Sistema complemento - Imunologia

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Sistema complemento
Análises clínicas
Tânia Silvia Fröde
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Sistema complemento
Definição
Funções
Vias de ativação do complemento
 	3.1 Via Clássica
 	3.2 Via Alternativa
	3.3 Via Comum
4. Sistema Complemento e doenças
5. Técnicas Laboratoriais
 	5.1 CH 50
 	5.2 AH 50
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1. Definição
Conjunto de 18 proteínas séricas termo-lábeis, sintetizadas no fígado. 
O complemento, consiste em um sistema de proteínas que estão na forma inativa no plasma e ativado em forma de cascatas . A ativação desta cascata promove a amplificação da resposta.
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1. Definição
Nomenclatura
 11 componentes – C + (1 a 9) 
 2 proteínas (fatores) – letras B e D.
 Os fragmentos – letras minúsculas (ex. C2a (maior fargmento) e C2b).
 Proteínas reguladoras – letras H e I ou pela abreviatura de seus nomes (ex. C1 INH)
 4 receptores – letras CR + (1 a 4).
 Os restantes, tem o nome do fragmento + R, ex: C5aR.
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Via Clássica
3. Vias de ativação
Via Alternativa
Via Comum
Via da Manose
Imunocomplexo, apoptose, vírus, bactérias G-, PCR
vírus, bactérias, viroses, tumor
Micróbios com grupamento manose
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Via Clássica
3. Vias de ativação
Ag
Via Comum
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Via Clássica
3. Vias de ativação
Ag
Via Comum
MASP1, 2, 3
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Via Alternativa
3. Vias de ativação
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Via Comum
3. Vias de ativação
Via Clássica
Via Alternativa
MAC
Célula
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Turgeon M.L. Immunology and serology in laboratory medicine, 2009, 4ed.
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2. Funções
Opsonização na fagocitose: C3B, IC3B
Anafilaxilatoxina/inflamação (resposta vascular) C5A>C3A>C4A
Ativação de PMN: C5A
Lise celular: C5-C9
Remoção de complexo imune/ativação de LB: C3B, iC3b, C3dg (via clássica)
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Elevado níveis do complemento
Inflamação
Trauma
Doença aguda (infarto agudo miocárdio)
Limitado valor clínico
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Diminuição dos níveis do complemento
-Ativação excessiva do sistema
-Consumo excessivo das proteínas do sistema
-Defeito genético com ausência de um dos componentes do sistema
Importante valor clínico
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4. Sistema complemento e doenças
C1q- síndrome LES-like, agamaglobulinemia
C1r- síndrome LES-like, dermatomiosite, vasculite, infecções recorrentes, glomerulonefrite, lesão de pele necrosante, artrite
C1s: LES, síndrome LES-like
C1INH: angiodema hereditário, nefrite lúpica
C2: infecções piogênicas recorrentes, LES, síndrome LES-likelupus discóide, glomerulonefrite membranoproliferativa, dermatomiosite, sinovite, púrpura, hipertensão, doença de Hodgkin, leucemia linfocítica crônica, dermatite herpetiforme, polimiosite
C3: infecções piogênicas recorrentes, síndrome LES-like, artralgias, rash pele
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4. Sistema complemento e doenças
C3 inativador: infecções piogênicas recorrentes, urticária.
C4: síndrome LES-like, LES, síndrome dermatomiosite-like, vasculitis
C5: infecções por Neisseria, LES
C5: disfunção: doença de Leiner, infecções de pele e óssea por bactérias G-
C6: Infecções por Neisseria, LES, fenômeno de Raynauld, síndrome da esclerodermia-like, vasculite
C7: Infecções por Neisseria, LES, fenômeno de Raynold, síndrome da esclerodermia-like, vasculite
C8: Infecções por Neisseria, xerodermia pigmentosa, síndrome LES-like
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4. Sistema complemento e doenças
Doenças reumáticas com formação de imunocomplexos
LES
Arttrite reumatóide (com doença extra-articular)
Vasculite sistêmica
Crioglobulinemia 
Glomerulonefrites
- pós-estreptocócica
Membranoproliferativa
Turgeon M.L. Immunology and serology in laboratory medicine, 2009, 4ed.
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4. Sistema complemento e doenças
Doenças infecciosas
Endocardite bacteriana subaguda
Sepsis por pneumococos e gram-negativos
Viremias (hepatite B, sarampo)
-Infecções parasitárias (malária)
Deficiência de proteínas
C1 INH – angiodema
Deficiencia fator 1
Deficiencia fator H
Turgeon M.L. Immunology and serology in laboratory medicine, 2009, 4ed.
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4. Sistema complemento e doenças
C1q- síndrome LES-like, agamaglobulinemia
C1r- síndrome LES-like, dermatomiosite, vasculite, infecções recorrentes, glomerulonefrite, lesão de pele necrosante, artrite
C1s: LES, síndrome LES-like
C1INH: angiodema hereditário, nefrite lúpica
C2: infecções piogênicas recorrentes, LES, síndrome LES-likelupus discóide, glomerulonefrite membranoproliferativa, dermatomiosite, sinovite, púrpura, hipertensão, doença de Hodgkin, leucemia linfocítica crônica, dermatite herpetiforme, polimiosite
C3: infecções piogênicas recorrentes, síndrome LES-like, artralgias, rash pele
C3 inativador: infecções piogênicas recorrentes, urticária.
C4: síndrome LES-like, LES, síndrome dermatomiosite-like, vasculitis
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5. Sistema complemento e doenças
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7. Técnicas laboratoriais
 
DOSAGEM DE CH50 
 Material: soro
 Método: ELISA ou Hemólise total
 DOSAGEM DE C3 e C4 
 Material: soro
 Método: Nefelometria
 DOSAGEM C1 inibidor 
 Material: soro
 Método: ELISA
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Dosagem de CH50
(Reação de hemólise total)
 
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CH50
 
Dosagem da atividade do sistema complemento
Método: Reação de hemólise total
Princípio: O complemento atua sobre os eritrócitos de carneiro, sensibilizados com anti-eritrócito de carneiro, hemolisina, provocando a lise em 50% desses eritrócitos, provando o extravasamento de Hemoglobina.
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CH50
 
Via Clássica
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CH50
 
Cuidados: 	
 Hemólise, calor, precisão no volume
			
Amostra: 	
 Soro sem hemólise (2,0 mL)
 Realizar a dosagem imediatamente ou congelar (-20 ºC). O descongelamento deve ser brando (8 ºC) ( complemento)
 Jejum obrigatório de 8 h 
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CH50
 
Diluição da hemolisina: 		
Ex: 1 UH------1\2000
 2 UH------1\1000
 4 UH------1\500
1-------------500mL
X--------------10mL
X=0,02 mL q.s.p 10 mL
Hemácias de carneiro a 5%: 		
5-------------100mL
X--------------10mL
X=0,5 mL q.s.p 10 mL
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CH50
 
Preparação do sistema hemolítico: 		
SISTEMA HEMOLÍTICO
19/05/2004
1 parte de Hemácias de carneiro a 5% 
+ 
1 parte de Hemolisina a 4 UH.
Ag – hemácias de carneiro
Ac – hemolisina 4 UH
Incubar em B.M. 37 ºC por 15 minutos
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 Colocar 0.5 mL de Sistema hemolítico 4 UH em todos os tubos
 Incubar em B.M. 37 oC por 30 minutos. 
 Centrifugar a 1500 rpm por 5 minutos.
 Leitura: Observar o último tubo onde ocorreu hemólise.
CH50
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CH50
 
Resultado: 
	
	CH50 (Dosagem da atividade do sistema complemento completo)
	Método: Reação de hemólise total
	Atividade do complemento: 94%
	Valor de referência: 90 a 94%			
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CH50
 
Interpretação do resultado: 
	
	
		
A redução da atividade do complemento estar relacionada a:
 Aumento do consumo (formação de complexos Ag-Ac)
 Síntese diminuída ou catabolismo aumentado
 Inibidores do complemento
			
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Dosagem de AH50
(Dosagem da via alternativa)
 
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AH50
 
Dosagem do sistema properdina ou via alternativa 
Definição: Ensaio hemolítico, cujo fundamento é a lise de eritrócitos de coelho mediada pelo complemento utilizando tampão EGTA que inibe a macromolécula C1, impedindo a ativação do Sistema Complemento pela via Clássica.
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AH50
 
Eritrócitos de coelho
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AH50
 
Eritrócitos de coelho
 5 x 107 /mL em 0.15 M de NaCl
a absorbância em 414 nm de 0.5 mL de células diluídas com 4.5 mL de água destilada deverá ser de 0.75 
Reagentes:
Tampão
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AH50
 
Lavar as hemácias de coelho – 3 x e ajustar a concentração para 5 x 107/mL.
Incubar o soro do paciente com tampão quelante de cálcio. 
Diluir o soro no tampão 1:6 e incubar por 15 min em banho de gelo.
Diluir o soro como se segue: 
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AH50
 
Metodologia:
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AH50
 
Continuação
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AH50
 
Cálculo de 50% de hemólise
Resultado: Expresso 1/volumede soro = (ml x 10 –1)
Este cálculo vale para cada diluíção da amostra (cada ponto) 
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AH50
 
Y (1-Y)
Diluição do soro
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CH 100- Método: Imunodifusão Radial
Valor de Referência: 50 a 150 U/mL
Condição: 0,5 mL de Soro s/hemólise - JO 8h.
C1q: Método: Imunodifusão Radial
Valor de Referência: superior a 125 g/L
Condição: 0,5 mL de Soro s/hemólise - JO 8h.
C2- Método: Imunodifusão Radial
Valor de Referência: 4 a 24 g/mL
Condição: 0,5 mL de Soro s/hemólise - JO 8h.
C3- Método: Nefelometria
Valor de Referência: 70,0 a 176,0 mg/dL
Condição: 0,5 mL Soro - JO 8h.
C4- Método: Nefelometria
Valor de Referência: 12,0 a 36,0 mg/dL
Condição: 0,5 mL Soro - JO 8h.
 
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5. Sistema complemento e doenças
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Obrigado pela atenção