Aplicações práticas da imunologia

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Itaqui, 1° de Dezembro de 2010
Universidade Federal do Pampa
Campus Itaqui
Curso de Nutrição
Imunologia
Prof. Dr. Mauro Oliveira
Aplicações práticas da imunologia
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Respostas imunes
Inata
Mais rápida
Baixa eficácia
Proteção inicial contra patógenos
Adquirida
Mais lenta
Mais eficaz
“Sob demanda”
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Imunidade natural X adquirida
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Também denominada imunidade mediada por anticorpos
Diversos tipos de linfócitos B
Defesa contra bactérias, vírus e toxinas extracelulares
Imunidade humoral
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São proteínas (imunoglobulinas), produzidas em resposta a um antígeno, que podem se ligar àquele antígeno
Anticorpos
Emil von Behring
Baron Kitasato Shibasaburō
1890
Antitoxina da difteria
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Anticorpos
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Anticorpos
Gamaglobulinas ou imunoglobulinas
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Anticorpos - estrutura
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Anticorpos
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Anticorpos
Susumu Tonegawa
1978
Descoberta do mecanismo genético que produz a imensa variabilidade das imunoglobulinas 
Recombinação somática
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IgG, IgM, IgA, IgD, IgE 
Diferentes papéis na resposta imune
Diferenças quanto a estrutura e funções
Classes de anticorpos
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IgG
Estrutura monomérica (massa de 150 kDa)
Constitui 80 % do total de anticorpos séricos
Meia-vida no soro: 23 dias
Localização: sangue, linfa e intestino
Única classe de anticorpo passível de transferência placentária
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Produção de anticorpos
Harlow e Lane, 1988 - Antibodies: A Laboratory Manual
Roteiro básico:
Preparação do antígeno
Injeção do antígeno em animal
Extração e purificação dos anticorpos
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Produção de anticorpos
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Produção de
anticorpos
Policlonais
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Produção de anticorpos
Monoclonais
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Métodos laboratoriais utilizando anticorpos
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Anticorpos primários X secundários
Anticorpo primário é o anticorpo utilizado para interagir com o antígeno (molécula de interesse)
Anticorpo secundário é o anticorpo utilizado para reconhecer/detectar o anticorpo primário
O anticorpo secundário reconhece a porção constante do anticorpo primário
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Sistema de detecção
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Sistema de detecção
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Métodos de imunodiagnóstico
Métodos utilizados em pesquisa científica
Métodos laboratoriais utilizando anticorpos
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Identificação e/ou quantificação de moléculas específicas em fluidos biológicos
Purificação de proteínas
Diagnóstico de doenças auto-imunes, infecciosas e hipersensibilidades
Localização de moléculas específicas em células e tecidos
Métodos laboratoriais utilizando anticorpos
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Especificidade: característica que indica que o teste em questão identificará somente o antígeno ou o anticorpo desejado
Quanto MAIOR a especificidade, , MENOR a ocorrência de reações cruzadas, MENOR a ocorrência de resultados falsos-positivos
Características dos métodos laboratoriais utilizando anticorpos
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Sensibilidade: característica inerente ao método estreitamente relacionada com a quantidade mínima de antígeno ou anticorpo que poderá ser detectada
Estreitamente ligada ao sistema de amplificação e detecção da interação antígeno-anticorpo
Métodos enzimáticos, radioativos, fluorescentes, quimioluminescentes
Características dos métodos laboratoriais utilizando anticorpos
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Sensibilidade
Especificidade
Aplicabilidade à amostra disponível
Custo (tempo, nível de treinamento, material)
Biossegurança
Fatores a serem analisados na escolha do método
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ELISA: Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay (Análise imunosorvente ligada a enzima)
Western blot
Imunohistoquímica
Principais métodos utilizados
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Técnica que utiliza anticorpos ou antígenos imobilizados em placa de polímero de carbono, e anticorpo conjugado a uma enzima
A formação de produto pela enzima é proporcional a quantidade de antígeno/anticorpo presente na amostra biológica
Exemplos: vírus HIV, citocinas, doenças auto-imunes
ELISA
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ELISA
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Vantagens:
método altamente sensível
alto grau de confiabilidade como ensaio quantitativo
custo mediano
Desvantagens
pouco indicado para antígenos não-solúveis
pouco específico dependendo do antígeno/anticorpo
ELISA
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Western blot
Método para detecção de proteínas específicas
Edwin Southern: invenção do método
	para detecção de DNA
W. Neil Burnette, 1981
“Western blot”
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Western blot
 Técnica que envolve a separação das proteínas por eletroforese baseada no peso molecular antes da detecção com anticorpos específicos
Exemplo: exame confirmatório de vírus HIV
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Western blot
Peso molecular
da proteína
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Vantagens:
método altamente específico e sensível
Desvantagens
pouca confiabilidade como ensaio quantitativo
custo alto
grau de capacitação técnica requerida
Western blot
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Vantagens:
método altamente específico e sensível
Desvantagens
pouca confiabilidade como ensaio quantitativo
custo alto
grau de capacitação técnica requerida
Imunohistoquímica
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Vantagens:
método altamente específico e sensível
Desvantagens
pouca confiabilidade como ensaio quantitativo
custo alto
grau de capacitação técnica requerida
Imunohistoquímica
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Vantagens:
método altamente específico e sensível
Desvantagens
pouca confiabilidade como ensaio quantitativo
custo alto
grau de capacitação técnica requerida
Imunohistoquímica
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2- PRINCIPAIS MÉTODOS LABORATORIAIS
2.6- Imunofluorescência / Imunohistoquímica: Utilizados para detecção e localização de antígenos em células e tecidos e para detecção de anticorpos específicos em fluidos biológicos.
 Métodos de alta especificidade e alta especificidade
 Utilização de anticorpos conjugados com substâncias fluorescentes (FITC, FAC) na IFA, e de anticorpos conjugados com enzimas (Imunohistoquímica).
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2- PRINCIPAIS MÉTODOS LABORATORIAIS
2.6- Imunofluorescência / Imunohistoquímica:
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2- PRINCIPAIS MÉTODOS LABORATORIAIS
2.6- Imunofluorescência / Imunohistoquímica:
 Vantagens: Alta especificidade e sensibilidade; possibilidade de detecção de proteínas intracelulares e de sua localização, bem como do tráfico intracelular.
- Desvantagens: “variação individual” na leitura de resultados de IFA; alto custo de microscópio de fluorescência; técnicas especiais de fixação e inclusão de tecidos para Imunohistoquímica nem sempre disponíveis.