Reações de Aglutinação x Precipitação

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Symonara Karina
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A reação de precipitação ocorre devido a interação de Ags solúveis e seus anti-soros correspondentes;
Pode ocorrem em meio gelificado (gel de agar ou agarose) ou líquido (nefelometria, turbidimetria)
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Symonara Karina
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 Baseia-se na difusão de substâncias solúveis por movimentos moleculares ao acaso em meio gelificado como o ágar ou gel de agarose.
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 Enquanto as moléculas estão livres continua ocorrendo difusão, até que se formam imunocomplexos de elevado PM, e que devido ao tamanho, ficam imobilizados no gel, permitindo a visualização do imunocomplexo como turvação nítida, que é o imunoprecipitado.
Precipitação máxima na região de equivalência
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TÉCNICAS DE PRECIPITAÇÃO EM GEL
IMUNODIFUSÃO
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IMUNODIFUSÃO DUPLA RADIAL
As soluções sofrem difusão e, quando o Ag e o Ac se encontram em zona de equivalência, se observa a reação pela formação de uma linha de precipitação: 
Pode ser visualizada pós lavagem do gel , para remoção das proteínas solúveis, por coloração dos arcos de precipitação com corante
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IMUNODIFUSÃO DUPLA RADIAL
São três os padrões possíveis:
Os arcos de precipitação formados entre o Ac e os dois antígenos se fundem, indicando que o Ac está precipitando epítopos idênticos.
2) O Ac preparado distingue os dois Ag diferentes que formam arcos independentes de precipitação.
3) Os antígenos compartilham o epítopo a, mas um deles também possui um epítopo b. A linha de precipitação indica, então, uma identidade parcial e não total, entre as preparações de Ag.
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A placa se encontra cheia de gel impregnado com um anticorpo específico
 Durante a incubação ocorre a difusão do antígeno na agarose e a formação de complexos Ag-Ac.,
O processo continua até ser atingida a zona de equivalência, com os complexos precipitando-se em um anel (halo) em torno do orifício.
IMUNODIFUSÃO SIMPLES RADIAL
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Combina dois métodos: eletroforese em gel + imunodifusão e precipitação das proteínas
As moléculas migram para o pólo negativo, distribuindo-se no gel de acordo com os seus PM e cargas elétricas. 
Uma canaleta é recortada entre os poços e preenchida com Ac, que se difunde. 
Ag e Ac formam arcos de precipitação.
IMUNOELETROFORESE
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Symonara Karina
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As reações de aglutinação decorrem da ligação entre o Ac e Ag sendo um deles particulado. 
É o agrupamento de micropartículas ou células que possibilita a visualização da aglutinação a olho nu. 
Agregação visível de partículas 
Eritrócitos
Bactérias
Fungos
Látex
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Fatores que influenciam a formação dos agregados
Classe do anticorpo envolvido.
Concentração iônica e pH do meio.
Presença de macromoléculas, íons, enzimas e conservantes.
Tempo e temperatura.
Padronização adequada da suspensão de micropartículas ou células.
Concentração ótima de antígeno ou Ac a ser fixado nas micropartículas ou células.
Estabilidade da ligação do Ag/Ac e acessibilidade dessa molécula nas micropartículas ou células.
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Vantagens:
	• Baixo custo.
	• Boa especificidade. 
	• Leitura visual.
	• Facilidade de execução.
Desvantagens:
	• Baixa sensibilidade. 
	• Reprodutibilidade dos lotes de reagentes.
	• Acessibilidade molecular para interação Ag-Ac.
	• Estabilidade da ligação do Ag/Ac no suporte.
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Symonara Karina
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Neste teste, o antígeno faz parte naturalmente da célula, e haverá aglutinação dessas células promovida por anticorpo contra esses antígenos (antígeno é naturalmente insolúvel).
Ex: Identificação de antígenos eritrocitários na tipagem sanguínea, reação de Widal (febre tifóide).
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Ag faz parte naturalmente da célula
Leitura visual e rápida 
Um dos componentes é insolúvel
Partículas que apresentam determinantes antigênicos naturais em sua superfície: Hemácias, bactérias, protozoários, etc;
Determinação do título - Diluições em série do anticorpo, frente a uma quantidade constante de antígeno.
Pró-zona: excesso de Ac
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 Exemplo: tipagem sanguínea em lâminas (sistema ABO)
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 Exemplo: tipagem sanguínea em lâminas (sistema ABO)
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Um resultado positivo é indicado por uma aglutinação visível (aglomeração dos eritrócitos na placa teste), como ilustrado acima. 
 Negativo Positivo
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 Exemplo: tipagem sanguínea em lâminas (sistema ABO)
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 Esse método emprega a adsorção de anticorpos ou antígenos protéicos solúveis na superfície de micropartículas inertes (suporte).
 Para o teste, as hemácias e as partículas inertes (látex, leveduras, etc.) podem ser sensibilizadas por: 
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 Sua aplicação é muito variada: grande diversidade de Ags que podem se ligar ao látex.
Teste de aglutinação de partículas de látex: Proteína C reativa (PCR), fator reumatóide (Látex), anti-estreptolisina O (ASO)
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Ac do soro
Ag solúvel adsorvido ao suporte - Látex
Aglutinação
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Ag solúvel adsorvido ao suporte (hemácia)‏
Aglutinação Positiva
	 Negativa
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RESULTADO POSITIVO (GRAVIDEZ) » Presença de hCG na urina » Não ocorre aglutinação
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RESULTADO NEGTIVO (GRAVIDEZ) » Ausência de hCG na urina » Ocorre aglutinação, pois os anticorpos anti-hCG não são bloquedos na incubação inicial, pq não havia o hormônio na urina. Livres, podem aglutinar as partículas de látex sensibilizas com hCG.
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Detecta Ac fixados às hcias revelados diretamente pela adição do Soro de Coombs (Anti-IgG humana)
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Symonara Karina
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Reação de Microfloculação
- VDRL (Veneral Disease Research Laboratory)‏
- RPR (Rapid Plasm Reagin)‏
 - suporte: cristais de colesterol
 - Ag: cardiolipina
 - placas escavadas
- Uso: pesquisa de reaginas 
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REAÇÃO DE MICROFLOCULAÇÃO
Ac da Amostra
Suspensão antigênica: 
cardiolipina, colesterol 
e lecitina
aglutinação
Reação Positiva=
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Reação negativa
Reação positiva
Resultado VDRL
Microscópio óptico 100x
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