AULA_PRATICA_3_prote+¡nas_enzimas_2014.1[1]

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UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DA AMAZÔNIA-UFRA 
INSTITUTO SOCIOAMBIENTAL E DE RECURSOS HÍDRICOS-ISARH 
DISCIPLINA BIOQUÍMICA 
PROFESSORA: JOANNE MORAES DE MELO SOUZA 
 
 
Profa. Dra. Joanne Moraes de Melo Souza (UFRA/ISARH) 
Aula Prática de Bioquímica 
Semestre 2014.1 
 
 
ASSUNTO: CARACTERIZAÇÃO DAS PROTEÍNAS E ENZIMAS 
 
1. INTRODUÇÃO: 
 As proteínas, cujo nome vem do grego protos, que significa “a primeira” ou “a 
mais importante”, são as biomoléculas mais abundantes nos seres vivos, estando 
presente em todas as partes de uma célula. São polímeros cujas unidades 
constituintes são aminoácidos ligados por ligações peptídicas. Possuem estrutura 
tridimensional bem definida que está relacionada intimamente com suas propriedades 
biológicas e físicas, e que são mantidas por forças estabilizadoras. Denomina-se 
desnaturação a modificação na estrutura tridimensional nativa de uma proteína, e se 
caracteriza por alterações na estrutura terciária, quaternária e secundária, além da 
diminuição da solubilidade e perda da atividade biológica. A solubilidade de uma 
proteína em um solvente é o resultado entre o balanço entre as interações que 
ocorrem entre as moléculas de proteína (proteína-proteína) e as da proteína e o 
solvente (proteína-solvente). A precipitação ocorre quando as interações proteína-
proteína tornam-se mais forte do que as interações proteína-solvente. A solubilidade 
proteica é dependente da concentração e natureza dos sais, polaridade do solvente, 
pH e temperatura. 
O ovo possui uma composição média de 73,67% de água, 12,50% de 
proteínas, 12,02% de gorduras e 1,81% de sais minerais. Por conter muita água, ele 
espirra na hora de fritar. Na clara há uma mistura de proteínas, sendo a albumina a 
principal. A gema é rica em nutrientes e contém várias proteínas diferentes, além de 
uma grande quantidade de gordura, o colesterol. O leite de vaca possui uma 
composição média de 87,3% de água, 4,6% de lactose, 3,9% de gordura, 3,3% de 
proteínas e 0,65% de sais minerais. 
As enzimas são proteínas, em sua maioria, que possuem funções catalíticas 
nas células acelerando as reações químicas diminuindo sua energia de ativação. As 
reações enzimáticas são muito importantes, podendo ser tanto benéficas, quanto 
prejudiciais. A enzima catalase é uma enzima que ocorre em plantas, animais e 
microrganismos. Nos animais e vegetais, acredita-se que a função dela é proteger os 
tecidos contra os efeitos tóxicos do peróxido de hidrogênio (H2O2), que é tóxico para 
as células, formado durante o metabolismo celular, principalmente a respiração. Sabe-
se que esta substância é um potente inibidor de muitas enzimas, devendo existir, 
portanto um mecanismo enzimático nos tecidos que promova sua destruição. A 
catalase utilizam H2O2 como substrato uma vez que aceleram a decomposição dessa 
substância em H2O e O2. Outras funções de catalases nas plantas superiores ainda 
não estão bem definidas ou determinadas. 
 
2 H2O2 CATALASE 2H2O + O2 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DA AMAZÔNIA-UFRA 
INSTITUTO SOCIOAMBIENTAL E DE RECURSOS HÍDRICOS-ISARH 
DISCIPLINA BIOQUÍMICA 
PROFESSORA: JOANNE MORAES DE MELO SOUZA 
 
 
Profa. Dra. Joanne Moraes de Melo Souza (UFRA/ISARH) 
Aula Prática de Bioquímica 
Semestre 2014.1 
 
 
2. OBJETIVO GERAL: 
 Ao final da prática, o aluno deverá ser capaz de: 
 Detectar a presença de proteínas no ovo e no leite. 
 Detectar a presença e observar a atividade de catalase em tubérculos de 
batatinha. 
 Identificar os agentes que podem desnaturar e alterar a solubilidade da proteína; 
 Verificar a desnaturação de uma proteína por solvente orgânico 
 
 
3. MATERIAL: 
 Tubos de ensaio 
 Pipetas Pasteur plástica 
 Bastão de vidro 
 Espátula 
 Placas de Petri 
 Béqueres 
 Ácido acético diluído (CH3COOH) 
 Álcool etílico (CH3CH2OH) 
 Água oxigenada a 10 volumes 
 Placa de Petri 
 Tubérculo de batatinha. 
 Leite 
 Clara de ovo 
 Ovo 
 
4. CARACTERIZAÇÃO E SOLUBILIDADE DE PROTEÍNAS 
 
PROCEDIMENTO: 
 Colocar no tubo de ensaio a clara de ovo fornecida pelo professor. 
 Adicionar 30 gotas de vinagre. 
 Anotar suas observações e explicar o que ocorreu. 
 Em outro tubo de ensaio, colocar leite; 
 Adicione 30 gotas de vinagre. 
 Anotar suas observações e explique o que ocorreu com o leite. 
 
 
5. DESNATURAÇÃO DA ALBUMINA COM SOLVENTE ORGÂNICO 
 
PROCEDIMENTO: 
 Colocar álcool etílico no béquer até metade de seu volume. 
 Adicionar um ovo sem a casca e esperar por aproximadamente 20 minutos. 
 Anotar suas observações e explicar o que ocorreu. 
 
 
 
 
 
 
 
 
UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DA AMAZÔNIA-UFRA 
INSTITUTO SOCIOAMBIENTAL E DE RECURSOS HÍDRICOS-ISARH 
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Profa. Dra. Joanne Moraes de Melo Souza (UFRA/ISARH) 
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Semestre 2014.1 
 
 
6. ATIVIDADE DE CATALASE EM TUBÉRCULOS DE BATATINHA 
 
PROCEDIMENTO: 
 Usando uma placa de Petri, cubra uma fatia fina de tubérculo de batatinha com 
uma solução diluída (15:1) de peróxido de hidrogênio. 
 A evolução de bolhas de oxigênio denota a presença da catalase. 
 Agora ferva uma fatia de batatinha por 5 minutos. 
 Repita a operação com a fatia de batatinha anteriormente fervida. 
 Interprete os resultados. 
 Faça um desenho esquemático dos seus resultados. 
 
 
 
QUESTÕES: 
1. Dê a reação da catalase, indicando o substrato e o produto dessa reação. 
2. Cobrindo-se fatias de batatinha com água oxigenada, observa-se maior evolução de 
bolhas de oxigênio nos tecidos da periferia do que nos tecidos internos. Por quê? 
3. Pesquise que diferenças existem entre catalase e desidrogenases quanto às 
reações que catalisam? 
4. Explique a principal diferença entre enzimas “pré-existentes” e sintetizadas “de 
novo”. 
5. Quais os fatores que interferem na velocidade enzimática? 
6. Discuta a importância das enzimas no corpo humano, bem como em processos 
industriais. Pesquise diferentes enzimas que são utilizadas na indústria e sua função. 
7. Quais as forças que mantém as estruturas secundárias, terciárias e quaternárias 
das proteínas? 
8. Qual a função das enzimas? Defina cofator, coenzima e grupo prostético. 
9. Pesquise sobre as seguintes enzimas e complete o quadro abaixo: 
 
ENZIMA COFATOR ou 
COENZIMA 
FUNÇÃO CLASSIFICAÇÃO 
Catalase 
Hexoquinase 
Peroxidase 
Piruvato 
Aldolase 
Lactato-desidrogenase 
Citrato-sintase 
 
10. O que são inibidores enzimáticos? Explique os diferentes tipos de inibidores.