ROTEIRO PRÁTICA TAMPÃO

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Roteiro de Aulas Práticas – Departamento de Fisiologia e Biofísica – ICB - UFMG
AULA PRÁTICA: SOLUÇÕES TAMPÃO
1. INTRODUÇÃO
Nos diversos compartimentos biológicos, a concentração hidrogenônica exerce profunda influência no desempenho das biomoléculas. Daí a importância de se conhecer, não só os processos utilizados para medir esta concentração, mas também mecanismos capazes de atenuar variações de pH : as soluções tampão. O desempenho das soluções tampão depende de dois fatores termodinâmicos: a relação A/D (fator intensivo, ou intrínseco) e da quantidade de tampão (fator extensivo ou extrínseco).
2. CONHECIMENTOS PRÉVIOS
Conceito de pH
Conceito de solução tampão
Constante de dissociação
Equação de handerson-Hasselbach
Indicadores de pH
3. MATERIAL
Soluções Tampão Fosfato de Sódio 0,05M de pH 5,8, 6,8 e 7,8
Ácido Clorídrico (HCl) 0,1M
Hidróxido de Sódio (NaOH) 0,1M
Indicador misto no. 2
Séries de padrões de pH (2,0 5,8 6,8 7,8 10,0)
Tubos de ensaio
Conta gotas
PARTE 1: RELAÇÃO A/D e pK
1. OBJETIVO
Mostrar que a poder tamponamento depende da relação entre as concentrações de aceptor e doador de prótons (relação A/D) e do pK do sistema tampão.
2. MÉTODOS
Dispor os tubos de ensaio de maneira a formar 2 séries com 3 tubos cada uma: série ácida e série básica.
Colocar 5mL de cada tampão nas 2 séries.
Acrescentar 1 gota de indicador misto no.2 a cada tubo e observar a cor desenvolvida em cada tubo, comparando com os padrões de pH.
Acrescentar 3 gotas de HCl 0,1M a cada um dos 3 tubos que formam a série ácida e 3 gotas de NaOH 0,1M a cada um dos 3 tubos que compõem a série básica. Se não houver nenhuma solução que tenha saído da faixa de tamponamento, adicionar mais gotas (de HCl ou NaOH), em todos tubos da série, até que se observe esta alteração.
Comparar a nova coloração desenvolvida com os padrões de pH.
3. QUESTÕES
Dê a composição e explique como funciona cada uma das soluções tampão usadas neste experimento.
As alterações de pH nos diversos tubos podem ser explicadas a partir da relação entre os componentes da solução tampão. Explique para cada série as alterações observadas.
Qual solução tampão é mais resistente a adição de ácido? e de hidróxido? Por que?
Como se comporta o tampão de pH 6,8?
Qual a importância do pK de um sistema tampão?
PARTE 2: QUANTIDADE DE TAMPÃO
1. OBJETIVO
Mostrar que a capacidade de tamponamento de uma solução tampão depende da quantidade de tampão existente no meio.
2. MÉTODO
Preparar 5 tubos de ensaio, utilizando a solução tampão Fosfato de Sódio 0,05M de pH 6,8 e o indicador misto no.2, como indicado a seguir:
	
Tampão
	
2 mL
	
4 mL
	
6 mL
	
8 mL
	
10 mL
	
Indicador misto no.2
	
1 gota
	
2 gotas
	
3 gotas
	
4 gotas
	
5 gotas
Observar a coloração desenvolvida em cada tubo e comparar com o padrão de pH.
Acrescentar 8 gotas de HCl 0,1M a cada tubo e observar os resultados.
3. QUESTÕES
1. Explique como ocorreu as alterações de pH nos diversos tubos.
PARTE 3: DILUIÇÃO DO TAMPÃO
1. OBJETIVO
Mostrar o efeito da diluição de uma solução tampão sobre o pH e a capacidade de tamponamento da mesma.
2. MÉTODO
Preparar 5 tubos de ensaio, utilizando o tampão Fosfato de Sódio 0,05M, água e indicador misto no.2, como mostrado no quadro abaixo:
	
Tubo
	
1
	
2
	
3
	
4
	
5
	
Tampão (mL)
	
2 mL
	
2 mL
	
2 mL
	
2 mL
	
2 mL
	
H20 (mL)
	
---
	
2 mL
	
4 mL
	
6 mL
	
8 mL
	
Indicador misto no.2
	
1 gota
	
2 gota
	
3 gotas
	
4 gotas
	
5 gotas
Observar a coloração desenvolvida em cada tubo. Comparar com o padrão de pH
Acrescentar 1 gotas de HCl 0,1M a cada tubo e observar os resultados.
4- Desprezar o líquido de cada tubo, deixando dentro de cada um somente 2 mL de solução e acrescenta, então, mais 2 gotas de HCL 0,1M. Observe e anote os resultados.
3. QUESTÕES
O que se pode concluir em relação ao resultado observado no item (2)? Explique.
O que se conclui a partir dos resultados obtidos no item (3)? Explique.
Para um mesmo tampão com concentrações diferentes o que pode-se afirmar sobre a capacidade de tamponamento ? Explique.