RELATÓRIO AULA PRÁTICA - Bacterias

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Aula dia:07-03-2018
Procedimento #1
O objetivo da aula prática foi, essencialmente verificar a presença de microorganismos em partes do corpo humano por meio da análise de swabs friccionados nos integrantes do grupo.
Foram coletados materiais da boca, da mão, do umbigo e da garganta. Esses materiais foram coletados com swabs umedecido em solução salina estéril. Posteriormente esses swabs foram inoculados em um placa de ágar nutriente, previamente dividida em 4 seções, cada uma para uma parte a ser analisada.
A placa inoculada foi incubada para o possível cultivo das colônias bacterianas.
Procedimento #2
O objetivo desse procedimento foi observar e interpretar os mecanismos de reação de Gram com oum método de coloração diferencial.
Para o fim desejado foi executado os seguintes procedimentos:
Preparo de 3 esfregaços provenientes de 3 colônias bacterianas desconhecidas da seguinte maneira:
Foi usada uma alça de platina para transferir uma gota de solução salina de um tubo de ensaio para as lâminas.
Anteriormente essa alça foi flambada no bico de Bunsen.
Após a transferência da gota para a lâmina, a lâmina foi flambada novamente e resfriada no meio sólido ( região sem colônia)
Foi coletada 1 colônia, que foi transferida para a pequena gota de solução salina na lâmina. Foi bem espalhada com movimentos suaves .
Essa mistura foi seca no bico de Bunsen
		OBS: Esse procedimento foi realizado de forma individual para cada lâmina, sendo que em cada lâmina foi usada uma colônia bacteriana.
Coloração ( feita individualmente para cada Lâmina)
O esfregaço foi coberto com Violeta Genciana durante 1 minuto
Logo após o tempo, o esfregaço com Violeta Genciana foi coberto com Lugol durante 1 minuto
Após o tempo, foi lavado rapidamente em água corrente
Posteriormente foi gotejado álcool e lavado rapidamente em água corrente novamente.
Depois todo o esfregaço foi coberto com Fucsina por 30 segundos
Foi lavado em água corrente e Seco com papel toalha, retirando-se apenas o excesso de água.
Os resultados da observação ao microscópio foi o seguinte:
Lâmina 1
Ao microscópio foram observadas bactérias do gênero Streptococcus que submetidas à coloração de GRAM, apresentaram-se como Gram positivas ( coloração arroxeada)
Lâmina 2
Ao microscópio foram observadas bactérias em formato de bacilos, que submetidas à coloração de GRAM, apresentaram-se como Gram negativas ( coloração rósea)
Lâmina 3
Ao microscópio foram observadas bactérias do gênero Stafilococus, que submetidas à coloração de GRAM, apresentaram-se com Gram positivas ( coloração arroxeada)
Procedimento #3
Após a identificação das bactérias dos esfregaço foi elaborado outro experimento a fim de se determinar o poder antibiótico de 5 substâncias. Para isso em uma placa de Petri com ágar nutriente inoculou-se, com um swab umedecido em meio de cultura líquido, E. colli. Posteriormente essa inoculação foi dividida em 5 regiões onde foram colocados discos das substâncias antibióticas, inicialmente não identificadas para os alunos, para que, após cultivo dessa inoculação fosse medido o poder antibiótico dessas substâncias.
Aula Prática dia 22-03-2018
Procedimento #1
	O objetivo desse procedimento foi averiguar os resultados das culturas iniciadas na aula do dia 07-03. 
	De acordo com a observação de cada quadrante da placa de Petri inoculada, analisou-se a formação de:
Quadrante 1: 35 colônias de bactérias provenientes do swab da mão
Quadrante 2: 73 colônias de bactérias provenientes do swab da boca
Quadrante 3: 2 colônias de bactérias provenientes do swab do umbigo 
Quadrante 4: 9 colônias de bactérias provenientes do swab da garganta
	
Após a análise da formação foi feito o preparo de 4 esfregaços provenientes de 4 colônias bacterianas desconhecidas da seguinte maneira:
Foi usada uma alça de platina para transferir uma gota de água de um tubo de ensaio para as lâminas.
Anteriormente essa alça foi flambada no bico de Bunsen.
Após a transferência da gota para a lâmina, a lâmina foi flambada novamente e resfriada no meio sólido ( região sem colônia)
Foi coletada 1 colônia, que foi transferida para a pequena gota de água na lâmina. Foi bem espalhada com movimentos suaves .
Essa mistura foi seca no bico de Bunsen
		OBS: Esse procedimento foi realizado de forma individual para cada lâmina, sendo que em cada lâmina foi usada uma colônia bacteriana.
Coloração ( feita individualmente para cada Lâmina)
O esfregaço foi coberto com Violeta Genciana durante 1 minuto
Logo após o tempo, o esfregaço com Violeta Genciana foi coberto com Lugol durante 1 minuto
Após o tempo, foi lavado rapidamente em água corrente
Posteriormente foi gotejado álcool e lavado rapidamente em água corrente novamente.
Depois todo o esfregaço foi coberto com Fucsina por 30 segundos
Foi lavado em água corrente e Seco com papel toalha, retirando-se apenas o excesso de água.
Os resultados da observação ao microscópio foi o seguinte:
A Lâmina 1 (mão) apresentou bactérias de formato não identificável, devido a não focalização do microscópio na lente de 100 porém na lente de 40 foi possível observar que as aglomerações bacterianas eram de coloração Gram positiva
A Lâmina 2 (boca) apresentou bactérias de formato de cocos, sendo que havia componentes Gram positivos e Gram negativos. Essa observação foi possível no aumento de 100 no MO
A Lâmina 3 ( umbigo) apresentou bactérias de formato Diplococos Gram positivos e Vibriões Gram positivos. Essa observação foi possível no aumento de 100 no MO
A Lâmina 4 ( garganta ) apresentou bactérias do gênero Stafilococcus e Estreptococcus ambas de coloração Gram positiva. Essa observação foi possível no aumento de 100 no MO
Procedimento #2
 Após a confecção das lâminas das bactérias desconhecidas, foi feita a confecção de lâminas de duas bactérias conhecidas para a observação no MO sob aumento de 100x.
As bactérias observadas foram a E. colli e a S. aureus.
A E. colli apresentou coloração GRAM negativa, visualmente rósea, e formato de bacilo.
A S.aureus apresentou a coloração de GRAM positiva, visualmente róxea, e formato característico do gênero, semelhante a cacho de uva.
Procedimento #3
	Esse procedimento foi feito com o objetivo de analisar o resultado do experimento de sensibilidade de antibióticos.
Os antibióticos utilizados foram:
Optoquinina (OPT): A optoquina ou cloridrato de etil-hidrocupreína, um derivado da quinina, inibe seletivamente o crescimento de Streptococcus pneumoniae em concentrações muito baixas (5 µg/mL ou menos), podendo eventualmente inibir o crescimento de outros estreptococos alfa-hemolíticos, porém apenas em concentrações maiores. A prova de sensibilidade à optoquina é indicada para a diferenciação entre estreptococos alfa- hemolíticos e pneumococos (S. pneumoniae).
Novobiocina (NOV 30): Atua inibindo a enzima DNA girase bacteriana, afetando o desenovelamento do DNA, impedindo sua replicação.Separa cepas de Staphylococcus saprophyticus (Novobiocina resistente) das demais cepas de Staphylococcus coagulase negativa de importância clínica; Staphylococcus saprophyticus é a única espécie isolada em humanos como causadora de infecções urinárias.
Eritromicina (ERI): liga-se à subunidade ribossomal 50S e inibe a elongação.A eritromicina (erythromycinum) é uma das substância do grupo dos macrolídeos.A eritromicina é utilizada frequentemente em infecções por Streptococcus, Haemophilus influenzae, Mycoplasma pneumoniae, Legionella pneumophila, em uretrites não gonocócitas e no acne vulgaris.A eritromicina é habitualmente bacteriostática, mas em altas concentrações pode ser bactericida contra microrganismos muito sensíveis.
Tetraciclina (TET30): liga-se à subunidade ribossomal 30S (sítio A), impedindo a ligação do aminoacil-tRNA.Tetraciclina é um grupo de antibióticos naturais ou semi-sintéticos usados no tratamento de um amplo espectro de bactérias tanto Gram-negativas quanto gram-positivas e alguns protozoários e até algunsfungos.
Apresenta efetividade contra: Bactérias gram positivas (Streptococcus, Diplococcus, Clostridium e Actinomyces) e Bactérias gram negativas (Neisseria, Brucellas, Haemophilus, Shigella, Escherichia coli, Bordetella, Klebsiella, Vibrio e Pasteurella)
Bacitracina (BAC): é um polipeptídico ,que age impedindo com que o fosfolipídio bacteriano se regenere ao inibir a enzima D-fosforilase, consequentemente com que o ciclo de formação de parede bacteriana continue e realize função bactericida. É utilizado apenas tópica por possuir baixa biodisponibilidade oral, já que possui estrutura peptídica facilmente degradado no trato gastro-intestinal.
Nenhum dos atibióticos utilizados no teste são derivados da Penicilina, portanto, nesse teste, não há o uso de antibióticos beta-lactâmicos. Vale ressaltar essa questão, uma vez que Os antibióticos β-lactâmicos são uma classe ampla de antibióticos, que inclui a penicilina e seus derivados, que possuem como agente antibiótico, o núcleo β-lactâmico em sua estrutura molecular e é o mais usado grupo de antibióticos.
		No teste, o disco de TET 30 foi o que apresentou halo com maior diâmetro entre todos utilizados. Apresentou diâmetro de 30mm. O disco de NOV 30 apresentou um halo de diâmetro de 8mm. Os outros discos não apresentaram halo o que indica que o microrganismo cultivado não apresentava sensibilidade a essas outras substâncias.