chamadas de Gram-negativas. 
2.Objetivo
Desenvolver e observar as técnicas de esfregaço para coloração de gram e aprender como se dá a análise da classificação das bactérias a partir dos diferentes corantes aplicados, correlacionando com a sua estrutura.
3.Material e Métodos
-Materiais:
3.1 Reagentes
Violeta de Metila
Lugol
Álcool Etílico
Água
Safranina/ Fucsina
3.2 Materiais
Alça de Platina
Lâminas 
Pipetas de Pasteur 
Suporte para coloração das lâminas
Placa com crescimento bacteriano
3.3 Equipamentos
Microscópio óptico
Bico de Bunsen
-Métodos:
Utilizando da área estéril em volta do bico de Bunsen ou da lamina, retirar, com o auxílio da alça de platina, uma pequena porção da bactéria desejada (já inoculada em placa de petri). Colocar uma gota de água destilada em um lâmina, esfregar a ponta da alça de platina com a bactéria na gota, fazendo um círculo;
Secar a água com ajuda do bico de Bunsen;
Corar com violeta de metila por 1 minuto; Lavar com água destilada;
Corar com Lugol por 1 minuto; Lavar com água destilada;
 Passar álcool até que não haja mais desprendimento de corante; Lavar com água destilada;
 Corar com fucsina por 30 segundos; Lavar com água destilada e esperar secar, ou secar com papel;
Analisar a lamina em microscópio óptico.
4.Resultados e Discussões 
Os microorganismos que apresentaram cor roxa, com forma de cocos, vistos no microscópio eram gram-positivos, e os que se mostraram com coloração rosada ou avermelhada e com forma de bastão eram os gram negativos. Essa diferenciação se dá, devido a estrutura composta por cada tipo de bactéria, enquanto que as gram positivas são constituídas por uma espessa camada de peptideoglicano em sua parede celular, as gram negativas possuem uma fina camada e uma membrana externa de lipopolisacarídeos. No processo de corar as bactérias com violeta e lugol, é notável que os corantes são absorvidos por ambos, porém ao tratar com álcool as paredes das gram positivas são desidratadas, se tornando então impermeáveis. Já nas gram negativas o álcool se dissolve. Ao corar as duas com fucsina, as negativas absorvem esse contra corante por estarem incolores e as positivas não absorvem por já estarem coradas.
5.Conclusão
O método de coloração de gram tem grande importância no meio da microbiologia medica, e facilita o entendimento visual e metodológico dos diferentes grupos de bactérias existentes e a forma como sua composição físico-química se relaciona com os reagentes propostos. Porém é evidente que a Coloração de Gram somente será um recurso rápido e útil quando corretamente realizada e interpretada e com o uso de culturas em que se saiba, pelo menos, o tempo de incubação.