Aula prática 1 resolução. Pedro Soares

Prévia do material em texto

Pedro Henrique Soares – 12/09/11
PRÁTICA: Filtração glomerular 
O delicado equilíbrio dos constituintes do sangue é essencial à vida; os rins, como verdadeiros filtros vivos, mantêm exato esse equilíbrio [homeostase].
O processo de filtração começa na cápsula de Bowman.
Para isso deverá ocorrer certas diferenças de pressão
O esfíncter da arteríola eferente tem grande importância para modulação dessa diferença de pressão.
Método que vai provar se está ocorrendo de fato a filtração glomerular.
1-CLEARENCE DE CREATININA
2-CREATININA
3-COLETA DE MATERIAL BIOLÓGICO
4-IDENTIFICAÇÃO
5-ESPECTOFOTOMETRIA
6-DESPROTEINIZAÇÃO
7-REAÇÃO COLORIMÉTRICA
8-CURVA PADRÃO
9-VALOR NORMAL DO CLEARENCE
10-CÁLCULO DO CLEARENCE
Clearence de Creatinina
Clearence = depuração; é um processo de limpeza, de separação, de clareamento ou mesmo de depuração, isso são sinônimos. Define-se como o volume de plasma que fica livre de uma determinada substancia dividido por uma unidade de tempo [minuto]. Mas o importante é saber o que estamos limpando.
Quais foram as substancias apresentadas em sala de aula que são usadas para medir clearence?
Apenas duas: Creatinina e Inulina.
A importância dessas substancias e sua finalidade dentro do processo de filtração glomerular.
Porque que é utilizado a inulina e porque que é utilizado a creatinina? [uma mais do que a outra em determinadas situações]
Uma substancia para ser considerada ideal para medir a filtração glomerular ela precisa ser totalmente filtrada e totalmente excretada. Então se filtrou 10 gramas haverá 10 gramas na urina. Se houver menos que isso – significa que há perda de nefrons, pois não está filtrando como deveria. 
Quais as substancias que possuem essas qualidades?
A inulina – porém essa substancia é mais usada na pesquisa, pois é uma substancia exógena que precisa ser infundida durante o teste no elemento com que se está trabalhando. Essa substancia após sua infusão, só vai entrar no equilíbrio do nosso organismo após duas horas da infusão. Os clearence ideais são aqueles feitos em 24 horas. Se eu preciso infundir inulina por duas horas, significa que eu terei de internar um paciente para trabalhar com ele durante 26 horas [duas horas para esta se estabilizar no organismo e 24 horas para o exame de clearence]. É inconveniente, pois você precisa injetar continuamente essa substancia, então é necessário que o médico ou os enfermeiros ou técnicos estejam acompanhando aquele paciente constantemente. Na área de pesquisa se possui uma bomba de infusão que faz esse processo sozinho, basta checar os estoque para garantir que não haja falta. 
***Os clearences não necessariamente precisam ser de 24 horas – podem ser de 12, 6, 2 horas – ou até imediatamente utilizando a creatinina sérica.
Creatinina
É uma substancia endógena, daí não existe a dificuldade de fazer infusão nem nada. Vai apenas marcar o tempo e pegar os dados da coleta. 
Mas o que é a creatinina?
É o produto da transformação da creatina muscular – é um composto orgânico nitrogenado não proteico que é transformado a partir da desidratação da CREATINA muscular [portanto é produto do metabolismo muscular.]
Coleta do material biológico
Os médicos devem saber o método e saber orientar adequadamente o paciente.
Como faz a coleta?
Tem que pegar o peso do paciente e a altura. 
Ele terá de esvaziar totalmente a bexiga no dia do teste.
A partir do momento em que ele esvaziou a bexiga começa-se a cronometrar o tempo.
Supondo-se que começou as 8 horas da manhã, então até as 8 horas do dia seguinte será o período do teste. E irá se trabalhar com toda urina produzida nesse período.
Também precisa-se de uma quantidade de sangue heparenizado [mas não é obrigatório coletar no início do exame, pode ser quando ele for entregar a urina coletada]
***heparenizado = contém heparina para evitar a coagulação do sangue.
Identificação
Material que não está identificado não poderá ser executado em hipótese alguma.
Qual o espaço da identificação?
Obviamente o nome do paciente + o material biológico ali existente.
Espectrofotometria
É o processo de medir a energia proveniente de uma luz branca, pois a lei de Lambert-Beer só se aplica a luz monocromática. 
Irá se medir a absorbância [Densidade Óptica – DO]
Quando irá se medir o DO, os raios luminosos emitidos são absorvidos e outros são transmitidos. A luz transmitida será lida por uma célula fotoelétrica onde será lida na unidade de comprimento de onda e poderá ser lida como transmitância ou absorbância por densidade ópitica.
Desproteínização 
O processo de desproteínização é essencial porque?
Por que se fará uma reação colorimétrica logo em seguida e essa reação significa que substancias que ali estão podem adquirir cor [substancias cromógenas]
A creatinina será a única substancia que resta na amostra.
Como é feito?
Na prática são usados dois reagentes:
Ácido sulfúrico
Tungstato de sódio
Quando se junta esses dois reagentes haverá a formação do ácido tunguístico. Esse será o agente desprotéinizante.
Reação colorimétrica
O que é reação colorimétrica?
É um processo em que usa-se alguns reagentes para que se tenha uma substancia com uma reação conhecida, na qual a coloração se saiba definir. A cor será amarelo-alaranjado [cor que a reação da creatinina gera]
Quando eu fizer minha dosagem a olho nu já será possível ver o grau de concentração [cor mais forte ou mais fraca], mas a medição do grau de fato será feita pelo processo de espectrofotometria.
Substancia que formam o agente colorimétrico:
Ácido pícrico
Hidróxido de sódio
A união desses dois é feita na reação de cor que gera o picrato alcalino
Curva padrão
O que é curva padrão?
É uma referencia
No caso da creatinina é um gráfico de DO por concentração.
Para formar a curva padrão de creatinina pega-se uma solução de 100mg% e faz-se diluições.
Tira-se 1 ml da solução original e adiciona 99ml de água – surge uma solução 1mg%
Faz-se procedimentos similares com 2, 3, 4 e 6 mg% - pega a DO e cada um e plota em um gráfico. Surgirá uma reta
Quando fizer uma dosagem da amostra coletada, encontrarei uma determinada DO. 
Daí basta olhar no gráfico formado para saber a partir da DO encontrada a concentração correspondente no gráfico. Essa é sua concentração na amostra.
É pra isso que serve a curva padrão.
***Faz-se uma solução de creatinina
100 ml de solução a 100mg %
Quanto foi de creatinina para formar essa solução? 
100 mg
Em cada ml há uma mg
Fator de correção da curva de creatinina
Somatório das concentrações dividido pelo somatório das DOs 
O fator de correção da curva padrão em nosso laboratório é 21,5
Como trabalharei com minhas dosagens?
Pegarei o DO encontrado em minha amostra e multiplicarei por 21,5 – essa é a concentração da solução.
Valor normal do clearence 
O valor normal do clearence é 125ml / minuto
Isso é a média.
Cálculo do clearence de creatinina
U*V° / P
U = concentração de creatinina urinária
V° = fluxo urinário
P = concentração de creatinina plasmática
Fluxo urinário é o volume urinário do período do teste divido pela quantidade de minutos do período de nosso teste [1440 minutos = 24 horas]
Volume urinário do teste laboratorial = 484 ml
O valor encontrado será expresso em ml/minuto.
Na prática o valor por si só ainda precisa passar por uma correção para levar em conta a massa MUSCULAR do mesmo, pois a creatinina é fruto do metabolismo muscular.
Peso do paciente: 70 kg
Altura: 1,59m
Usamos uma tabela para descobrir a área de superfície [corporal] de um paciente.
1,72 é o fator de correção corporal para nosso paciente [superfície corporal].
Para fazer a correção corporal multiplica-se o valor do clearence vezes 1,73 e isso tudo dividido pela superfície corporal.
A unidade é será ml/min/173 cm2
***1,73 é um número padrão retirado de superfície corporal de uma média com pessoas saudáveis.
A primeira etapa feita foi preparar uma diluição da urina 30 vezes1 ml de urina e 29 ml de água
No entanto o professor pegou 14,5 de água e 0,5 de urina – mesmo assim mantém a proporção.
Em seguida pegou H2SO4 para fazer o processo de desproteínização da urina e do plasma. – procedimento 6 no roteiro
Em um vidro colocou-se o ácido sulfúrico e o tungstato de sódio + o plasma sanguíneo
Em outro vidro colocou-se o ácido sulfúrico e o tungstato de sódio + urina diluída
Ambos os frascos foram agitados em máquina
Depois foram centrifugados por 8 minutos – 3000 rpm
***10 minutos seria o ideal
Depois de centrifugadas, uma amostra apresentava precipitado e outra não. 
Qual era plasma e qual era a urina?
A que apresentava precipitado era a amostra de plasma, pois o plasma possui uma quantidade maior de proteínas do que a urina.
Depois pega-se o sobrenadante dessas amostras para fazer a reação colorimétrica.
Isso se fará por meio do picrato alcalino [amarelo alaranjado]
Quanto mais creatinina, mais para o vermelho alaranjado fica.
Quanto menos creatinina, mais para o amarelo fica.
A reação dura 15 a 20 minutos
Depois é feita a leitura no espectrofotômetro 
 *** foi feita uma diluição da urina 30 vezes.
Embora tenha sido diluída; a que aparece mais escura na coloração é a amostra de urina, pois esta tem mais creatinina do que o plasma sanguíneo.
O espectrofotômetro é calibrado em 520 
Zerado o aparelho com o Blank, é feita a leitura.
74,5 é transmitância do plasma
45,5 é a transmitância da urina
Nossa curva padrão foi feita em D.O. então temos que converter a transmitância para D.O usando a tabela anexa ao roteiro.
74,5 = 0,128 é o D.O do plasma e corresponde a 2,752 mg %
45,5 = 0,342 é o D.O da urina 7,353 mg %
484 é volume de urina
1440 minutos é o tempo do teste
70 kilos de peso
1,59 de altura 
Superfície corporal de 1,72
Com isso dá pra calcular o clearence de creatinina com correção corporal.
****nossa urina foi diluída 30 vezes, e assim deve ser levado em conta para o cálculo final. Portanto quando se calcular o clearence, não se esqueçam que tem que multiplicar por 30.
APÓS O TERMINO DA PRÁTICA
1-calcular o valor da depuração da creatinina endógena
C = U * V / S 
C= clearence
V= volume por minuto de urina
S= concentração de creatinina no sangue
U= concentração de creatina na urina
C = 7,353 * 0,3361 / 2,752 = 0,8980171875 * 30 = 26,9405 ml/ minuto
2- corrigir para 1,73 m2 de superfície corporal
1,72 é o fator de correção corporal para nosso paciente [superfície corporal].
Para fazer a correção corporal multiplica-se o valor do clearence vezes 1,73 e isso tudo dividido pela superfície corporal.
C *1,73 / 1,72 = 27,0971 ml/minuto
3- fazer um esquema da reação;
4- analisar o valor do método para a clínica