Anticorpos monoclonais - 2014-2

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ANTICORPOS MONOCLONAIS
ANTICORPOSANTICORPOS MONOCLONAISMONOCLONAIS MURINOSMURINOS–– ANTICORPOSANTICORPOS MONOCLONAISMONOCLONAIS MURINOSMURINOS -
Quimicamente homogêneos, derivados de um único clone
de linfócito, responsável por sua produção, possuindo
todos, a mesma especificidade para o mesmo, m m p f p m m
determinante antigênico. Reativos a apenas um
determinado antígeno. Ex.: Moac x CEA, PSA, CA-125...
–– ANTICORPOSANTICORPOS MONOCLONAISMONOCLONAIS HUMANOSHUMANOS –– EBVEBV
– Fixação do vírus ao seu receptor, penetração no núcleo da
célula humanas, integração ao genoma e indução da
f ã él l f d E M Dtransformação na célula infectada. Ex.: AcMO.anti-D,
anti-JSa
ANTICORPOS  MONOCLONAISANTICORPOS  MONOCLONAIS
Hi ó iHi ó i–– HistóricoHistórico
–– Teoria de Seleção Clonal (Burnet, 1957);Teoria de Seleção Clonal (Burnet, 1957);Teoria de Seleção Clonal (Burnet, 1957);Teoria de Seleção Clonal (Burnet, 1957);
–– Prova da Teoria de Seleção Clonal (Nossal, 1958);Prova da Teoria de Seleção Clonal (Nossal, 1958);
–– Desenvolvimento da Tecnologia de Fusão (Okada, 1962 and Littlefild,1964);Desenvolvimento da Tecnologia de Fusão (Okada, 1962 and Littlefild,1964);
Indução Artificial de Plasmocitomas (Potter and Boyce 1962);Indução Artificial de Plasmocitomas (Potter and Boyce 1962);–– Indução Artificial de Plasmocitomas (Potter and Boyce, 1962);Indução Artificial de Plasmocitomas (Potter and Boyce, 1962);
–– Adaptação de Plasmocitomas in vitro (Horibata/Harris, 1970);Adaptação de Plasmocitomas in vitro (Horibata/Harris, 1970);
–– Produção de Hibridomas com Produção de Hibridomas com ´´Vírus/Celulas Tumorais (Sinkovics, 1970);Vírus/Celulas Tumorais (Sinkovics, 1970);
–– Fusão de Células de Mieloma: Ac (Cotton and Milstein, 1973);Fusão de Células de Mieloma: Ac (Cotton and Milstein, 1973);
–– Construção de Hibridomas definidos (Kohler/Milstein, 1975);Construção de Hibridomas definidos (Kohler/Milstein, 1975);
–– Uso do PEG como Agente Fusionante (Potercorvo, 1976);Uso do PEG como Agente Fusionante (Potercorvo, 1976);
–– Uso do Vírus EpsteinUso do Vírus Epstein‐‐Barr (infecção invitro de células mononucleadas pelo Barr (infecção invitro de células mononucleadas pelo 
vírus: obtenção de linhagem linfoblastóide B (Henle/Pop, 1957 e 1969  e   vírus: obtenção de linhagem linfoblastóide B (Henle/Pop, 1957 e 1969  e   
Steinits e col, 1977;Steinits e col, 1977;
–– Produção dos primeiros  MoAcs  à partir de linhagens humanas (1980, 1981, Produção dos primeiros  MoAcs  à partir de linhagens humanas (1980, 1981, 
19881988‐‐ Greg Winter  e col..)Greg Winter  e col..)
–– Anticorpos  monoclonais produzidos em plantas (1990Anticorpos  monoclonais produzidos em plantas (1990‐‐‐‐‐‐))
A ti l iA ti l i 19751975Anticorpos monoclonais Anticorpos monoclonais --19751975
Prêmio Nobel Prêmio Nobel -- 19841984
AnticorposAnticorpos
Policlonal  Monoclonal 
Acs que  coletados de soros de animais 
imunizados
LB Individuais são hibridizados,
clonados e hibridizados e cultivados.
l
Reconhece múltiplos sitios de
Acs são secretados e coletados do
meio de cultura.
Reconhece só um únicoReconhece múltiplos sitios de 
ligação do material injetado. determinante antigênico
do Ag injetado
AntisorosAntisoros ConvencionaisConvencionais Anticorpos MonoclonaisAnticorpos Monoclonais
DETERMINANTE DETERMINANTE  Vários:  Vários:   Único:Único:
AcsAcs DerivadosDerivados de de diferentesdiferentes
linhagenslinhagens celularescelulares de de linfócitoslinfócitos BB
AcsAcs DerivadoDerivado de um de um únicoúnico clone de clone de 
célulascélulas BB
AFINIDADEAFINIDADE varia com a sangriavaria com a sangria pode ser selecionadapode ser selecionadaAFINIDADEAFINIDADE varia com a sangriavaria com a sangria pode ser selecionadapode ser selecionada
ESPECIFICIDADE ESPECIFICIDADE  ‐‐ varia com o animalvaria com o animal‐‐ parcialmente cruzadas parcialmente cruzadas 
‐‐ reações  com  det. reações  com  det. antigenicosantigenicos comunscomuns
‐‐ raramente muitoraramente muito especificosespecificos
‐‐ padronizadapadronizada
‐‐ específicosespecíficos QtQt necessáriosnecessáriosraramente muito raramente muito especificosespecificos
RENDIMENTO RENDIMENTO  1mg / ml 1mg / ml  ‐‐ 100100l  /ml em cultural  /ml em cultura
‐‐ 20mg / ml em l. 20mg / ml em l. ascíticoascítico
nenhuma em culturanenhuma em culturaCONTAMINAÇÃOCONTAMINAÇÃO 100% de  100% de  IgsIgs ‐‐ nenhuma em cultura nenhuma em cultura 
‐‐ 10% em 10% em liqliq. . ascíticoascítico
PUREZA PUREZA  DO DO AgAg agag puro ou puro ou  absorção do absorção do agag DesejavelDesejavel, mas não essencial , mas não essencial 
VARIAÇÃOVARIAÇÃO
VariaçãoVariação entre entre loteslotes afetaafeta a a 
reatividadereatividade e o e o títulotítulo dos dos AcsAcs
FreqüentementeFreqüentemente Reproduzível,Reproduzível,
PrevisívelPrevisível && PotencialmentePotencialmente
inexaurívelinexaurível fontefonte dede AcsAcs comcom
altíssimaaltíssima especificidadeespecificidade
APLICAÇÃOAPLICAÇÃO NãoNão é a é a ferramentaferramenta maismais poderosapoderosa
parapara usouso nana terapiaterapia e e diagnósticodiagnóstico
CapazCapaz de de gerargerar//desenvolverdesenvolver novas novas 
terapiasterapias e e imunoensaiosimunoensaios segurosseguros
clínicoclínico‐‐laboratorial das laboratorial das doençasdoenças
CUSTO APROX.CUSTO APROX. U$300,00U$300,00 U$10.000,00U$10.000,00
MoAbs de Camundongo x CoelhoMoAbs de Camundongo x Coelho
Camundongo Coelho
ReconhecimentoReconhecimento - RI Limitada
Pequenas moléculas/peptídeos
-Grande chance de 
sucesso usando tanto- Pequenas moléculas/peptídeos 
freqüentemente pouco 
imunogênicos
Resposta a Ágs de roedores muito
sucesso usando tanto 
pequenas moléculas 
como peptídeos
Reconhece vários- Resposta a Ágs de roedores muito 
limitada
- Reconhecimento limitado do No 
de epitopos
- Reconhece vários 
epitopos de Ags
protéicos.
de epitopos
AfinidadesAfinidades Nanomolar ( ~10-9 KD M) Picomolar ( ~10-12 KD M) 
EspecificidadeEspecificidade Média‐Alta Alta
AplicaçõesAplicações Westms, ELISA, Citometria de 
Fluxo, IP, IHC e ICC
Westms, ELISA, 
Citometria de Fluxo, IP, , , , ,
IHC e ICC (excelentes 
resultados)
989989 dd
NanocorposNanocorpos
••1989 1989 ‐‐ Raymond Raymond HamersHamers
••Descoberto em Camelos e Descoberto em Camelos e llamasllamas
••Par de cadeias  pesadas e ausência de cadeia leve!Par de cadeias  pesadas e ausência de cadeia leve!
••Mesma afinidade como se tivesse quatro cadeiasMesma afinidade como se tivesse quatro cadeias
••Estrutura  mais  resistente ao calor e pHEstrutura  mais  resistente ao calor e pH
••Desenvolvimento de Desenvolvimento de nanocorposnanocorpos oraisoraisesenvolvimento deesenvolvimento de nanocorposnanocorpos oraisorais
NanocorposNanocorpospp
Evolução dos MoAc
Geração de Geração de MoAcMoAc x TNFx TNF
1. TRANSGENIC
DNA SPLICING / GENE KNOCK 
OUT
2 LIBRARIES2. LIBRARIES
a.BACTERIOPHAGE
b. mRNA
c. Cell Surface
AnaliseAnalise de Mercado & Cde Mercado & Conjunturaonjuntura AtualAtualAnaliseAnalise de Mercado & Cde Mercado & Conjunturaonjuntura AtualAtual
• Variação na Progessão dos Mercado ;• Variação na Progessão dos  Mercado ;
• Consenso: Mercado deverá atingir mais US$ 26 bilhões no o se so e ado de e á a g a s US$ 6 b ões o
final da década ( previsão conservadora considerando uma
média de crescimento anual de 18%; 
• Mercado  Biotecnológico.; MoAc deverá corresponder a cerca
de 32%;
• Mais de  160  novos MoAcs na última década;
• Mercado de marcadores de diagnóstico in vitro:  MoAc
contribuiu em 2010 com  mais de US$34 bilhões.
QualQual o o interesseinteresse $   $   nosnos MoAcsMoAcs??QQ $$
• MoAcs geram deselvolvimento de industrias de biotecnologia
e muitos bilhões de dólares de investimento;e muitos bilhões de dólares de investimento;
• Companhiasfarmacêuticas: otimização do setor de MoAcs ,p ç ,
atraidas pelo rápido e pequeno custo, altos indices de sucesso e
tarifação de preços diferenciada. Representa uma arma em
potencial frente a redução de lucratividade pelas largapotencial frente a redução de lucratividade pelas larga
comercialização dos genéricos;
• Perspectivas saudáveis para a terapêutica. O sucesso contínuo
dos produtos existentes, combinado com um ”pipeline” de
d d d ã ã dnovos produtos aguardando aprovação e a erosão dos
genéricos limitada, apontam para um crescimento robusto do
segmento.g
MoAcs - Produção
Como é feita a produção dos MoAcs?
• Imunização
• Teste do soroTeste do soro
• Fusão
• Triagem para Cél Fusionadas• Triagem para Cél.  Fusionadas
• Cresicimento dos Hibridomas
• Coleta dos Acs• Coleta dos Acs
• Concentração e purificação do 
produto.produto.
ANTICORPOS MONOCLONAIS
Obtenção de anticorpos monoclonais
– ESCOLHA DO ANIMAL - camundongo fêmea de aproximadamente 8 semanas de idade
– IMUNIZAÇÃO - via subcutânea, intravenosa ou intraglanglionar
– PROTOCOLO DE IMUNIZAÇÃO – PROTOCOLO DE IMUNIZAÇÃO 
1º dia: antígeno + adjuvante - IP
2º dia: antígeno + adjuvante - IP
21º dia: antígeno - IV
24º dia: fusão 24 dia: fusão 
– CÉLULAS COMPONENTES DA FUSÃO - linfócitos, mielomas
– MEIOS PARA A FUSÃO - RPMI ou DMEM, soro fetal bovino, OPI-HAT (seleção de 
hibridomas), OPI-HT(manutenção de hibridos), OPI (manutenção de hibridos)
– FUSÃO - células de mieloma linfócitos (células do baço ou glânglios) agente indutor da – FUSÃO - células de mieloma, linfócitos (células do baço ou glânglios), agente indutor da 
fusão (PEG), meio HAT.
– SELEÇÃO DOS CLONES - métodos: ELISA, RIE, IFI, W.BLOT ou aglutinação.
– CLONAGEM e RECLONAGEM - diluição limite.
– CONGELAMENTOCONGELAMENTO
– SELEÇÃO DO CLONE DESEJADO - testes de especificidade, título, avidez e reatividade.
– CONGELAMENTO
– PRODUÇÃO - à partir do sobrenadante de cultura e, à partir de Ascite.
– COMPARAÇÃO DE ANTICORPOS MONOCLONAIS e ANTISOROS CONVENCIONAIS– COMPARAÇÃO DE ANTICORPOS MONOCLONAIS e ANTISOROS CONVENCIONAIS
ETAPAS PARA PRODUÇÃO DE ETAPAS PARA PRODUÇÃO DE 
Ac.MONOCLONAISAc.MONOCLONAIS
) E H D N ND NG FE E DE a)-ESCOLHA DOS ANIMAIS:CAMUNDONGOS FEMEAS DE 
APROX.8 SEMANAS DE IDADE
• -IMUNIZAÇÃO | SUBCUTÂNEA
| INTRAVENOSA| INTRAVENOSA
| INTRAGANGLIONAR
• b)-PROTOCOLO DE IMUNIZAÇÃO:b)-PROTOCOLO DE IMUNIZAÇÃO:
• 1º DIA  Ag + ADJUVANTE( 1ª IMUNIZAÇÃO) - IP
• 14º DIA  Ag + ADJUVANTE( 2ª IMUNIZAÇÃO) - IP
• 21º DIA  Ag VIA ENDOVENOSA21 DIA  Ag VIA ENDOVENOSA
• 24º DIA  FUSÃO
• c)-ESCOLHA E PREPARAÇÃO DAS CELULAS MUTANTES PARA 
A FUSÃO.
• - NAO EXPRESSAR CADEIAS LEVES OU PESADAS
• - HGPRT E TK NEGATIVAS
• - CRESCIMENTO EM RPMI OU D-MEM
LINHAGENS DE CELULAS LINHAGENS DE CELULAS LINHAGENS DE CELULAS LINHAGENS DE CELULAS 
USADAS PARA FUSÃOUSADAS PARA FUSÃO
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
LINHAGEM CELULAR                   EXPRESSAO DE LINHAGEM CELULAR                   EXPRESSAO DE IgIg DERIVAÇÃODERIVAÇÃO
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
P3P3‐‐X63/Ag8 GAMA,KAPA MOPCX63/Ag8 GAMA,KAPA MOPC‐‐21(*)21(*)P3P3 X63/Ag8                                     GAMA,KAPA                                 MOPCX63/Ag8                                     GAMA,KAPA                                 MOPC 21( )21( )
NS1/1.NS1/1.AgAg 4.1                                   KAPA (NÃO SECRETOR)            MOPC4.1                                   KAPA (NÃO SECRETOR)            MOPC‐‐21(*)21(*)
X63/X63/AgAg 8.653                                  NENHUMA                                   X638.653                                  NENHUMA                                   X63‐‐AgAg 8(*)8(*)
Sp2/0                                                NENHUMA                           HIBRIDOMA Sp2(*)Sp2/0                                                NENHUMA                           HIBRIDOMA Sp2(*)p / p ( )p / p ( )
NSO/U                                              NENHUMA                                   HSI/1.NSO/U                                              NENHUMA                                   HSI/1.AgAg 4.1(*)4.1(*)
FO                                                     NENHUMA                                    CLONE Sp2/0(*)FO                                                     NENHUMA                                    CLONE Sp2/0(*)
MPC11MPC11‐‐X45X45‐‐6TG1.7                      GAMA 2b,KAPA                             BALB/C(*)6TG1.7                      GAMA 2b,KAPA                             BALB/C(*)
S194/5XX0 BUL                              NENHUMA                                    BALB/C(*)S194/5XX0 BUL                              NENHUMA                                    BALB/C(*)
WIWI‐‐L2L2‐‐729729‐‐HF2                               NENHUMA                                    HUMANAHF2                               NENHUMA                                    HUMANA
• e)-FONTE DOS LINFÓCITOS SENSIBILIZADOS PARA FUSÃO
• f)-MEIOS UTILIZADOS: 
• D-MEM OU RPMI 10%FCS..............CEL.DE MIELOMA 
• OPI-HAT...............SELEÇÃO DE HIBRIDOMASOPI HAT...............SELEÇÃO DE HIBRIDOMAS
• OPI-HT..................MANUTENÇÃO DOS HIBRIDOMAS
• OPI........................MANUTENÇÃO DOS HIBRIDOMAS
) FUSÃO DE CEL DO MIELOMA X LINFOCITOS SENSIBILIZADOS• g)-FUSÃO DE CEL. DO MIELOMA X LINFOCITOS SENSIBILIZADOS 
• -AGENTE PROMOTOR DE FUSÃO: PEG (1500-4000)
• -PROCESSO RÁPIDOPROCESSO RÁPIDO
• h)-SELEÇÃO DOS CLONES:MORTE DAS CELULAS NÃO HIBRIDIZADAS
• - ANALISE DA PRODUÇÃO DE Ac.ESPECIFICOS : ELISA, RIE, IFI, W.BLOT . 
•
• i)-CLONAGEM E RECLONAGEM: DILUIÇÃO LIMITE
• j)-SELEÇÃO DOS CLONES PRODUTORES DO Ac. DESEJADO: ELISA, RIE, IFI, W.BLOT.j) SELEÇÃO DOS CLONES PRODUTORES DO Ac. DESEJADO: ELISA, RIE, IFI, W.BLOT.
• i)-CLONAGEM E RECLONAGEM: DILUIÇÃO LIMITE
j) SELEÇÃO DOS CLONES PRODUTORES DO A DESEJADO ELISA RIE IFI W BLOT• j)-SELEÇÃO DOS CLONES PRODUTORES DO Ac. DESEJADO: ELISA, RIE, IFI, W.BLOT.
Adapted from Milstein (1980) Scientific American, Oct. p.58
1
Antigen 1 23 4
1
2
3
4
m
m
m
m
Spleen cells
Immunization
BA LB /c
1
+
Myeloma
Immunization
B cell
2 3
4
Cell fusion1 2 3 4
1 2 3 4x
1 2
Monoclonal
1 23 4
Pure single Ab
Monoclonal
antibodies
Antiseum g
After immunization, the mouse spleen contains B cells producing specific antibodies.Each B cell produces only one kind of antibody, which binds to its specific antigen. Conventional antiserum is the mixture of all antibodies produced by B cells from spleen.
If a single B cell was picked up and cultured, then it will produce only one kind of antibody. 
But B cell can not survive well in the culture.Myeloma cell can be cultured in the test tube, but can not produce useful antibody.Each hybridoma line can produce pure single antibody, called monoclonal antibody.If B cell is fused with myeloma, the fused cell might be cultured and produce antibody.
A mixture of all Ab
Diluição Limitanteç
U l•Um clone por poço
•Certeza de que um tipo de clone estáq p
proliferando em um poço
T t d d t ã•Teste de detecção
•Diluição limitanteç
•Teste de detecção
•Expansão – produção dos AcMo
DuasDuas diferentesdiferentes viasvias parapara síntesesíntese de de nucleotídiosnucleotídios
emem célulascélulas dede mamíferosmamíferosemem célulascélulas de de mamíferosmamíferos
(Folic acid analog)
Células de Mieloma usados
na tecnologia dos
hibridomas são mutantes
duplos: HGPRTase(‐) e
capacidade para produçãocapacidade para produçãode Igs(‐)
Procedimentos Procedimentos 
para produção para produção 
de Anticorpos de Anticorpos pp
Monoclonais em Monoclonais em 
CamundongosCamundongosgg
Acs gerados por Engenharia Genética
AcsAcs contra Carcinoma contra Carcinoma HepatocelularHepatocelular
Acs gerados por Engenharia 
GenéticaGenética
Geração de MoAcs  
quiméricos Camundongo‐q g
Humano
MoAcsMoAcs humanoshumanos
TecnologiaTecnologia do do phagophago x x TecnologiaTecnologia transgênicatransgênicagg p gp g gg gg
Uso Clínico dos Anticorpos monoclonais
• Diagnóstico
– Detecção de peptídios e outras moléculas em várias 
doenças
• Endócrinas: hiperinsulinemia, diabetes, hiperparatireoidismo
• Antígenos tumorais (p53 tumor suppressor PSA a fetoproteina)• Antígenos tumorais (p53 tumor suppressor, PSA, a-fetoproteina)
• Anticorpos contra proteínas virais (AIDS, hepatites)
• Imunocintilografia
• Terapêutico
Anticorpos Neutralizantes– Anticorpos Neutralizantes
• Anti-ErbB2 fpara cancer de mama e ovário
• Anti-CD20 for Linfoma de células B não Hodgkin's g
• Antisoros e antídotos (virus e venenos)
• Descoberta de Drogas
– Identificação de alvos terapêuticos(phage display)
A li õ T ê iAplicações Terapêuticas
i li• Anticoros Neutralizantes
– Antídotos e antivenina (cobra & escorpião)
– Antígenos tumorais ErbB‐2, melanoma and leucemia de cél. T, 
anticorpos ligados a toxínas
Anticorpos autoimunes citocinas TNF a– Anticorpos autoimunes, citocinas TNF‐a
– Antisoros contra vírus, batéria e toxinas (vacina)
– Anti IgE e IgM para alegias (experimental)Anti IgE e IgM para alegias (experimental)
– Quantificação de peptídios no sangue (hormônios metabólitos)
• Anticorpos ativadores• Anticorpos ativadores
– Ativadores do Complemento nas hemorrágias descontroladas 
(hemophilia)
FDA APPROVED MONOCLONAL ANTIBODIES
M1986Organ Transplant RejectionOrthoclone-OKT®Ortho Biotech
Antibody 
Type (2)
Date of 
FDA 
ApprovalIndicationsName of Product(1)Company Name
C1997Non-Hodgkin’s LymphomaRituxan®BiogenIdec/Genentech/Roche
M2002Non-Hodgkin’s LymphomaZevalin™BiogenIdec
C1994Acute Cardiac ConditionsReoPro®J&J/Eli Lilly 
g p j
H
H
1998
2004
Breast Cancer
Colorectal Cancer
Herceptin®
Avastin ®
Genentech/Roche
H1998Viral Respiratory DiseaseSynagis®MedImmune/Abbott
H1997Acute Transplant RejectionZenapax®PDLI
H2000Acute Myleoid LeukemiaMylotarg™Wyeth
C1998Acute Transplant RejectionSimulect®Novartis
C1998Crohn’s, Rheumatoid ArthritisRemicade®J & J
H2004Colorectal CancerAvastin ®
H2003Asthma Xolair®Novartis/Genentech/Tanox
PD2002Rheumatoid ArthritisHumira™Abbott/CAT
H2001Chronic Lymphocytic 
Leukemia
Campath®Schering /ILEX Oncology
yy gy
H2003PsoriasisRaptiva™Genentech/Xoma
M2003Non-Hodgkin’s Lymphoma Bexxar®Corixa/GlaxoSmithKline
C2004Colorectal CancerErbitux ™BMS/ImClone Systems
Geração de MoAcs por camundongos 
transgênicostransgênicos
The Plantibody Approachy pp
- form Plant Molecular Biology (2000), 43, 419–428
Jardins do futuroJardins do futuro
Problemas com MoAcs
•• UsoUso terapêuticoterapêutico dede MoAcsMoAcs dede roedoresroedores éé limitadolimitado pelapela suasua
baixabaixa imunogenicidadeimunogenicidade,, curtacurta meiameia vidavida nana circulaçãocirculação ee suasua
incapacidadeincapacidade dede ativarativar mecanismosmecanismos imunoefetoresimunoefetores emem
humanoshumanos;;
•• IstoIsto aconteceacontece pelapela grandegrande diferençadiferença entreentre roedoresroedores ee
humanoshumanos ;;
•• ReaçõesReações alérgicasalérgicas severasseveras emem humanoshumanos ,, emem respostaresposta aosaos
dd dd d dd d ((MoAcsMoAcs dede roedoresroedores introduzidosintroduzidos nosnos pacientespacientes ((acsacs
antiidiotipicosantiidiotipicos;;
iõiõ dd ii ãã ãã f if i•• RegiõesRegiões constantesconstantes dosdos MoAcsMoAcs murinosmurinos nãonão sãosão efetivasefetivas nana
interaçãointeração comcommoléculasmoléculas imunoefetorasimunoefetoras humanashumanas;;
LBLB hh ãã dd difí ildifí il l il i•• LBLB humanoshumanos sãosão dede difícildifícil cultivocultivo;;
•• TransformaçãoTransformação celularcelular (EBV)(EBV):: baixabaixa produçãoprodução dede anticorposanticorpos
Outra abordagem: Humanização g
de Anticorpos
Anticorpos quiméricos têm sua 
especificidade e sua função efetora especificidade e sua função efetora 
reduzida!
Anticorpos monoclonais humanosAnticorpos monoclonais humanos
Usando engenharia genética é possivel fazer um Anticorpo híbrido 
camundongo-humano como alternativa para reduzir os problemas de 
HAMA( anti anticorpos munoclonais de camundongos em humanos)HAMA( anti-anticorpos munoclonais de camundongos em humanos)
Anticorpos Quiméricos. Acs que combinam ap Q q
parte de ligação ao Ag (região variavel) do Ac
do camundongo com a parte efetora (região
constante) do Ac humano.constante) do Ac humano.
Ex: Infliximab, rituximab .
Anticorpos Humanizados. O Ac combina só com
com a sequência de aminoacidos responsáve pelo
sitio de ligação ao Ag (região hipervariavel) desitio de ligação ao Ag (região hipervariavel) de
um anticorpo de camundongo (ou rato) com o
resto da molécula do anticorpo humano,
restabelecendo sua própria região hipervariavelrestabelecendo sua própria região hipervariavel.
Ex:Xolair®.
MoAcsMoAcs comocomo agentesagentes
terapêuticosterapêuticos
Proteinas Recombinantes
MoAcMoAcMo cMo c
Quimérico Humanizado
DNA codifica o MoAc e a porção
de ligação do MoAc do Camund.,
promovendo sua integração com
o Ac humano produzido pelao Ac humano produzido pela
tecnologia do DNA
Uso de cultura de células de
mamíferos para expressar o DNA
e produzir MoAc metade Humano,
metade Camudongo (Bacteria não
é usada não produzem este tipo
65 90% humano 
é usada- não produzem este tipo
de glicoproteina).
Dependendo de grandeza das
partes do Ac camundongo x Ac95% humano inserção na 65 – 90% humano -
substituição da região 
variavel do Ac do 
camundongo por humano
partes do Ac camundongo x Ac
humano, poderemos afirmar se o
Ac é Humanizado ou Quimérico.
95% humano- inserção na 
região hipervariavel (ou 
CDR) dos Acs quiméricos que 
determina a especificidade.
Uso Clínico dos Anticorpos monoclonais
• Diagnóstico
– Detecção de peptídios e outras moléculas em várias 
doenças
• Endócrinas: hiperinsulinemia, diabetes, hiperparatireoidismo
• Antígenos tumorais (p53 tumor suppressor PSA a fetoproteina)• Antígenos tumorais (p53 tumor suppressor, PSA, a-fetoproteina)
• Anticorpos contra proteínas virais (AIDS, hepatites)
• Imunocintilografia
• Terapêutico
Anticorpos Neutralizantes– Anticorpos Neutralizantes
• Anti-ErbB2 fpara cancer de mama e ovário
• Anti-CD20 for Linfoma de células B não Hodgkin's g
• Antisoros e antídotos (virus e venenos)
• Descoberta de Drogas
– Identificação de alvos terapêuticos(phage display)
Aplicação na Radioterapia
Células malígnas Ac radioativosCélulas malígnas Ac radioativos
Moac específicos ( PSA, CEA…) podem ser marcados com
traçadores radioativos, injetados na circulação e localizados nas área
d él l l tã t ( tá t )onde as células alvos estão presentes ( metástases)
Cancer coloretal Recorrente
OctreoScan paciente com 
C i t táti d
detecção por radioimunoimagem
*Mac radiomarcado contra CEA
Carcinoma metastático de 
células pequenas  da próstata
www.stjosephs-marshfield.org/
Uso dos anticorpos monoclonaisUso dos anticorpos monoclonais
como ferramenta de diagnóstico
ImunoistoquímicaImunoistoquímicaImunoistoquímicaImunoistoquímica
Anticorpos Monoclonais ‐ Utilidades
Imunodiagnóstico/SorologiaImunodiagnóstico/Sorologia 
Anticorpos Monoclonais Anticorpos Monoclonais ‐‐ UtilidadesUtilidades
SorotipagemSorotipagem
Anticorpos Monoclonais Anticorpos Monoclonais ‐‐ UtilidadesUtilidades
I l iC l lI l i C l lImunologia CelularImunologia Celular
Anticorpos Monoclonais Anticorpos Monoclonais ‐‐ UtilidadesUtilidades
Biologia CelularBiologia Celular
MiosinaMiosinaTubulinaTubulina
ActinaActinaActinaActina
MoAcs
ÂDiagnóstico e Terapêutica: CÂNCER 
AC + 
CÉLULAS 
TRONCO
MoAcsMoAcs ConjugadosConjugados
Anticorpos e Neurociências
PESQUISA CIENTÍFICA
Anticorpo anti-GFAP: 
vermelho (glias)vermelho (glias)
Ac anti-Duplocortina:
Verde (neurônios novos)
Imagem: parte do catálogo Paisagens NeuronaisImagem: parte do catálogo Paisagens Neuronais 
Esta imagem: pesquisa da Faculdade de Medicina 
de Ribeirão Preto – USP
Norberto Garcia-Cairasco e Rodrigo Romcy-
Pereira
http://www.imagem.ufrj.br/index.php?acao=detalhar imagem&id
Pereira
MoAcsMoAcs
Diagnóstico e Terapêutica: ALZHEIMER
Enzima -secretase: importante local para bloqueio, inibindo 
a produção da B –amilóide. Reter Alzheimerp ç
Anticorpo com dupla bioafinidade: p p
Anti-secretase e anti-receptor transferrina: 
PENETRAMAIS FACILMENTE NO SNC HUMANOPENETRA MAIS FACILMENTE NO SNC HUMANO
MoAcsMoAcs
MAS AINDA HÁ MUITO A SER PESQUISADO.
CONTORNAR DIFICULDADES
O USO DE ANTICORPOS PODE ACABAR RESULTANDO EM 
LEUCOENCEFALOPATIA E DESMIELINIZAÇÃO DO SIST 
NERV CENTRAL, POR CONTATO COM O VIRUS JC,