resumo - citoquimica

Prévia do material em texto

CITOQUÍMICA
dedica-se ao estudo de métodos de coloração dos tecidos e constituintes celulares. 
Utilizada tanto para pesquisa científica como para finalidade de diagnóstico patológico.
deve-se atentar ao procedimento da preparaçao de corte histologico para que não se percam os elementos a serem estudados.
cada reação é específica para um composto celular que está sendo analisado.
a especificidade do teste é definida pela utilização de preparaçoes-controle
classificaçao:
in situm: procurar o que se está pesquisando dentro da celula
extra situm: rompe a barreira da celula, deixando extravasar seu conteudo e permitindo estudar seus componentes fora da celula
REAÇÕES CITOQUÍMICAS MEDIADAS POR LIGAÇÕES ELETROSTÁTICAS
por afinidade eletrostática um corante ionizado em uma solução reage com um substrato de carga iônica oposta. 
acidofilia: 
substrato carregado positivamente (substrato catiônico) reage eletrostaticamente com um corante carregado negativamente (aniônico). 
EXs: Xylidine, Sirius Red e eosina. 
Esses corantes reagem com os elementos como as proteínas, que podem apresentar radicais básicos de seus aminoácidos ionizados (NH3+). Logicamente, esses grupamentos se ionizam na dependência de pH diferenciados, que são obtidos a partir de soluções tampão em que os corantes são diluídos. 
basofilia:
substrato carregado negativamente, (substrato aniônico) reage eletrostaticamente com um corante carregado positivamente (catiônico).
EX: tiazínicos azul de toluidina, azul de metileno e azul de alcian.
 A hematoxilina, embora não seja um corante, pode ser considerada um complexo de corantes que comportam-se como corante catiônico. 
Esses corantes reagem com os grupamentos aniônicos. Entre eles, os grupamentos fosfato (PO42-) dos ácidos nucleicos, os grupamentos sulfato (SO42- e SO3-) dos glicosaminoglicanos ácidos sulfatados da matriz extracelular e os grupamentos carboxila (CO2-) das proteínas e glicosaminoglicanos ácidos carboxilados.
a especificidade dessas reações depende do pH da solução em que o corante foi diluído. 
Alguns corantes por causa da natureza planar de suas moléculas, promovem um fenômeno conhecido por metacromasia (modificação no espectro de absorção).
LIGAÇÕES COVALENTES
Muitas são as reações citoquímicas mediadas por ligações covalentes, principalmente aquelas que necessitam ser facilitadas por uma molécula de componente metálico.
Reações obtidas a partir do reagente chamado reativo de Schiff que, quando em presença de aldeídos livres ou combinados nos tecidos, promove a coloração magenta.
reação de Feulgen (para DNA): 
pré-tratamento - hidrólise ácida pelo HCl (que remove da molécula de DNA as bases púricas e apresenta grupamentos aldeídicos.
material submetido ao reativo de Schiff
a especificidade desta reação e controlada pelo uso da enzima DNAse
Utiliza-se o citofotometro para que indique a quantidade de DNA presente
teste do ácido periódico-Schiff (PAS) (para polissacarídeos neutros):
polissacarídeos neutros: glicogênio, amido e celulose, glicoproteínas neutras.
Pré-tratamento - oxidaçao pelo ácido periódico (HIO4) das ligações carbono-carbono, produzindo aldeídos. 
material será submetido ao reativo de Schiff 
a especificidade desta reação e controlada pelo uso da enzima α-amilase
Utiliza-se o citofotometro para que indique a quantidade de glicogenio presente
Azul de Alcian (para gricoproteinas acidas)
possui radicais carboxila ou sulfato
Não utilizar fixadores que deixem resíduos de aldeídos nos tecidos. Caso seja utilizado, deve-se tratar o material com uma solução de boroidreto de sódio, antes da hidrólise ácida, na reação de Feulgen, ou da oxidação com ácido periódico, no teste do PAS. Esse reagente bloqueia os aldeídos livres nos tecidos. 
INTERAÇÕES HIDROFÓBICAS
reações específicas para lipídios não polares, como os triglicerídios e derivados do colesterol.
Lipídios não polares são altamente hidrofóbicos; portanto, as reações devem ser livres de água, logo, os corantes devem ser diluídos em soluções a base de álcool ou acetona.
Preparados histológicos tradicionais de inclusão em parafina removem a maior parte dos lipídios, portanto, faz-se necessária a utilização de cortes por congelamento ou inclusões em resinas que não necessitem de banhos em solventes orgânicos, como o xilol e o benzeno.
Entre os corantes específicos para lipídios, podem ser citados:
Sudan Black B - gorduras e fosfolipideos
Sulfato azul de Nilo - lipideos acidos e gorduras neutras
Digtonina-pan - colesterol livre
tetroxido de osmio - lipidios insaturados
pas modificado - reação plasmal para fosfolipideos
IMUNOCITOQUÍMICA
utiliza a especificidade dos anticorpos na localização de moléculas ou de regiões de moléculas nas células ou tecidos. A visualização dos anticorpos depende do acoplamento deles com marcadores detectáveis.
FRACIONAMENTO CELULAR
conjunto de procedimentos que levam à separação das organelas celulares.
Procedimento: homogeinizaçao - centrifugaçao (diferentes velocidades - diferentes precipitados)