Relatotio 02

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Andressa Oliveira de Jesus, Jefferson Silva do Carmo, Mateus Souza Mendes¹; Raúl René Valle²
1 Estudantes do Curso de Ciências Biológicas – UESC
2 Docente/pesquisador do Departamento de Ciências Biológicas –UESC
FOTOCOLORIMETRIA E ESPECTROFOTOMETRIA
INTRODUÇÃO
A espectrofotometria é o método de análise óptico mais usado nas investigações biológicas e físico-químicas a qual estuda a propriedade que inúmeros compostos químicos possuem de absorver radiações eletromagnéticas. Como esta absorção é específica para um determinado composto, pode-se obter rapidamente dados que poderão auxiliar no aspecto de sua identificação. O espectrofotômetro é um instrumento que permite comparar a radiação absorvida ou transmitida por uma solução que contém uma quantidade desconhecida de soluto, e uma solução que contém uma quantidade conhecida da mesma substância.
 Todas as substâncias podem absorver energia radiante, mesmo o vidro que parece completamente transparente absorve comprimentos de ondas que pertencem ao espectro visível. A água absorve fortemente na região do infravermelho. A absorção das radiações ultravioleta, visíveis e infravermelha, dependem das estruturas das moléculas, e é característica para cada substância química. Quando a luz atravessa uma substância, parte da energia é absorvida (absorbância): a energia radiante não pode produzir nenhum efeito sem ser absorvida. A cor das substâncias deve-se à reflexão (transmitância) de certos comprimentos de ondas da luz branca que incide sobre elas, deixando transmitir aos nossos olhos apenas aqueles comprimentos de ondas não absorvidos.
 A concentração de uma substância em uma determinada amostra pode ser determinada através da comparação da intensidade da cor obtida nesta amostra com a intensidade da cor produzida em uma solução padrão aplicando uma regra de três. Para evitar erros de aferição, não é utilizado um único padrão para realizar a comparação. É realizada uma série de determinações com concentrações crescentes da solução padrão, medindo as suas respectivas absorbâncias, a curva padrão. É calculado o fator de calibração para cada solução padrão e é feita uma média destes fatores, o fator de calibração médio.
Palavras-chave: Absorbância; Transmitância; Solução 
MATERIAIS E MÉTODOS
A partir de um roteiro disponibilizado pelo docente, Raul vale e sob orientação da mestranda Mariana, os procedimentos foram iniciados. 
Separação dos materiais 
	MATERIAL
	QUANT.
	MATERIAL
	QUANT.
	MATERIAL
	QUANT. 
	Tubos de ensaio
	7
	Becker
	7
	Cubetas
	7
	Bastão de vidro
	2
	Pipetas
	7
	Estante para Tubos
	2
Tabela 01 – Especificação e quantidade de Materiais
Uma solução de caseína a 5% em água destilada, já estava previamente preparada. Posteriormente, 6 Becker foram numerados e em cada um deles foi colocado 1 mL da solução de caseína, mais uma respectiva quantidade de água destilada em cada tubo. Conforme tabela 2.
	
	B 1
	B 2
	B 3
	B 4
	B 5
	B 6
	Caseína 5%
	1 mL
	1 mL
	1 mL
	1 mL
	1 mL
	1 mL
	Água destilada
	
4 mL
	
9 mL
	
19 mL
	
24 mL
	
49 mL
	
99 mL
Tabela 02 – Preparo de soluções em Becker
Posteriormente foram retirados de cada Becker 1 mL de solução e colocado em 6 tubos de ensaio. A solução do Becker 1 no tubo 1, do Becker 2 no tubo 2 e assim sucessivamente. Um tubo testemunha também foi preparado. 
Em seguida em cada tubo, foi colocado 4 mL de reativo do biureto com mistura das soluções por inversão e repouso por 15 minutos para reação.
Aproximadamente 1 mL de cada solução, foi colocada em Cubetas para realizar a leitura da absorbância no Fotocolorímetro a 540 nm, usando o conteúdo do tubo 0, para zerar o aparelho. 
	
RESULTADOS
As soluções presentes nas Cubetas apresentaram os seguintes valores de transmitância:
	CUBETA 1 - 0,439
	CUBETA 2 – 0,244
	CUBETA 3 – 0,121
	CUBETA 4 – 0,088
	CUBETA 5 – 0,051
	CUBETA 6 – 0,032
	TESTEMUNHA - 100
	
DISCUSSÃO
Após a verificação da absorbância, foi possível testificar que as soluções mais diluídas permitem uma maior trasmitância ou passagem de luz em função das soluções mais concentradas.
 CONCLUSÃO
Através do experimento foi possível verificar a absorbância, e que as soluções mais diluídas permitem uma maior trasmitância ou passagem de luz em função das soluções mais concentradas. E apartir desses dados elaborar uma curva de calibração para determinar o limite de sensibilidade do método fotocolorimetrico.
 REFERÊNCIAS
LEHNHNGER, A.L., NELSON, D.L., COX, M.M. Princípios de Bioquímica, 6ª ed., Artmed, 2014.