Biofísica 1

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Pontifícia Universidade Católica de Goiás
Escola de Ciências Médicas, Farmacêuticas e Biomédicas
Acadêmico: Eduardo do Couto Soares
Professora: Suzana Ferreira Alves
Curso: Farmácia
Técnicas espectrofotométricas, esterilização, eletroforese e radioimunoensaio
Espectrofotometria
Define-se como espectrofotometria a técnica onde se utiliza a luz para medir a concentração de determinada solução. Este método estuda a interação da luz com a matéria e assim possibilita a realização de variadas análises. A espectrofotometria é bastante utilizada em diversas áreas, como na química, física, bioquímica e alguma engenharias.
O equipamento mais utilizado nos métodos fotométricos é o espectrofotômetro. O espectrofotômetro possui diversas aplicações para análise, sendo que estas podem ser quantitativas (identificação da concentração da substância) e qualitativas (identificação de uma substância desconhecida).
Como funciona um espectrofotômetro?
-Coloca-se determinada amostra dentro do espectrofotômetro;
- Há uma fonte de luz e um dispositivo chamado monocromador, este divide a luz em comprimentos de onda individuais(cores);
- Uma fenda ajustável permite apenas um comprimento de onda específico através da solução de amostra;
-O comprimento de onda da luz atinge a amostra, que está em um pequeno recipiente(cubeta);
-A luz passa através da amostra e é lida pelo detector.
Principais componentes de um espectrofotômetro 
Fonte de Luz: é composta por uma lâmpada de deutério e uma lâmpada de tungstênio. A lâmpada de deutério emite radiação UV e a de tungstênio emite luz visível.
Monocromador: alguns equipamentos ainda possuem um prisma como monocromador, porém, os mais modernos possuem dispositivos eletrônicos que transformam a luz incidida em vários comprimentos de onda em um único comprimento de onda, ou seja, luz monocromática.
Detector: é um dispositivo que detecta a fração de luz que passou pela amostra e transfere para o visor e para o computador acoplado ao aparelho.
Amostras: só podem ser analisados por espectrofotometria de absorção compostos que absorvem luz. Em caso de soluções fortemente coloridas como permanganato, dicromatos, cromatos e outros compostos com cores altamente acentuadas deverão ser feitas, no mínimo, 5 diluições.
Cubeta / Recipiente: é um pequeno recipiente utilizado para conter o material a ser analisado. As cubetas podem ser quadradas, retangulares ou redondas e são constituídas de vidro, sílica (quartzo) ou plásticas.
Existem, basicamente, 3 tipos de espectrofotometria: a  espectrofotometria astronômica que estuda o poder de separação de duas linhas de absorção ou de emissão do espectro eletromagnético de uma estrela, isto é, pela sua resolução espectral; a espectrofotometria de absorção atômica, no qual é um método de análise usado para determinar qualitativamente e quantitativamente a presença de metais; a espectrofotometria no Infra-vermelho.
Esterelização
São processos físicos ou químicos utilizados para eliminar as formas vegetativas e esporuladas de instrumentos e outros materiais. Os métodos utilizados podem ser físicos ou químicos e dependem da natureza do material e da quantidade de microorganismos a serem destruídos.
Físicos: 
-Estufa (calor seco);
-Autoclave (calor úmido);
-Raios gama;
Químicos:
-Glutaraldeido;
-Formaldeido;
-Radiação óxido de etileno;
-Plasma de peróxido de hidrogênio;
-Vapor de formaldeído.
É imprescindível usar os EPI’s para desenvolvimento das técnicas de limpeza e desinfecção. São eles: aventais impermeáveis, luvas, antiderrapantes, óculos de proteção, mascara, entre outros.
Eletroforese
Eletroforese é um método analítico utilizado para separar misturar que estão carregada eletricamente, utilizando para isto um campo elétrico. Também pode ser utilizada para caracterizar determinada molécula quanto a sua massa relativa e o seu ponto isoelétrico. A eletroforese pode ser livre(sem suporte) ou com suporte. Em análises clínicas, esta técnica tem grande valor diagnóstico uma vez que é possível determinar a concentração de substâncias no soro humano.
Materiais usados em eletroforese:
- Fonte de energia: A fonte usada em eletroforese tem a função única de fornecer corrente contínua;
-Cuba eletroforética(câmara com uma divisória central): possui uma ponte para adaptar o suporte usado para aplicação da mistura que se deseja separar;
- Suportes: local onde se aplica a amostra a ser analisada;
- Aplicadores: podem ser seringas, micropipetas, capilares de vidro ou aplicadores específicos para eletroforese;
- Solução tampão: mantem o pH constante e também é uma solução condutora de corrente elétrica. O tampão também ajuda a manter o ambiente com uma atmosfera úmida, isto evita o ressecamento do suporte decorrente do calor gerado pela passagem de corrente elétrica pelo suporte.
Radioimunoensaio
Consiste em um método de dosagem de substâncias presentes nos fluidos corporais, sendo que estas podem ser até hormônios. O radioimunoensaio teve origem em 1934 quando Collip e Anderson descreveram a presença e ação dos anticorpo quando da injeção de hormônios bovinos em ratos. A técnica de radioimunoensaio é um dos métodos mais sensíveis para análise quantitativa antígeno-anticorpo, porém existem algumas limitações como: custo, licença, vida média do radioisótopo, risco operacional, entre outros. Nesta técnica o anticorpo reconhece especificamente o antígeno analisado.
Vantagens:
-sensível, rápido e preciso;
-análise quantitativa de reação (antígeno-anticorpo);
-limitar detecção: pictogramas;
Desvantagens:
-alto custo;
-vida média de reagentes (radioisótopos);
-risco operacional.
Os radioisótopos mais usados são: I125(vida média de 57,5 dias e se liga com resíduos de tirosina das proteínas) e I131(vida média de 8 dias).
Referências Bibliográficas
HALLIDAY, D.; RESNICK, R.; WALKER, J. Fundamentos de física I. LTC: Rio de Janeiro, 2002.
Harris, Daniel C.; Análise Química Quantitativa;tradução Carlos Alberto Riehl...[et al.].5.ed. LTC Editora, Rio de Janeiro:1999. cp.19,20,21.
Lenhinger, Albert Lester; Princípios de Bioquímica.3.ed. Guanabara Koogan, Rio de Janeiro:1992. cp.3.
BIOFÍSICA: PARA CIÊNCIAS BIOMÉDICAS, RODRIGUES DE OLIVEIRA,JARBAS
http://www.ufrgs.br/biofisica/Bio10003/MIMUNO.pdf
http://www.kasvi.com.br/espectrofotometria-principios-aplicacoes/
OKUNO, E. Física para ciências biológicas e biomédicas. São Paulo: Harbra, 2005.