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MINISTÉRIO DA EDUCAÇÃO UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DA AMAZÔNIA- UFRA INSTITUTO SÓCIOAMBIENTAL E DOS RECURSOS HÍDRICOS - ISARH ________________________________________________________ Prof. Reginaldo Alves Festucci Buselli Universidade Federal Rural da Amazônia (UFRA) Instituto Sócioambiental e dos Recursos Hídricos (ISARH) Centro de Tecnologia Agropecuária (CTA) Avenida Presidente Tancredo Neves 2501 Bairro Montese. Belém - Pará – Brasil CEP: 66077-530 Fone: (091) 3210-5271 E-mail: rfestuccibuselli@hotmail.com 1 Disciplina Bioquímica de Plantas 17o Estudo dirigido - Biossíntese de proteínas 1) Como que a sequência de nucleotídeos presente no mRNA é traduzida em uma sequência de aminoácidos (proteína)? A molécula que fornece a informação genética a ser traduzida é o RNA mensageiro, este contém uma seqüência de nucleotídeos que é lida pelo RNA transportador que possui um serie de anticodons a leitura é feita de três em tres bases cada trica de bases representa um codon e esta relacionada a um aminoácido especifico. 2) Onde ocorre a tradução da sequência do mRNA em uma sequência de aminoácidos? Ocorre no citoplasma. 3) Explique a hipótese do adaptador proposta por Crick. Crick formulou uma ideia de que os ácidos nucléicos DNA E RNA não poderiam servir de molde para enfileirar os aminoácidos que constituem as proteínas necessitando de uma molécula chamada de RNA de transferência. 4) O que é o código genético? É uma linguagem universal expressa através da seqüências de bases contidas no DNA que posteriormente é traduzida em seqüências de aminoácidos que onde esta contida todas as nossa características hereditárias. 5) Diferencie e exemplifique código genético sobreposto e não sobreposto? Se o código é sobreposto então o ribossomos se movera ao longo do mRNA um nucleotídeo de cada vez reconhecendo um novo códon a cada movimento. Em contraparte um código não sobreposto cada nucleotídeo será parte de um e somente um códon. 6) Apresente dez nucleotídeos e mostre as fases três de leitura do código genético. 7) Quais são as propriedades do código genético? Explique detalhadamente cada uma. 1- Cada aminoácido é codificado por uma sequência de 3 bases. 2- A leitura do mRNA sempre começa com 5'AUG3', ou seja, com uma metionina. 3- O código genético é universal. - Um códon codifica o mesmo aminoácido em qualquer organismo. 4- O código genético é redundante ou degenerado. - Pode existir mais de um códon para codificar um mesmo aminoácido. 8) Por que os aminoácidos metionina e triptofano apresentam cada um somente um códon? São os aminoácidos menos comuns das proteínas em geral. 9) Por que os aminoácidos arginina, leucina e serina apresentam cada um seis códons? Pois há casos de degeneração no código genético, e arginina, leucina e serina podem ser especificados por seis códon diferentes. 10) Desenhe um mRNA (5’-3’) e um tRNA (3’-5’) e mostre como ocorre o pareamento códon- anticódon. 11) Quais são as características dos tRNAs? As moléculas conhecidas por RNA transportador compartilham as seguintes características: MINISTÉRIO DA EDUCAÇÃO UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DA AMAZÔNIA- UFRA INSTITUTO SÓCIOAMBIENTAL E DOS RECURSOS HÍDRICOS - ISARH ________________________________________________________ Prof. Reginaldo Alves Festucci Buselli Universidade Federal Rural da Amazônia (UFRA) Instituto Sócioambiental e dos Recursos Hídricos (ISARH) Centro de Tecnologia Agropecuária (CTA) Avenida Presidente Tancredo Neves 2501 Bairro Montese. Belém - Pará – Brasil CEP: 66077-530 Fone: (091) 3210-5271 E-mail: rfestuccibuselli@hotmail.com 2 São cadeias unitárias contendo entre 73 e 93 ribonucleotídeos; Contêm muitas bases incomuns, entre 7 e 15 por molécula; A ponta 5' dos tRNA é fosforilada; A seqüência de bases na ponta 3' de tRNAs maduros é CCA. O aminoácido ativado é ligado à hidroxila 3' da adenosina terminal; Cerca de metade dos nucleotídeos nos tRNAs forma pareamento de bases, originando uma dupla hélice. Cinco grupos de bases não estão pareados: a região CCA do terminal 3'; a alça TYC, que tem seu nome pela seqüência ribotimidina- pseudo-uridina-citosina; o "braço extra", que possui um número variável de nucleotídeos; a alça DHU, que contém várias diidrouracilas; e alça do anticódon; A alça do anticódon consiste em sete bases com a seguinte sequência: 5'- pirimidina-pirimidina-X-Y-Z-purina modificada-base variável-3'. 12) Quais são as fases envolvidas na síntese de proteínas? Comente detalhadamente sobre cada uma. A síntese proteica ocorre em duas etapas: Tradução e transcrição. Transcrição: Esta etapa ocorre no núcleo das células e consiste na síntese de uma molécula de RNA a partir da leitura da informação contida numa molécula de DNA. Este processo inicia-se pela ligação de um enzima à molécula de DNA, a RNA-polimerase. Esta enzima abre a dupla hélice destruindo as pontes de hidrogénio que ligam as bases complementares das duas cadeias. Em seguida, a RNA-polimerase inicia a síntese de uma molécula de RNAm de acordo com a complementaridade das bases azotadas. Se, por exemplo, na cadeia de DNA o nucleotídeo for de adenina, a RNA-polimerase liga ao RNAm o nucleotídeo uracila. Quando termina a leitura, a molécula de RNAm separa-se da cadeia do DNA. As duas cadeias complementares restabelecem as pontes de hidrogénio e a dupla hélice é reconstituída. Ao RNAm transcrito (pré-RNAm) são retiradas porções não correspondentes a aminoácidos (intrões), ficando a molécula mais curta e apenas constituída por sequências que codificam os aminoácidos (exões). A esta remoção de intrões do RNAm, chama-se de processamento. A molécula de RNAm formada migra para os ribossomos, saindo do núcleo através dos poros do invólucro nuclear. O RNAm que está pronto para migrar para o citoplasma possui uma cópia da sequência dos pares de bases do DNA. Cada tripleto do DNA (codogene) corresponde a uma sequência de três nucleotídeos na molécula de RNAm, o codão, que corresponde à informação necessária para codificar um aminoácido. Tradução: Esta etapa ocorre no citoplasma e consiste na leitura da mensagem do RNAm, da qual resulta a produção de uma sequência de aminoácidos que, em cadeia, constitui uma proteína. Esta etapa é constituída por três fases: a iniciação, o alongamento, e a finalização. Iniciação – A subunidade menor do ribossomo liga-se ao RNAm na região de AUG (codão de iniciação). O RNAt, que transporta o aminoácido metionina (met), liga-se ao codão de iniciação por complementaridade da sua sequência de três nucleotídeos - MINISTÉRIO DA EDUCAÇÃO UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DA AMAZÔNIA- UFRA INSTITUTO SÓCIOAMBIENTAL E DOS RECURSOS HÍDRICOS - ISARH ________________________________________________________ Prof. Reginaldo Alves Festucci Buselli Universidade Federal Rural da Amazônia (UFRA) Instituto Sócioambiental e dos Recursos Hídricos (ISARH) Centro de Tecnologia Agropecuária (CTA) Avenida Presidente Tancredo Neves 2501 Bairro Montese. Belém - Pará – Brasil CEP: 66077-530 Fone: (091) 3210-5271 E-mail: rfestuccibuselli@hotmail.com 3 anticodão. A subunidade maior liga-se à menor subunidade. O ribossomo está então funcional. Alongamento – O anticodão de um novo RNAt, que transporta um segundo aminoácido, liga-se ao segundo codão. Forma-se, assim, uma ligação peptídica entre esses dois aminoácidos. O ribossomo avança três bases e o processo repete-se ao longo do RNAm para a construção de uma proteína. Finalização – Quandoo ribossomo chega a um codão de finalização, termina a síntese. A proteína liberta-se e as subunidades ribossomais podem ser utilizadas para formar um novo complexo de iniciação com uma molécula de RNAm. 13) Por que é importante a ativação dos aminoácidos? Para facilitar a formação de uma ligação peptídica, fazendo assim com que o aminoácido se ligue ao tRNA e posteriormente o tRNA se ligue ao mRNA formado assim um polipeptídeo. 14) Faça um resumo explicando como ocorre a tradução da molécula de mRNA. A tradução inicia-se com a formação de um Complexo de iniciação. O tRNA transporta o primeiro aminoácido, a metionina, a subunidade menor do ribossoma se liga ao ponto de iniciação do mRNA, o codão de iniciação (AUG). O anticodão correspondente do tRNA é UAC que emparelha com o codão de iniciação cuja sequência é complementar. Após a formação do complexo de iniciação a subunidade maior do ribossoma liga-se a este complexo e começa a etapa de alongamento da cadeia peptídica. O ribossoma tem dois locais de reconhecimento do tRNA: o local A – à qual se liga o tRNA que transporta o aminoácido, e o local P – que transporta o tRNA já ligado à cadeia polipeptídica em crescimento e um terceiro local, o local E, correspondente ao local de saída do tRNA. Todo este mecanismo do mRNA, das duas subunidades do ribossoma e do tRNA com a metionina é auxiliado pela presença de proteínas – factores de iniciação – que utiliza a energia do GTP. A metionina transportada pelo tRNA ocupa o local P na fase de iniciação e o local A livre poderá receber o segundo tRNA com o segundo aminoácido. O processo para quando no local A, surge um dos codões de terminação ou codão stop (UAA, UAG e UGA). Nenhum destes codões tem um aminoácido correspondente nem se liga a um tRNA. O codão stop liga-se a uma proteína – fator de dissociação, que promove a ligação de uma molécula de água em vez de um aminoácido à cadeia polipeptídica, parando a síntese proteica. O último tRNA liberta-se do ribossoma, separando-se as duas subunidades (reutilizáveis) e a proteína recém - sintetizada é libertada, adquirindo a sua estrutura tridimensional. 15) Por que em procariotos ocorre o acoplamento da transcrição e da tradução? 16) Quais são os agentes químicos que inibem a síntese protéica? A síntese protéica é inibida pela ação de muitos antibióticos e toxinas. 17) O que é um polissomo? Qual é a vantagem conferida pelos polissomos durante a síntese protéica? MINISTÉRIO DA EDUCAÇÃO UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DA AMAZÔNIA- UFRA INSTITUTO SÓCIOAMBIENTAL E DOS RECURSOS HÍDRICOS - ISARH ________________________________________________________ Prof. Reginaldo Alves Festucci Buselli Universidade Federal Rural da Amazônia (UFRA) Instituto Sócioambiental e dos Recursos Hídricos (ISARH) Centro de Tecnologia Agropecuária (CTA) Avenida Presidente Tancredo Neves 2501 Bairro Montese. Belém - Pará – Brasil CEP: 66077-530 Fone: (091) 3210-5271 E-mail: rfestuccibuselli@hotmail.com 4 Polissomo ou polirribossomo são agrupamentos de ribossomos ligados a uma molécula de RNAm, sintetizando várias moléculas da proteína correspondente a aquele RNAm, ao mesmo tempo. 18) Compare a tradução em procariotos e em eucariotos e comente sobre as semelhanças e diferenças.