Análise de artigo comparando BPA e estrogênio

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Laboratório Integrado de Morfologia
Vanessa Kiill Rios
FI: 2,088
Introdução
Tratado com combinção de fármacos de platina + Taxols
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Impacto na formação e crescimento do folículo ovariano:
Formação folicular retardada;
Diminuição do crescimento folicular
Exposição neonatal de roedores resultou em alteração morfológica nos ovários, aumento de cistos ovarianos e hiperplasia endometrial cística;
Estudos anteriores demonstraram que BPA durante a fase de desenvolvimento afeta negativamente os ovários;
No desenvolvimento prostático e de ovócitos a expressão da DNA metiltransferase (DNMT) se mostrou alterada após exposição ao BPA;
 
Em tumores ovarianos a expressão de DNMT1, 3A, and 3B se mostrou aumentada comparando com ovários sadios;
Exposição ao BPA pode mudar a expressão de modificadores epigenéticos.
Objetivo
Analisar a expressão de enzimas modificadoras de Histonas (HME);
SET 8 histona monometiltransferase coativador do Receptor de Estrogênio (ER) alfa;
SIRT 1 Classe de histona 3 deacetilase modifica proteínas, incluindo p53 e ER alfa;
Escolha feita a partir de achados anteriores em células modelo de câncer de próstata
Materiais e métodos
Tratamento e cultura celular
Linhagens OVCAR3 e SKOV3 suplementadas com with 100 U/mL de penicilina-estreptomicina e soro fetal bovino. Foram mantidas à 37C e 5% CO2 em um incubador.
Tratamento com 1, 5, ou 10 nmol/L de estradiol ou 10, 25, or 50 nmol/L de BPA por 24 horas. 
Onde necessário,iibidor de ER (IC) foi utilizado à 10 nmol/L
Todos os tratamentos foram feitos por 24h e foi utilizado 95% de etanol (0.1%) como controle veículo.
Isolamento do RNA RNA e PCR
OVCAR3 e SKOV3 foram semeadas em placas de 6 poços.
Após 48h, fez-se tratamento com 17b-estradiol ou BPA com ou sem ICI. 
RNA total foi isolado com TRIzol
Transcriptase reversa foi obtida através do kity High-Capacity RNA-to-cDNA (Life Technologies)
PCR para análise de níveis de SIRT1, SET8, e GAPDH(normalizador).
*GAPDH foi utilizado como normalizador pois sua expressão não se altera em resposta de estrogênio ou BPA.
Para avaliar se SIRT1 e SET8 estão ou não respondendo ao BPA, precisa-se de um valor base- pode ser que eles já seriam expressados. Pra isso o GAPDH, se houver alteração por exposição ao estrogênio ou BPA, esses dois valores estarão bem acima do GAPDH(que não responde à esses dois).
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Expressão de SET8 e SIRT1 em Resposta à Estrogênio e BPA em linhagem SKOV3
SET8
SET8
SIRT1
SIRT1
Conclusão
Expressão de HME’s em linhagem SKOV3 não foi significativamente impactada pela exposição ao BPA
Expressão de SET8 e SIRT1 em Resposta à Estrogênio e BPA em linhagem OVCAR3
SET8 mRNA caiu 38%, 64%, e 46% à 1, 5, and 10 nmol/L de estrogênio. SIRT1 não alterou. SET8 mRNA também caiu 19 e 20% em 25 e 50 nmol de BPA, SIRT1 não teve alterações
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Conclusão
Similar ao estrogênio, BPA também não exerceu efeito sobre a expressão de SIRT1 em linhagem OVCAR3.
Diferenças na expressão de SET8 e SIRT1 por Estrogênio e BPA é dependente da sinalização de ER
Com ICI, a expressão de SET8 em presença de estrogênio foi revertida, o que já era esperado.
Já o BPA, que sozinho não causou alterações, teve uma queda de 15% de expressão em 50nmol/L na presença de ICI.
Em SKOV3:
Conclusão
A combinação de um antagonista de ER (ICI) e BPA altera a expressão de ST8, quando o BPA sozinho não possui nenhum efeito em linhagem celular SKOV3.
Diferenças na expressão de SET8 e SIRT1 por Estrogênio e BPA é dependente da sinalização de ER
Tratamento com ICI desfez a diminuição em ST8 mRNA causada pelo estrogênio sozinho
Isso demonstra que o mecanismo pelo qual o estrogênio regula a expressão de SET8 é pela sinalização em ER.
BPA sozinho diminui SET8 mRNA em 25 e 50 nmol/L. Tratamento com ICI reverte o efeito em ambas as doses, porém apenas 50nmol/L apresentou resultado significativo.
E se liga ao ER podendo haver síntese proteica (expressão genética). Se antagonista se liga ao ER, ele bloqueia a síntese proteica. Logo, se os níveis de expressão de SET8 se mantivessem altos mesmo em presença de ICI, significaria que estaria ocorrendo por uma via que não fosse a ER (bloqueada pelo ICI), como houve uma diminuição, mostra que a expressão desses genes ocorrem por essa via e o BPA e E regulam a expressão através da mesma.
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Conclusão
BPA e estrogênio são reguladores da expressão genética em câncer ovariano via sinalização em ER.
Observação
A linhagem SIRT1 não demonstrou nenhum resultado à presença de ICI (dado não mostrado), sugerindo que essa significativa em câncer de ovário e de mama pode ser insensível à compostos estrogênicos