Cromatografia em Coluna

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Cromatografia em Coluna
Introdução Teórica
A cromatografia é um método físico-químico de separação. Ela está fundamentada na migração diferencial dos componentes de uma mistura, que ocorre devido a diferentes interações, entre duas fases imiscíveis, a fase móvel e a fase estacionária. É uma técnica versátil e de grande aplicação, pois possui uma variedade de combinações entre fases móveis e estacionárias.
O termo cromatografia foi primeiramente empregado em 1906 e sua utilização é atribuída a um botânico russo ao descrever suas experiências na separação dos componentes de extratos de folhas. Nesse estudo, a passagem de éter de petróleo (fase móvel) através de uma coluna de vidro preenchida com carbonato de cálcio (fase estacionária), à qual se adicionou o extrato, levou à separação dos componentes em faixas coloridas. Este é provavelmente o motivo pelo qual a técnica é conhecida como cromatografia (chrom = cor e graphie = escrita), podendo levar à errônea idéia de que o processo seja dependente da cor.
Esta técnica foi praticamente ignorada até a década de 30, quando foi redescoberta. A partir daí, diversos trabalhos na área possibilitaram seu aperfeiçoamento e, em conjunto com os avanços tecnológicos, levaram-na a um elevado grau de sofisticação, o qual resultou no seu grande potencial de aplicação em muitas áreas.
A cromatografia pode ser utilizada para a identificação de compostos, por comparação com padrões previamente existentes, para a purificação de compostos, separando-se as substâncias indesejáveis e para a separação dos componentes de uma mistura.
Objetivo
Entender a preparação do extrato;
Aprender a aplicar a amostra na placa de sílica gel;
Aprender sobre Cromatografia em Camada, identificar as substâncias no cromatograma.
Material e Reagentes
-Éter de petróleo (p.e 80 – 100ºC) ou hexano;
-Etanol;
-Clorofórmio (5mL);
-Sulfato de Sódio Anidro;
-Pipeta de Pasteur;
-Funil de separação de 60 mL;
-Becker de 10mL;
-Proveta de 10 mL;
-Placas de sílica gel;
Desenvolvimento do cromatograma (Amostra Bic preta)
Pegar a Coluna, colocar o algodão e depois colocar a sílica, o algodão e a amostra colocar em um suporte universal como a gana, colocar a coluna e iniciar todas as seis fases.
1 fase: 5 ml de hexano;
2 fase: 5 ml de clorofórmio + metanol 9:1
3 fase: 5 ml de clorofórmio + metanol 8:2
4 fase: 5 ml de clorofórmio + metanol 1:1
5 fase: 5 ml de metanol
6 fase: 5 ml de butano + h2o + ac. Acetileno
1 fase: Quando colocado o hexano o algodão subiu. (amostra transparente)
2 fase:Quando coloca do o clorofórmio 9:1 entrou em contato com a amostra, que começou a se misturar com a sílica ficando com a amostra na cor roxa e o algodão amarelo.
3 fase: Colocando a 3 fase a cor roxa foi saindo e a cor amarela foi predominando , a sílica começou a ficar na cor verde clara.
4 fase: Colocamos a 4 fase e mudamos o tubo de ensaio pois a amostra foi ficando incolor.
5 fase: Pulamos
6 fase: Fomos direto para a sexta faze para terminar de limpar a sílica.
Conclusão
Após aplicação do extrato na placa de sílica gel e a introdução do material no béquer com SOMENTE clorofórmio, o líquido foi absorvido rapidamente, porém após 20 minutos a absorção ficou cada vez mais lenta e a mancha só pode ser “arrastada” conforme houve o isolamento da entrada de ar (o béquer foi tampado com papel ofício) e, então, a mancha foi “arrastada” até a linha superior da placa de sílica gel, concluindo a reação e em seguida foi levada à estufa.