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IMUNOFLUORESCÊNCIA
Centro Universitário Uninovafapi
Bacharelado em Enfermagem
Disciplina: Imunologia
Acadêmicos: Amanda Rodrigues; Jordânia Matos; Luanderson Oliveira ; Maria Hilde Rodrigues; Maria Luiza Lira; 
Virna Soares. 
Prof. Dr. Evaldo Hipólito de Oliveira
Características básicas
• A imunofluorescência permite a detecção e localização de antígenos em
células e tecidos utilizando anticorpos específicos, marcados com
fluorocromos, de modo que a localização dos antígenos se torna visível
ao microscópio de fluorescência.
• De acordo com o mesmo princípio, podemos detectar e localizar
anticorpos em fluidos biológicos usando seu antígeno correspondente.
Características básicas
• Baseia-se na capacidade das moléculas de anticorpo se ligarem 
covalentemente a fluorocromos sem perder sua reatividade específica com o 
antígeno.
• Teste qualitativo/semi-quantitativo. 
• Método de alta sensibilidade e alta especificidade.
Características básicas
o FLUOROCROMOS:
• Nos testes de imunofluorescência são empregados conjugados constituídos
de anticorpos ligados covalentemente a moléculas reveladoras denominadas
fluorocromos.
• 1941: primeira vez que anticorpos foram conjugados com fluorocromos.
• Fluorocromos são substâncias que absorvem luz ultravioleta e emitem luz
visível, ou seja, ficam fluorescentes.
Características básicas
o FLUOROCROMOS:
•São utilizados vários fluorocromos diferentes nos laboratórios
clínicos para imunofluorescência.
•Isotionato de fluoresceína e compostos da rodamina são os
fluorocromos mais usados para conjugação com anticorpos para
torná-los fluorescentes sob condições adequadas de iluminação.
Características básicas
o MICROSCÓPIO DE EPIFLUORESCÊNCIA:
• A reação imunofluorescente que é desencadeada no
microscópio de epifluorescência ocorre através da emissãode
luz de cor quando o fóton é excitado por luz de curto
comprimento de onda (UV).
• Para deixar passar somente a emissão secundária desejada,
devem-se utilizar filtros apropriados dependendo da cor do
fluorocromo.
Características básicas
o TIPOS DE REAÇÃO:
Imunoflorescência Direta (IFD)
O anticorpo específico marcado 
com Fluorocromo (conjugado) é 
adicionado e se fixa ao antígeno, 
formando um imunocomplexo
estável. 
O anticorpo não ligado é 
removido por lavagens. 
O preparado é observado em 
microscópio de fluorescência.
Legenda: 
Imunoflorescência Direta (IFD)
o VANTAGENS
• Alta especificidade e sensibilidade
• Possibilidade de detecção de proteínas intracelulares e de sua
localização.
o DESVANTAGENS
• Alto custo do microscópio de fluorescência
• Necessidade de um conjugado para cada antígeno que se deseja
identificar ou localizar
• Subjetividade da leitura
Imunoflorescência Direta (IFD)
o APLICAÇÕES
• Detecção direta de microrganismos em secreções, na urina, nas
fezes, em cortes de tecidos etc. Também é utilizada na fenotipagem de
células tumorais.
• Em bacteriologia, um dos poucos métodos de IFD ainda usados em
laboratória clínico é a identificação do Streptococcus do grupo A.
Imunofluorescência Indireta (IFI)
PARA A PESQUISA DE ANTÍGENOS
• Incuba-se a célula ou tecido em que se quer pesquisar o 
antígeno com o anticorpo específico obtido em animal ou 
um monoclonal, levando à formação de um 
imunocomplexo.
• Realiza-se lavagem para retirada do anticorpo não ligante 
excedente. 
• A preparação é incubada com um conjugado 
antiimunoglobulina, marcado com fluorocromo, produzido 
em outra espécie de animal. 
• O preparado é observado em microscópio de 
fluorescência.
Legenda: 
Imunofluorescência Indireta (IFI)
PARA A PESQUISA DE ANTICORPOS
• Antígenos padronizados são fixados a lâminas de vidro.
• O soro do paciente é diluído, colocado sobre o antígeno e 
incubado para permitir a formação do complexo antígeno-
anticorpo. 
• Realizam-se lavagens para a retirada dos anticorpos não 
ligados.
• A preparação é incubada com o conjugado fluorescente e, 
se houver anticorpo no soro, o conjugado reage com o 
anticorpo específico para o antígeno. 
• Observa-se o preparado em microscópio de fluorescência. 
Legenda: 
Imunofluorescência Indireta (IFI)
o VANTAGENS
• Sensibilidade
• Especificidade
• Reprodutibilidade
• De simples padronização e execução
• O mesmo conjugado pode ser usado em sistemas diferentes
• Para determinar as classes e subclasses de anticorpos são utilizados
conjugados específicos
o DESVANTAGENS
• Necessidade de microscópio de fluorescência
• Subjetividade na leitura
• Não-automação. 
Imunofluorescência Indireta (IFI)
o APLICAÇÃO
• Diagnóstico sorológico de várias doenças infecciosas
como a Doença de Chagas, a SIDA/AIDS, as hepatites e
complexos em doenças auto-imunes.
Considerações Finais
As técnicas de imunofluorescência ainda são 
empregadas na rotina laboratorial, mas estão sendo 
gradativamente substituídas por testes 
imunoenzimáticos, principalmente devido à 
necessidade de microscopia, subjetividade de leitura 
e impossibilidade de automação.
Referências 
SILVA; Areta. Imunofluorescência: universidade federal da Bahia- instituto de 
ciências da saúde – ICS, 2010. Disponível 
em:<https://www.slideshare.net/labimuno/i-m-u-n-o-f-l-u-o-r-e-s-c-e-n-c-i-
a?next_slideshow=1>. Acesso em: 24 abr.2018