Relatório de Bacterias

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UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO
CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
CIÊNCIAS BIOLÓGICAS/BACHARELADO/2018.1
Prof.ª EULÁLIA AZEVEDO XIMENES
INGRID ANDRÊSSA DE MOURA
TURMA B1
RELATÓRIOS DA DISCIPLINA
DE MICROBIOLOGIA
Recife-PE
SUMÁRIO
Introdução (Coloração Gram) ............................................................................3
Experimental.......................................................................................................4
Materiais 
Procedimento experimental
Resultados e Discussão.......................................................................................5
Conclusões..........................................................................................................6
Referências Bibliográficas..................................................................................7
Introdução (Nutrição e Crescimento Microbiano) ..............................................8
Experimental........................................................................................................9
Materiais 
Procedimento experimental 
Resultados e Discussão........................................................................................12
Conclusões...........................................................................................................13
Referências Bibliográficas...................................................................................14
Introdução (Metabolismo Microbiano) ...............................................................15
Experimental........................................................................................................16
 Materiais 
 Procedimento experimental 
Resultados e Discussão........................................................................................17
Conclusões...........................................................................................................19 
Referências Bibliográficas...................................................................................20
Introdução ( Controle do crescimento Bacteriano) ............................................21
Experimental........................................................................................................22 Materiais
17.3 Procedimento experimental
 18. Resultados e Discussão.......................................................................................23
 19.Conclusões ...........................................................................................................24
 20. Referências Bibliograficas................................................................................. 25
	
INTRODUÇÃO - COLORAÇÃO GRAM
 A estrutura da parede da célula bacteriana é complexa e responsável pela morfologia das bactérias. Seu estudo é importante porque há substâncias presentes na parede de certas bactérias que acarretam doenças. Salienta-se também, que alguns tipos de antibióticos são capazes de impossibilitar a formação das paredes celulares bacterianas, o que causa a sua morte.
 A composição química das paredes bacterianas contém um componente denominado peptidioglicano, este é constituído por moléculas do polissacarídeo glicosaminoglicano, unidas a cadeias formadas por quatro aminoácidos (tetrapeptídios). 
 Devido a sua composição, o microbiologista dinamarquês Hans Christian J. Gram (1853-1938) conseguiu desenvolver uma coloração que permite diferenciar em dois grupos de bactérias, as Gram-Positivas e as Gram-Negativas. As bactérias Gram-positivas apresentam uma grossa camada de peptidioglicano, enquanto as Gram-negativas essa camada é mais fina e envolta por uma segunda membrana lipoproteica com polissacarídeos incrustrados. 
 Logo, afim de adquirir um olhar crítico na identificação das bactérias pela coloração, foi feita uma prática na qual pode-se observar a diferenciação bacteriana pela forma e pela coloração e sua distinção entre leveduras.
EXPERIMENTO
2.1 Materiais 
Lâminas e Lamínulas
Culturas bacterianas
Alças de Platina
Reagentes para a coloração Gram (Cristal Violeta, Lugol, Fucsina)
Óleo de imersão
Microscópio óptico
Bico de Bunsen 
Água destilada.
2.2 Procedimento Experimental
Foi feita a flambagem ( aquecer o material na chama azul do bico de Bunsen, aquecendo-os até ao rubro ,afim de esterilizar o material) da alça de platina, esfriar no meio de cultura, para não correr o risco de matar os microrganismos presentes.Com o auxilio da alça espalhou-se a cultura bacteriana na lâmina, cobriu o esfregaço com uma solução de Cristal Violeta e deixou agir por 1 minuto, após o tempo, adicionou-se o Lugol por 1 minuto e posteriormente lavou-se com álcool e adicionou-se a Fucsina. Para retirar o excesso de Fucsina a lâmina foi lavada com água e depois colocou-se o óleo de imersão para a observação ao microscópio óptico. 
F.1- Ilustração do método de coloração das bactérias Gram
3. RESULTADOS E DISCUSSÕES
Bacilos Gram-Negativos
Bacilos Gram-Positivos
Cocos Gram-Positivos
Bacilos Gram-Positivos
 Cocos Gram-Positivos
levedura
 4. CONCLUSÃO
 Em análise das lâminas observadas nota-se que algumas bactérias retêm ambos os corantes e apresentam coloração violeta ao microscópio enquanto outras perdem o corante violeta, exibindo apenas a cor rosa. Conclui-se, portanto, que as bactérias coradas de violeta são denominadas de Gram-positivas e as que coram de rosa, Gram-negativas. A capacidade de reter o corante violeta depende da composição da parede bacteriana. Como a Gram-Negativa possui uma camada lipoproteica, na preparação, quando lavada, a bactéria perde essa camada lipoproteica que continha o corante violeta, apresentando-se róseo pela fucsina. 
5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 
MICROBIOLOGY: AN INTRODUCTION, 10ªEdição, autoria de GERARD TORTORA; BERDELL FUNKE; CHRISTINE CASE,
Biologia/ José Mariano Amabis, Gilberto Rodrigues Martho- 2 ed.- São Paulo: Moderna, 2004.
INTRODUÇÃO (Nutrição Microbiana)
 Para crescer os microrganismos necessitam de um ambiente propício do ponto de vista físico e químico. No caso das bactérias Gram Positivas, elas são capazes de sintetizar exoenzimas que são liberadas no meio, clivando os nutrientes, já as Gram Negativas apresentam em sua membrana externa, muitas purinas que permitem a passagem de moléculas hidrofílicas. 
 Com o intuito de demonstrar os processos de Nutrição microbiana foi feito uma prática, na qual através de diluições seriadas, 0,1 mL da amostra foi espalhada pela placa de Petri. Este método serve tanto para o isolamento quanto para contagem de microrganismos. Após o plaqueamento e incubação, por tempo e temperatura adequados, as células ou pequenos agrupamentos vão crescer isoladamente, dando origem a colônias que serão contadas na diluição apropriada e, portanto, chamadas de unidades formadoras de colônia (UFC).
 Dessa forma o objetivo da presente prática é de demonstrar a importância da nutrição microbiana e mensurar seu crescimento através da técnica de contagem.
2. EXPERIMENTO
Materiais 
Placas de Petri com meios de cultura
Ponteiras
Tubos de diluição;
Bico de Bunsen;
Pipetas;
Alça de Drigalski;
Meios de cultivo da bactéria Enterococcus faecalis 
 Procedimento Experimental
Ao redor da chama azul do Bico de Bunsen foi efetuado os seguintes procedimentos: 
Com o método de diluição seriada, a cultura de 24 h foi pipetada com uma Micropipeta Monocanal com sua ponteira previamente esterilizada. Adicionou-se 1mL do semeio de Enterococcus faecalis no primeiro tubo de fator de diluição de , homogeneizando-o sem seguida. Logo após foi retirado 1 mL do mesmo tubo de e colocando-o no de , e assim sucessivamente, 1 mL de no de fator de diluição de , e 1 mL do tubo de no de , homogeneizandotodos respectivamente. 
Em seguida 4 placas de Petri foram identificadas segundo a imagem F.2, Com a pipeta, pegamos 100 µl da amostra, foi espalhada pela superfície com a alça de Drigalski em uma placa contendo meio de cultura sólido , colocando a placa de primeiro foi feito o espalhamento com a alça de Drigalski sem a necessidade de troca-la pois a sua concentração é menor . Em seguida foi feita o mesmo procedimento com a placa de , e por fim, 
3. RESULTADOS E DISCUSSÕES
F.2- Placas de Petri identificadas e demonstrando o crescimento bacteriano.
Para se confirmar o número de microrganismos em uma amostra, foi feito um cálculo com base no número de colônias encontradas:
Onde: 
n = número de colônias
 = fator de diluição
= volume depositado na placa
Com base nesse cálculo, foram encontradas em UFC (unidades formadoras de colônia) por ml da placa de Petri que possuía fator de diluição :
n = 180 
Resultado: 7,25 UFC/mL
 4. CONCLUSÃO
 Nota-se, portanto, que a composição do meio e métodos de diluição seriada e plaqueamento são um fator crucial para a multiplicação bacteriana e imprescindíveis para sua contagem. 
5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 
MICROBIOLOGIA, volume I, MICHAEL PELCZAR, ROGER REID, E.C.S. CHAN. Editora McGraw-Hill. 
MICROBIOLOGY: AN INTRODUCTION, 10ªEdição, autoria de GERARD TORTORA; BERDELL FUNKE; CHRISTINE CASE,
https://docs.wixstatic.com/ugd/aed028_4e5b8f1045f64c36929c2cd3f02b7b29.pdf
	
INTRODUÇÃO- (Metabolismo Microbiano)
 As provas bioquímicas servem para auxiliar o microbiologista na investigação das atividades metabólicas das bactérias “in vitro”, para a realização dessas provas é necessário utilizar meios de cultivo especializados, contendo o substrato a ser analisado e fornecer ao microrganismo as condições necessárias ao seu desenvolvimento. São necessários então: Macronutrientes, que são necessários em grande quantidade e é essencial na estrutura e metabolismo microbianos e Micronutrientes, que são necessários em quantidades mínimas, porém são essenciais para funções enzimáticas e estruturais das biomoléculas.
 Como principais meios encontra-se os de Fonte de Carbono e Fonte de Nitrogênio. As fontes de Carbono são os compostos orgânicos, e é deles que se obtém energia e unidades básicas para o crescimento celular, as Fontes de Nitrogênio por sua vez são encontrados nas moléculas orgânicas, como aminoácidos e proteínas e em moléculas inorgânicas tais como NH3, NO3-, N2.
 Os Micronutrientes como os metais, estão em pequena quantidade e são necessários na composição de um meio de cultura, como Zn, Cu, Mn, Co, Mo e B. Tais micronutrientes podem ser deficientes em um meio de cultura, como por exemplo os meios sintéticos com compostos de alto grau de pureza e água ultrapura.
 Os meios de cultura podem ser classificados de acordo com seu conteúdo químico, podendo ser sintéticos, naturais ou complexos. Os meios de enriquecimento, são geralmente líquidos, de composição química rica em nutrientes, com a finalidade de permitir que as bactérias contidas em uma amostra aumentem em número, um exemplo seria o ICC (Infusão de cérebro e coração).
 Esse relatório visa então mostrar os meios de cultura seletivos, diferenciais, meios indicadores e sua classificação quanto ao estado físico. 
2. EXPERIMENTO
2.1 Materiais 
Alça de platina
Meios de cultura
Placas de Petri
Bico de Bunsen 
Procedimento Experimental	
	
F.3 Demonstração do procedimento prático
A alça de platina foi flambada, e em torno do bico de Bunsen foi feito o semeio bacteriano do Enterococus fecalis nas quatro placas de Petri. Rotulou-se as placas para identificação e esperou-se 24h para obtenção dos resultados.
 3. RESULTADOS E DISCUSSÕES
 
Como meios foram utilizados: 
FONTE DE CARBONO: MacConkey, Citrato Simmons, Bile Esculina e Manitol Salgado
FONTE DE NITROGÊNIO: MIO, Ureia e Fenilalanina 
Meios seletivos: A finalidade deste tipo de meio é selecionar as espécies que se deseja isolar e impedir o desenvolvimento de outros germes. Ex.: Agar Manitol Salgado.
-Manitol Salgado: o manitol é um poliálcool, quando o microrganismo fermenta esse manitol ele verá ácidos, e com o vermelho de fenol ocorrerá a modificação da cor vermelho para o amarelo, no manitol há presença de NaCl a 7,5% isso propicia que ocorra um aumento na pressão osmótica, selecionando assim as bactérias Halófilos.
Meios Diferenciais: Possibilita a distinção entre vários gêneros e espécies de microrganismos, por possuir substâncias que permitem uma diferenciação presuntiva, evidenciada na mudança de coloração ou na morfologia das colônias. Ex.: Agar McConkey, Bile Esculina, Ureia. 
- McConkey: usa como fonte de carbono a lactose com o semeio de bactérias de origem entérica o McConkey seleciona e isola, há uma baixa de PH, o vermelho neutro fica mais róseo e há precipitação de sais biliares. 
-Bile Esculina: tem como fonte de carbono um Glicosídeo que é junção da glicose com a glicona, quando ocorre a quebra da glicose em glicona passa a apresentar uma coloração de claro para negro, usando como indicador o citrato férrico.UREIA
Composição em g/L: · Digestão péptica de tecido animal-1.00 
Dextrose: 1.00 Cloreto de sódio-5.00 
Fosfato Dissódico: 1.20 Fosfato Monopotássico 0.80 
Vermelho Fenol: 0.012 ágar: 15.00 
pH FINAL: 6.8 ± 0.
-Ureia: Há a liberação de Nh3+, CO2 +H2O, formando o carbonato de amônia om o indicador vermelho de fenol o meio muda de cor para rosa, e há a presença então da enzima uréase. 
Meio Indicador: É utilizado no estudo das propriedades bioquímicas das bactérias, auxiliando, assim sua identificação. O mais simples é aquele usado no estudo das reações de fermentação. Ex.: Citrato de Simmons. 
-Citrato Simmons: quando o microrganismo utiliza o citrato para energia ele é citrato positivo, a coloração azul denota que o meio está alcalino, quando o organismo entra no ciclo do ácido cítrico. Há liberação de CO2+ H2O+ Na+ e forma o Carbonato de sódio alcalinizando o meio. Utiliza-se como indicador o azul de bromotimol.
Meio Fenilalanina: É um meio de fonte de nitrogênio, a fenilalanina é um aminoácido, ele avalia a presença de fenilalanina desaminase, o meio passa da cor verde para ser se produz ácido fenil pirúvico .
Meio MIO: É um meio semissólido que serve para a visualização da motilidade microbiana, com análise do triptofano é quebrado pela triptofanase e forma o indol, o p-dimetilaminobenzaldeido é o reagente de Curvax que retira o indol . Quando é positivo para ornitina ele fica lilás, quando é negativo só utiliza a glicose. 
CONCLUSÃO
 Nota-se, portanto, que diferentes espécies de bactérias, variam extensivamente quanto as exigências mínimas de substâncias nutrientes. Dessa forma, a escolha adequada do meio é essencial para obter resultados satisfatórios. 
REFERÊNCIAS BIBLIOGÁFICAS 
MICROBIOLOGIA, volume I, MICHAEL PELCZAR, ROGER REID, E.C.S. CHAN. Editora McGraw-Hill. 
MICROBIOLOGY: AN INTRODUCTION, 10ªEdição, autoria de GERARD TORTORA; BERDELL FUNKE; CHRISTINE CASE,
http://slideplayer.com.br/slide/5631280/ 
INTRODUÇÃO (CONTROLE DO CRESCIMENTO BACTERIANO)
 O controle de microrganismos é possibilitado pela ação de agentes físicos e químicos, que possuem propriedades de matar a célula microbiana, ou de impedir a sua reprodução. Os métodos podem ser: por esterilização, que significa a destruição total da população microbiana, por desinfecção, que não implica na eliminação de todos os microrganismos viáveis, porém elimina a potencialidade infecciosa do objeto, superfície ou local tratado. E por assepsia que não implica na eliminaçãode todos os microrganismos viáveis, porém elimina a potencialidade infecciosa do local tratado.
 No entanto, para que haja a plena ação do agente antimicrobiano é necessário que ocorra uma ação reconhecida sobre o microrganismo, que haja limpeza da superfície, local ou objeto a ser tratado, e dependem diretamente do tempo de contato, temperatura e com o tipo de organismo que se encontra no meio. 
 O objetivo desse relatório torna-se a avaliar a sensibilidade ou resistência dos microrganismos aos agentes antimicrobianos. A partir do antibiograma há a possibilidade de determinar a sensibilidade dos microrganismos patogênicos aos agentes antimicrobianos empregados.
EXPERIMENTO
Materiais
Swab
Tubos contendo: álcool 0,1%, álcool 70%, clorexidina 2% e ácido lático 10%
Placas de Petri 
Alça de Platina
Bico de Bunsen 
 2.2 Procedimento 
.
F.4 Ilustração do semeio uniforme 
 Flamba-se a alça de platina no bico de Bunsen utilizando um método de esterilização a seco, retira uma quantidade de microrganismo da placa de petri com a cultura bacteriana de Enterococus fecalis e faz a suspensão em soro fisiológico.Compara-se a turvação contra a luz com escala 0,5 de Mac Farland , que é um padrão já pre-estabelecido. No tubo onde fez-se a suspensão, com o swab faz o semeio na Placa de Petri com o Mueller-Hinton , deixando-o bem uniforme. 
 Divide-se a placa em 4 partes, separando 4 pontos de 10 mm de distância de um a outro, com a pinça pega um disco e o imerge em uma solução contendo Ácido Lático, outro disco com antibiotico Clorexidina, e outros com Alcool 91 % e Alcool 15%.Após isso insere-se os discos na Placa com o semeio e incuba a 35º 2º C por 24h. E mede-se com o paquimetro o diametro do disco formado.
RESULTADOS E DISCUSSÕES
 
Nota-se que o organismo possui uma maior sensibilidade ao ácido lático, a clorexidina e ao álcool iodado. Quando organismo é sensível há a formação do halo límpido, e há a comparação com a tabela preconizada pelo CLSI. Quando a sensibilidade é intermediária os microrganismos poderão demonstrar sensibilidade a drogas, mas estão em seu limite de sensibilidade. E quando são resistentes elas não respondem as drogas nos discos.
CONCLUSÃO
 Entende-se, portanto que com o uso do antibiograma é relativamente fácil identificar em qual nível determinado microrganismo é resistente. No entanto esse método de controle bacteriano bote ter algumas desvantagens como não ser adequado para a detecção de mecanismo de resistência resultantes da produção de beta-lactamases, e outro que possui a sensibilidade diminuída. 
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
http://anvisa.gov.br/servicosaude/controle/rede_rm/cursos/atm_racional/modulo2/metodos5.3.htm
http://www.ebah.pt/content/ABAAABO2sAL/controle-microorganismos
https://docs.google.com/presentation/d/172dRqxgPAubnIxY1HpqhHL1nZh1pNb5Ddn4bun_j5PI/edit#!
MICROBIOLOGIA, volume I, MICHAEL PELCZAR, ROGER REID, E.C.S. CHAN. Editora McGraw-Hill. 
MICROBIOLOGY: AN INTRODUCTION, 10ªEdição, autoria de GERARD TORTORA; BERDELL FUNKE; CHRISTINE CASE,