Amostras Biológicas e Análise Bioquímica

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Amostras Biológicas
Profª. Carolina Wallauer
carolinawallauer@gmail.com
ULBRA 2018/1
Bioquímica Clínica
• EMENTA: Estudar a fase pré-analítica do exame
laboratorial e análise de marcadores bioquímicos
úteis no auxílio ao diagnóstico e monitoramento de
patologias relacionadas ao metabolismo.
OBJETIVOS:
- Geral:
• Empregar metodologias de análises bioquímicas em sangue, urina, e
demais fluidos biológicos, bem como a estabelecer uma relação
clínico-laboratorial de avaliação bioquímica das funções e
metabolismos supra-citados.
- Específicos:
• Reconhecer laboratorialmente as variações de metabólitos
bioquímicos relacionadas às funções renal, hepática, pancreática e
cardíaca,
• Efetuar o diagnóstico e acompanhamento laboratorial do diabetes
• Reconhecer alterações do metabolismo protéico, lipídico, eletrolítico
e de minerais, em situações fisiológicas e patológicas.
• Relacionar alterações laboratoriais com o metabolismo fisiológico e
patológico do organismo humano (correlações clínico-laboratoriais).
Conteúdo programático
• 1. Conceitos básicos: - biossegurança (conceito, características);
métodos bioquímicos de diagnóstico, interferentes laboratoriais:
tipos de amostra (sangue total, soro, plasma, urina, fluido
biológicos); valores de referência; relação clínico laboratorial
• 2. Diabetes: critérios e provas laboratoriais de diagnóstico (glicemia,
curva glicêmica) e monitorizamento da diabetes: glicosúria,
hemoglobina glicosada, frutosamina. Diabetes gestacional
• 3. Função renal: fisiopatologia e diagnóstico laboratorial de
patologias renais, uréia e creatinina em sangue e urina. Provas de
depuração, proteinúria. Metabolismo das purinas: ácido úrico.
• 4. Metabolismo protéico: proteínas totais, albumina,
microalbuminúria, proteínas específicas, eletroforese de proteínas
(perfis eletroforéticos: fase aguda, infeccioso, hepático, mieloma
múltiplo).
• 5. Eletrólitos e distúrbios hidroeletrolíticos: alterações laboratoriais e
correlação com patologias. Métodos de análise laboratorial:
fotometria de chama, íon seletivo, dosagem de sódio, potássio, lítio,
cloro, CO2.
• 6. Macro-Microminerais: cálcio, fósforo, magnésio, ferro cobre.
Alterações laboratoriais e correlação com patologias.
• 7. Função hepática e pancreática: diagnóstico laboratorial das
enfermidades hepáticas e pancreáticas. Dosagem de bilirrubinas e
enzimas hepáticas (transaminases, FAL, LDH, GGT) e pancreáticas
(amilase e lípase).
• 8. Metabolismo lipídico: fisiopatologia e diagnóstico das
dislipidemias.
• 9. Função cardíaca: diagnóstico laboratorial do IAM, através da
determinação laboratorial de enzimas (CK, CKMB) e marcadores
cardíacos (troponina e mioglobina).
• 10. Equilíbrio ácido básico: acidose e alcalose respiratória e
metabólica.
BIBLIOGRAFIA:
• BÁSICAS
• BURTIS, C.A., ASHWOOD, E.R. Tietz - Fundamentals of
clinical chemistry. Química clínica fundamental. 5 ed.
Philadelphia: Saunders Company, 2001.
• MOURA, R.A. Técnicas de Laboratório. 3 ed. São Paulo:
Atheneu, 2006.
• MONTGOMERY, R. Bioquímica: uma abordagem dirigida
por casos. Porto Alegre:Artes Medicas,1994.
COMPLEMENTARES
• ALLINGER, L. M. Química orgânica. 2 ed. Rio de Janeiro:
Guanabara Koogan, 1978.
• BRACHT, A. ISHI-IWAMOTO, E.L. Métodos de Laboratório em
Bioquímica. Barueri: Manole, 2003.
• GUYTON, A.C. Tratado de fisiologia médica. 9 ed. Rio de
Janeiro: Guanabara Koogan, 2006.
• HENRY, B. J. Diagnóstico clínico e conduta terapêutica por
exames laboratoriais. São Paulo: Manole, 1999.
• TIETZ, Norbert W. Applied Laboratory Medicine. Philadelphia:
W. B. Saunders, 1992.
Amostras Biológicas
• Líquidos, secreções, excreções e fragmentos de tecidos...
Sangue e Urina 
Soro Plasma
Amostras Biológicas - SANGUE
• Sangue total: elementos sólidos (eritrócitos, leucócitos e 
plaquetas), substâncias líquidas (soro ou plasma) e elementos 
gasosos (CO2 e O2).
• Plasma: é a parte líquida (não celular) do sangue que 
contém uma série de substâncias dissolvidas neste meio. 
• Soro: é a parte líquida (não celular) do sangue após 
coagulação. Não possui os fatores de coagulação.
Amostras Biológicas
• Qual destas frações do sangue é a que mais utilizamos no
laboratório de Bioquímica clínica?
• Quais as vantagens do soro em relação ao plasma?
Amostras Biológicas
O processamento desta amostra compreende as fases:
• PRÉ-ANALÍTICA
• ANALÍTICA
• PÓS-ANALÍTICA
Amostras Biológicas
TODAS AS ETAPAS DEVEM TER OS SEUS RESPECTIVOS MANUAIS 
DE PROCEDIMENTOS OPERACIONAIS PADRÃO
POPs
FASE PRÉ-ANALÍTICA
❖A fase pré-analítica consiste:
1.Registro e orientação antes da coleta
2.Coleta
3.Processamento da amostra
4.Interferentes laboratoriais
1. REGISTRO E ORIENTAÇÃO
• Nome completo, idade, sexo, uso ou não de medicamentos.
• Cadastrar os dados em um programa computacional (Back
up)
• Verificação da requisição médica.
• Orientar o paciente em relação à coleta.
• Procedimento padrão em relação às recoletas.
Fase pré-analítica
2. COLETA
• Vestuário apropriado (EPI)
• Verificação da requisição médica e escolha dos tubos.
• Etiquetagem correta dos tubos para coleta (código de
barra ou manual).
• Verificação do jejum.
• Seleção dos tubos para obtenção das amostras.
Fase pré-analítica
Seleção dos tubos
• Quando necessita-se de sangue total ou plasma para 
algumas análises usam-se anticoagulantes.
• Os mais usados são:
• EDTA (ácido etileno-diamino-tetra-acético) –
determinações bioquímicas e hematológicas 
• Heparina – provas bioquímicas
• Oxalatos – provas de coagulação
• Citratos – provas de coagulação 
• Polianetol-sulfonato de sódio – hemoculturas 
Fase pré-analítica
Tampa roxa
• Tubos com vácuo:
• Com anticoagulante EDTA sódico ou potássico
• EDTA liga-se aos íons cálcio, bloqueando assim a 
cascata de coagulação
• Obtém-se assim o sangue total para hematologia 
• Testes:
• Plaquetas
• Hemograma
• Eletroforese de hemoglobina
• Hemoglobina glicada
Fase pré-analítica
Tampa verde
• Tubos com vácuo:
• Paredes internas revestidas com heparina.
• Produção de uma amostra de sangue total.
• Estabilização por até 48 horas.
• Testes bioquímicos.
Fase pré-analítica
Tampa azul
• Tubos com vácuo:
• Contém citrato de sódio
• Anticoagulante utilizado para a obtenção de plasma 
para provas de coagulação:
• Tempo de Coagulação
• Retração de Coágulo
• Tempo Parcial de Tromboplastina
• Tempo de Protrombina
Fase pré-analítica
Tampa cinza
• Tubos com vácuo:
• Contêm um anticoagulante e um estabilizador, em
diferentes versões:
• EDTA e fluoreto de sódio
• Oxalato de potássio e fluoreto de sódio
• Heparina sódica e fluoreto de sódio
• Ocorre inibição da glicólise para determinação da
taxa de glicose sanguínea (tubos para dosagem de
glicose)
Fase pré-analítica
Tampa vermelha/amarela
• Tubos com vácuo:
• Sem anticoagulante.
• Obtenção de soro para bioquímica e sorologia.
• Exemplo de testes:
• Creatinina
• Glicose
• Uréia
• Colesterol
• Pesquisa e identificação de anticorpos e ou
antígenos no soro (HIV, HBsAg, HCV, toxoplasmose
entre outros..)
Fase pré-analítica
• Para a obtenção do SORO (contém todos os analitos
com exceção dos fatores de coagulação) para as
análises, utiliza-se:
• Tubo seco (sem anticoagulante)
• Esperar 20-30 min coagulação
• Centrifugar 5-10 min a 3000 RPM
• Separar o sobrenadante
Fase pré-analítica
Sequência de coleta para tubos plásticos de 
coleta de sangue
• 1. Frascos para hemocultura.
• 2. Tubos com citrato (tampa azul-claro).
• 3. Tubos para soro com ativador de coágulo, com ou sem gel 
separador (tampa vermelha ou amarela).
• 4. Tubos com heparinacom ou sem gel separador de plasma 
(tampa verde).
• 5. Tubos com EDTA (tampa roxa).
• 6. Tubos com fluoreto (tampa cinza).
Fase pré-analítica
Sequência de coleta para tubos de vidro de 
coleta de sangue
• 1. Frascos para hemocultura.
• 2. Tubos para soro vidro-siliconizados (tampa vermelha).
• 3. Tubos com citrato (tampa azul-claro).
• 4. Tubos para soro com ativador de coágulo com gel separador 
(tampa amarela).
• 5. Tubos com heparina com ou sem gel separador de plasma 
(tampa verde).
• 6. Tubos com EDTA (tampa roxa).
• 7. Tubos com fluoreto
Fase pré-analítica
COLETA
• VENOSO
• ARTERIAL
• CAPILAR
Fase pré-analítica
VENOSO
COLETA VENOSA
Posição para coleta:
• Vertical (em pé) (aumenta 5-15% a concentração das 
macromoléculas)
• Horizontal (deitado)
• Ângulo de 90º (sentado)
Fase pré-analítica
COLETA VENOSA
Seleção da veia para punção:
• Selecionar uma veia palpável
• Não selecionar braço que foi realizada mastectomia
• Não selecionar braço com infusão intravenosa
• Não selecionar braços com hematomas ou com várias punções 
prévias
• Nunca aplicar ”tapinhas” na veia, quando houver dificuldade, 
optar por uma bolsa de água quente.
• Não é aconselhável abrir e fechar a mão.
Fase pré-analítica
COLETA VENOSA
Garrote
• Tempo ideal é até no máximo 2 minutos.
Problemas :
HEMOCONCENTRAÇÃO
Fase pré-analítica
COLETA VENOSA
Após procedimentos anteriores:
Higienização do braço
Flebotomia
Orientar paciente após a coleta
Fase pré-analítica
RN (2,5 – 4,5 kg): 2,5 a 3,5 ml de sangue
Até 45 kg: 30 ml (normalmente se coleta 5-10 ml)
Veia cubital 
mediana
Veias: cefálica, cubital e basílica.
Coleta arterial
• O paciente deve repousar durante 30 minutos antes da coleta, que 
deve ser realizada com uma agulha de 2,5 cm de comprimento.
• O local da punção pode ser anestesiado;
• A seringa deve ser heparinizada;
Fase pré-analítica
30-45º
45º - 60º
45º - 90º
Coleta capilar
Não devem ser puncionados:
• Área central do calcanhar;
• Dedos de crianças menores de um ano;
• Locais inchados ou previamente 
puncionados 
Fase pré-analítica
Punção digital ou de calcanhar:
Fase Pré- analítica
3. PROCESSAMENTO DAS AMOSTRAS
• Centrifugação
• Análise visual da amostra
• Armazenamento
• Transporte das amostras
Fase Pré- analítica 
4. INTERFERENTES
• Variações Intra-individuais
1. Jejum/Dieta 
2. Postura
3. Exercícios físicos
4. Ciclo menstrual
5. Medicamentos
Fase Pré- analítica 
• Variações Interindividuais
1. Idade
2. Sexo
3. Raça
Fase Pré- analítica 
• Outras variações
1. Gravidez 
2. Tabagismo
3. Álcool
4. Estresse
5. Hospitalização e imobilização
6. Tempo de garroteamento
7. Cafeína
8. HemóliseHemólise
Hemólise
• Relação da concentração ou da atividade de 
alguns parâmetros nas hemácias e no soro:
• LDH 160:1
• AST 40:1
• Potássio 23:1
• ALT 6,7:1
• Glicose 0,8:1
• Fósforo 0,8:1 
Fase Pré- analítica 
• Outras variações
1. Administração de contrastes para exames de 
imagem
2. Realização de toque retal
3. Hemodiálise
4. Transfusão sanguínea 
5. Infusão de fármacos
Referências
• Recomendações da Sociedade Brasileira de Patologia
Clínica/Medicina Laboratorial para coleta de sangue
venoso (2ª edição), 2009.
• MOTTA, V.T. Bioquímica clínica para o Laboratório –
Princípios e interpretações, 4 ed. Porto Alegre: Editora
Médica Missau, 2003, p. 43-55.