LDH Labtest

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Finalidade . Sistema para determinação da Desidrogenase Láctica
(LDH) em soro por método cinético.
Uso profissional.
[Somente para uso diagnóstico in vitro]
Princípio . A atividade da LDH é determinada de acordo com a
seguinte reação:
LDH
Piruvato + NADH + H Lactato + NAD
A LDH catalisa a conversão do piruvato a lactato na presença de NADH. O
decréscimo da absorbância em 340 nm devido a oxidação do NADH é
proporcional à atividade da LDH na amostra.
Características do sistema . A LDH está presente em
praticamente todos os órgãos e tecidos do organismo e sua atividade
catalítica no soro é devido à presença de várias isoenzimas, que podem
formar padrões diferentes dependentes da origem da LDH presente no
soro.
Por este motivo, as condições da reação foram selecionadas com
objetivo de obter uma relação adequada entre a medição da atividade e a
concentração catalítica do padrão isoenzimático, para que as diferenças
produzidas pelo comportamento das isoenzimas fossem minimizadas,
obtendo-se velocidade máxima e reação linear em um intervalo amplo da
atividade enzimática. Como resultado da otimização, ocorre pequena
sensibilidade a variações do pH, molaridade e volume fracional da
amostra.
A escolha da direção da reação piruvato-lactato é vantajosa porque
proporciona melhor estabilidade do reagente e maior velocidade da
reação.
As substâncias utilizadas na reação se encontram distribuídas
adequadamente em dois reagentes para conferir maior estabilidade na
forma líquida original e manutenção das condições ótimas da reação,
permitindo a utilização direta dos reagentes em sistemas automáticos.
A metodologia monoreagente pode ser aplicada utilizando um Reagente
de Trabalho estável 10 dias sob refrigeração, obtendo-se um
desempenho adequado mesmo em situações de baixas demandas de
teste. O sistema permite ainda preparar o volume de Reagente de
Trabalho necessário para uma única medição da atividade enzimática da
LDH.
A metodologia utiliza medidas em modo cinético e pode ser facilmente
aplicada em analisadores automáticos e semiautomáticos capazes de
medir absorbância em 340 nm.
Metodologia . Piruvato-Lactato.
Reagentes
1. -� Reagente 1 - Armazenar entre 2 - 8 ºC.
Contém NADH 360 mol/L e azida sódica 0,095%.�
2. -� Reagente 2 - Armazenar entre 2 - 8 ºC.
Contém tampão 250 mmol/L, pH 7,5; piruvato de sódio 6 mmol/L e azida
sódica 0,095%.
Os reagentes não abertos, quando armazenados nas condições
indicadas, são estáveis até a data de expiração impressa no rótulo.
Durante o manuseio os reagentes estão sujeitos a contaminações de
natureza química e microbiana que podem provocar redução da
estabilidade.
Não utilizar o Reagente de Trabalho quando sua absorbância medida
contra água em 340 nm for igual ou menor que 0,8 ou quando se mostrar
turvo ou com sinais de contaminação.
Os cuidados habituais de segurança devem ser aplicados na
manipulação do reagente.
Os reagentes contêm azida sódica que é tóxica. Deve-se tomar cuidado
para evitar a ingestão e, no caso de contato com os olhos, deve-se lavar
imediatamente com grande quantidade de água e procurar auxílio
médico. A azida pode formar compostos altamente explosivos com
tubulações de chumbo e cobre. Utilizar grandes volumes de água para
descartar o reagente.
Material necessário e não fornecido
1. Fotômetro com cubeta termostatizada, capaz de medir com exatidão a
absorbância em 340 nm.
2. Pipetas para medir amostras e reagentes.
3. Cronômetro.
Usar soro.
Separar o soro até 1 hora após a coleta. A atividade enzimática é estável 4
dias entre 15 - 25 ºC. Não utilizar amostra com hemólise.
A variação biológica intraindividual da LDH medida em amostras colhidas
com uma diferença de no mínimo uma semana é igual a 8,6%.
LDH Liquiform
Instruções de Uso
Ref.: 86
MS 10009010056
01 Português - Ref.: 86
Precauções e cuidados especiais
Amostra
Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras de sangue
não transmitem infecções, todas elas devem ser consideradas como
potencialmente infectantes. Portanto, ao manuseá-las devem-se seguir
as normas estabelecidas para biossegurança.
Para descartar os reagentes e o material biológico sugerimos aplicar as
normas locais, estaduais ou federais de proteção ambiental.
Valores de bilirrubina acima de 10 mg/dL produzem resultados
falsamente elevados. Valores de triglicérides acima de 1800 mg/dL
produzem resultados falsamente diminuídos.
Amostras com hemólise não devem ser utilizadas porque obtêm-se
resultados falsamente elevados.
Preparo do reagente de trabalho . O conjunto de um frasco do
Reagente 1 e um frasco do Reagente 2 permite preparar o Reagente de
Trabalho. Transferir o conteúdo de um frasco do Reagente 2 para um
frasco do Reagente 1 e homogeneizar por inversão. Anotar a data de
expiração. Estável 1 dia entre 15 - 25 ºC e 10 dias entre 2 - 8 ºC quando
não houver contaminação química ou microbiana. Para preservar seu
desempenho o reagente deve permanecer fora da geladeira somente o
tempo necessário para se obter o volume a ser utilizado. Evitar exposição
à luz solar direta. Identificar o frasco do Reagente de Trabalho para evitar
confusão com outros frascos do Reagente 1.
Opcionalmente pode-se preparar menor volume do Reagente de Trabalho
utilizando a proporção de 4 (quatro) volumes do Reagente 1 e 1 (um)
volume do Reagente 2. Ex.: Para preparar 1,0 mL do Reagente de
Trabalho, misturar 0,8 mL do Reagente 1 e 0,2 mL do Reagente 2.
O Reagente de Trabalho contém tampão pH 7,5; piruvato de sódio
1,2 mol/L; NADH 300 mol/L e azida sódica.� m
Ver Observações 1, 2 e 3.
1. Em um tubo rotulado ‘‘Teste’’ pipetar 1,0 mL do Reagente de Trabalho.
2. Adicionar 0,02 mL de amostra, homogeneizar e transferir
imediatamente para a cubeta termostatizada a 37,0 0,2 ºC. Esperar 1�
minuto.
3. Fazer a leitura da absorbância inicial (A ) disparando simultaneamente1
o cronômetro. Repetir a leitura após 2 minutos (A ).2
Para avaliar a linearidade da reação, verificar se as absorbâncias
medidas em intervalos de 1 minuto são comparáveis.
Calcular o A/minuto subtraindo A de A e dividindo por 2.� 2 1
Absorbância inicial (A ) igual ou menor que 0,8 é um indicativo de que1
a amostra tem atividade elevada da LDH. Neste caso, repetir a
medição em amostra diluída. Os fotômetros semiautomáticos podem
fornecer a mensagem: substrato esgotado.
O procedimento sugerido para a medição é adequado para fotômetros
cujo volume mínimo de solução para leitura é igual ou menor que 1,0 mL.
Deve ser feita uma verificação da necessidade de ajuste do volume para o
fotômetro utilizado. Os volumes de amostra e reagente podem ser
modificados proporcionalmente sem prejuízo para o desempenho do
teste e o procedimento de cálculo se mantém inalterado.
Em caso de redução dos volumes é fundamental que se observe o volume
mínimo necessário para a leitura fotométrica. Volumes da amostra
menores que 0,01 mL são críticos em aplicações manuais e devem ser
usados com cautela porque aumentam a imprecisão da medição.
Cálculos . Ver linearidade.
É uma prática habitual calcular os resultados de atividade enzimática
utilizando um fator obtido em condições ótimas de reação que incluem:
Comprimento de onda: 340 nm 0,2 nm.�
Cubeta termostatizada a 37 0,2 ºC com 1,0 cm de espessura de�
solução.
Banda de passagem 8 nm.�
Luz espúria 0,1 %.�
Como na maioria das vezes não é possível trabalhar sob essas
condições, as boas práticas de laboratório recomendam realizar a
calibração do ensaio utilizando calibrador de enzimas indicado pelo
fabricante do reagente. A Labtest indica a linha Calibra para calibração do
sistema LDH Liquiform.
A - A1 2
�A Teste =
2
Atividade da Desidrogenase Láctica = A Teste x 8095�
O fator 8095 foi obtido nas condições propostas acima. Recalcular o fator
quando for efetuada qualquer modificação em um dos parâmetrosutilizados para calcular o fator.
Ver método para cálculo do fator.
Exemplo
A Teste = 1,4201
A Teste = 1,3022
�A Teste = (1,420 - 1,302)/2 = 0,059
Atividade da Desidrogenase Láctica (U/L) = 0,059 x 8095 = 478
Método para cálculo do fator
VT x 1000
Fator =
x V A x d�
VT = volume total do ensaio (1,02 mL)
VA = volume da amostra (0,02 mL)
1000 = conversão de U/mL para U/L
d = espessura da solução (1 cm)
� = Absortividade milimolar do NADH (6,30)
02
Interferências
Português - Ref.: 86
Procedimento
Conversão: Unidades Convencionais (U/L) x 0,0167 = Unidades SI
( kat/L)�
Características do desempenho10
Exatidão . Em duas amostras com valores iguais a 220 e 480 U/L
foram adicionadas quantidades diferentes da enzima obtendo-se
recuperações entre 97 e 107%. O erro sistemático proporcional médio
obtido em um valor de 500 U/L foi igual a 10,0 U/L ou 2,0%.
Especificidade . O método proposto foi comparado com um
método similar utilizando 40 amostras com valores situados entre
177 e 1944 U/L. A comparação resultou na equação da regressão
y = 1,023x - 17,6 e um coeficiente de correlação (r) igual a 0,999. O erro
sistemático total (constante e proporcional) verificado no nível de decisão
(500 U/L) foi igual a 6,1 U/L ou 1,22%. Como as amostras foram
selecionadas aleatoriamente em pacientes de ambulatório e pacientes
hospitalizados, pode-se inferir que o método tem uma especificidade
metodológica adequada.
Sensibilidade metodológica . Uma amostra protéica não
contendo desidrogenase láctica foi utilizada para calcular o limite de
detecção do ensaio tendo sido encontrado um valor igual a 8,9 U/L,
equivalente à média de 20 ensaios mais dois desvios padrão. Utilizando-
se a absorbância mínima detectável como parâmetro, o limite de
detecção fotométrica é de 8,1 U/L correspondendo a uma diferença de
absorbância igual a 0,001.
Efeitos da diluição da matriz . Duas amostras com valores
iguais a 1077 e 1333 U/L foram utilizadas para avaliar a resposta do
sistema nas diluições da matriz com NaCl 150 mmol/L (0,85%). Usando
fatores de diluição que variaram de 2 a 8 foram encontradas
recuperações entre 102 e 109%.
Significado clínico . Níveis séricos elevados de desidrogenase
láctica são observados em uma variedade de condições. Os valores mais
elevados são encontrados em pacientes com anemia megaloblástica,
carcinomas, choque grave e delirium tremens. Elevações moderadas
ocorrem em pacientes com infarto do miocárdio, infarto pulmonar,
anemia hemolítica, leucemia, mononucleose infecciosa e nos pacientes
com distrofia muscular progressiva. Ligeiras elevações são encontradas
em pacientes com hepatite aguda, nas icterícias obstrutivas e na cirrose.
Exemplo
1,02 x 100
Fator = = 8095
6,30 x 0,02 x 1
Calibração . A absortividade milimolar do NADH é utilizada como
sistema de referência para a calibração do ensaio. A calibração do
fotômetro utilizado é rastreável ao Standard Reference Material (SRM)
931 do National Institute of Standards and Technology (NIST).
Calibrações manuais
Verificar o fator de calibração quando o instrumento for submetido à
manutenção ou nas modificações de aplicação.
Sistemas automáticos
Branco de reagente: Água ou NaCl 150 mmol/L (0,85%);
Usar calibradores da linha Calibra - Labtest. A atividade da LDH nestes
calibradores é rastreável à absortividade milimolar do NADH.
Intervalo de calibrações:
Calibração de 2 ou 3 pontos ao mudar de lote;
Calibração de 2 ou 3 pontos quando o controle interno da qualidade
indicar.
A reação é linear até 2000 U/L. Para valores maiores, diluir a amostra com
NaCl 150 mmol/L (0,85%), realizar nova determinação e multiplicar o
resultado obtido pelo fator de diluição.
Controle interno da qualidade . O laboratório deve manter um
programa de controle interno da qualidade que defina claramente os
regulamentos aplicáveis, objetivos, procedimentos, critérios para
especificações da qualidade e limites de tolerância, ações corretivas e
registro das atividades. Materiais de controle devem ser utilizados para
avaliar a imprecisão e desvios da calibração. Sugere-se que as
especificações para o coeficiente de variação e o erro total sejam
baseadas nos componentes da variação biológica (VB) .6,7,8
Sugere-se utilizar as preparações estabilizadas da linha Qualitrol da
Labtest para controle interno da qualidade em ensaios de química clínica.
Intervalo de referência . Os intervalos devem ser usados apenas
como orientação. Recomenda-se que cada laboratório estabeleça, na
população atendida, seus próprios intervalos de referência.
Adultos: 200 a 480 U/L
03 Português - Ref.: 86
Linearidade
Soro ou plasma
Crianças e Adolescentes (U/L)9
1 a 3 anos
4 a 9 anos
10 a 13 anos
490 a 730
320 a 520
250 a 500
Média
298
705
DP (U/L)
3,6
9,5
CV (%)
1,20
1,35
N
20
20Amostra 2
Amostra 1
Repetitividade - imprecisão intraensaio
Média
309
711
DP (U/L)
14,8
33,5
CV (%)
4,78
4,71
N
14
14Amostra 2
Amostra 1
Reprodutibilidade - imprecisão total
4. Recommendations of the German Society for Clinical Chemistry,
Z.Klin.Chem.Klin.Biochem, 1972;10:281-91.
5. Tonks DB Quality Control in Clinical Laboratories, Warner-Chilcott
Laboratories, Diagnostic Reagents Division, Scarborough, Canada,
1972.
6 Sociedad Española de Bioquímica Clínica y Patología Molecular,.
Base de Da tos de Var i ac ión B io lóg ica . D ispon íve l
em:<http://www.seqc.es/ar t ic le/ar t ic leview/330/1/170>
(acesso em 04/2006).
7 Basques JC. Especificações da Qualidade Analítica. Labtest.
Diagnóstica 2005.
8. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 1981;27:493-
501.
9 Meites S.: Pediatric Clinical Chemistry: Reference (Normal) Values, 3a..
edição, AACC Press: Washington, 1989:180.
10. Labtest: Dados de Arquivo.
O número de testes em aplicações automáticas depende dos
parâmetros de programação.
Estão disponíveis aplicações para sistemas automáticos.
Informações ao consumidor
[Termos e Condições de Garantia]
A Labtest Diagnóstica garante o desempenho deste produto dentro das
especificações até a data de expiração indicada nos rótulos desde que os
cuidados de utilização e armazenamento indicados nos rótulos e nestas
instruções sejam seguidos corretamente.
A desidrogenase láctica é também usada como um marcador de
hemólise intravascular.
Níveis aumentados são observados na maioria dos pacientes com infarto
do miocárdio. Embora o grau de elevação não seja tão grande como o da
CK, ela persiste por 10 a 14 dias.
A separação das isoenzimas é de grande valor para o diagnóstico do
infarto do miocárdio. Uma relação LDH /LDH maior que 1 é um dado1 2
seguro para o diagnóstico de infarto do miocárdio. Lembramos que na
anemia megaloblástica a relação LDH /LDH é também maior que 1.1 2
A maioria dos pacientes com infarto pulmonar apresenta níveis
aumentados de LDH geralmente dentro de 24 horas do início da dor. O
encontro de CK total e CK-MB nos valores de referência e níveis elevados
de LDH dentro de um a dois dias após um episódio de dor toráxica é uma
forte evidência de infarto pulmonar.
Observações
1. A limpeza e secagem adequadas do material utilizado são fatores
fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obtenção de resultados
corretos.
2. O laboratório clínico tem como objetivo fornecer resultados exatos e
precisos. A utilização de água de qualidade inadequada é uma causa
potencial de erros analíticos. A água utilizada no laboratório deve ter a
qualidade adequada a cada aplicação. Assim, para preparar reagentes,
usar nas medições e para uso no enxágue final da vidraria, deve ter
resistividade 1 megaohm.cm ou condutividade 1 microsiemens/cm e�
concentração de silicatos <0,1 mg/L. Quando a coluna deionizadora está
com sua capacidade saturada ocorre produção de água alcalina com
liberação de vários íons, silicatose substâncias com grande poder de
oxidação ou redução que deterioram os reagentes em poucos dias ou
mesmo horas, alterando os resultados de modo imprevisível. Assim, é
fundamental estabelecer um programa de controle da qualidade da água.
3. Como ocorre em toda reação enzimática a rigorosa observação do
tempo e da temperatura de incubação é de grande importância para a
qualidade dos resultados obtidos.
4. Para uma revisão das fontes fisiopatológicas e medicamentosas de
interferência nos resultados e na metodologia sugere-se consultar:
<www.fxol.org/>.
Referências
1. Bergmeyer HU. Methods of Enzimatic Analisys, 3 ed, vol 3, Deerfiled
Beach: Verlag Chemie, 1983:118-125.
2. Henry RJ, Canon DC, Winkelman JW. Clinical Chemistry, Principles
and Technics, 2nd ed. New York, Harper & Row,1974.
3. Inmetro - Boas Práticas de Laboratório Clínico e Listas de Verificação
para Avaliação, Qualitymark eds, Rio de Janeiro, 1997.
04 Português - Ref.: 86
Apresentação
Produto Referência Conteúdo
86-2/30
2 X 6 mL
2 X 24 mL1
2
LDH Liquiform
LDH Liquiform
Labmax 560/400
86-1/100
86-4/34
1 X 20 mL
4 X 7 mL
1 X 80 mL
4 X 27 mL
1
1
2
2
CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000
Lagoa Santa . Minas Gerais Brasil - www.labtest.com.br
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Revisão: Março, 2013
Ref.: 260117
Copyright by Labtest Diagnóstica S.A.
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