Aula 10 Eletroforese

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Docente: Dyego Miranda
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Após:
Extração
Quantficação
PCR
Visualização do resultado da amplificação pelo procedimento de Eletroforese
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Eletroforese  Consiste na migração e separação de partículas em uma matriz (suporte), submetidas a uma diferença de potencial elétrico;
Os suportes podem ser:
Papel de filtro
Acetato de celulose
Gel de agarose
Gel de poliacrilamida
A migração das partículas depende do seu tamanho e carga, além da DDP a que foram submetidas
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A amostra é inserida nos “pocinhos”
Uma corrente elétrica é aplicada
Partículas de menor tamanho ou carga mais negativa corre primeiro
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Quando submetidas a luz UV o gel apresenta um padrão de bandas. Cada banda é um fragmento de DNA de determinado tamanho.
O ladder é formado por diferentes tamanhos de DNA e serve como marcador de peso molecular
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A agarose, um polissacarídeo extraído de uma alga marinha vermelha;
Dissolve em água fervente e então gelifica quando esfria;
Mais utilizada para separação de fragmentos longos de DNA
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É utilizado em uma cuba horizontal ligada a uma fonte
Uma solução tampão é adicionada à cuba, onde irá manter estáveis as condições de pH do meio
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Brometo de etídio
Agente intercalante do DNA
Cancerígeno!
Composto fluorescente à luz UV
Nitrato de prata
Gel Red
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A poliacrilamida também pode ser utilizada com gel para a eletroforese. A poliacrilamida é uma mistura de dois polímeros, acrilamida e bisacrilamida;
Utilizada para observação de fragmentos menores (poucos pares de bases ou proteínas);
Melhor resolução do que a eletroforese em gel de agarose;
Desvantagem: Neurotóxica
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É realizada em uma cuba de eletroforese vertical.
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