Aula pratica de biofisica (2)

Prévia do material em texto

➢ Método: A espectrofotometria pode ser definida como toda técnica analítica que 
usa a luz para medir as concentrações das soluções, através da interação da luz com 
a matéria. 
Lei de Lambert-Beer 
A “força vital” da espectrofotometria está fundamentada na lei de Lambert-Beer, que 
estabelece: 
“A absorbância é diretamente proporcional à concentração da solução de amostra.” 
 
➢ Interferentes: 
✓ É imprescindível que o equipamento seja calibrado e manuseado de acordo com 
as instruções do fabricante, por ele já traz a margem de erro que o aparelho tem; 
✓ Evitar erros de leitura certificar-se de que o equipamento esteja fechado. Antes 
da leitura a luz do ambiente pode interferir no resultado; 
✓ Manter sempre limpo e fechado a fim de evitar o acumulo de partículas de 
poeira que interferem na análise. Em hipótese alguma toque a cubeta com as 
mãos sem luvas, a nossa mão contém gorduras e interferem na leitura. 
✓ Só podem ser analisados por espectrofotometria de absorção compostos que 
absorvem luz. 
✓ Em caso de soluções fortemente coloridas como permangantos, complexos 
altamente coloridos, dicromatos, cromatos e outros compostos com cores 
altamente acentuadas deverão ser feitas no mínimo 5 diluições. 
 
 
 
 
 
CURSO: Medicina 
DISCIPLINA: Biofísica CÓDIGO: 5772 
PROFESSOR: M.Sc Cristiano Oliveira 
PERÍODO: 1º TURMA: MED01 TURNO: Diurno 
Modalidade 
Aula 
Prática 
Tema Espectrofotometria do visível 
Doseamento da glicose e do colesterol 
 
Leitura em espectrofotômetro Comprimento de onda: 500 ± 20 nm. 
Cubeta: 1cm. 
Temperatura: ambiente 
Reagentes 
Padrão - Contém Glicose 100 mg/dL, colesterol 200mg/dL 
Reagente de Cor - Contém tampão pH 7,5 de fosfato 70 mmol/L, fenol 5,0 mmol/L, glicose 
oxidase 10000 U/L, peroxidase > 1000 U/L e 4- aminoantipirina 0,4 mmol/L. 
 
 
 
 
 
➢ Procedimento Manual 
1- Deixar os reagentes atingirem a temperatura ambiente ou a do banho-maria antes 
da realização do teste. 
2- Identificar 3 tubos de ensaio com (1)"Branco", (3)"Teste" e (1)"Padrão" e 
proceder: 
 
Tubos Branco Teste Padrão 
Amostra -------- 10 µL ------- 
Padrão -------- ------- 10 µL 
Reagentes de cor 1000 µL 1000 µL 1000 µL 
 
➢ Cálculo dos Resultados 
Concentração do Padrão = Cp glicose = 100 mg/dL, Cp colesterol 200mg/dL 
Concentração do Teste = Ct Absorbância do Padrão = Ap Absorbância do 
Teste = At 
 
Fc = Cp/Ap 
 Ct = At x FC 
 
Valores de Referência Interpretação dos resultados da glicemia de jejum 
1 – Glicose entre 60 e 99 mg/dL : Normal 
2 – Glicose entre 100 e 125 mg/dL: Alterada (Pré-Diabetes) 
3 – Glicose ≥ 126 mg/dL: Diagnostico provisório de Diabetes Mellitus 
 
➢ Referencias: 
 
✓ Bula do kit Glicose - PP (ANALISA Diagnóstica) 
✓ Harris, Daniel C.; Análise Química Quantitativa; tradução Carlos Alberto 
Riehl...[et al.].5.ed. LTC Editora, Rio de Janeiro:1999. cp.19,20,21. 
✓ Lenhinger, Albert Lester; Princípios de Bioquímica. 3.ed. Guanabara 
Koogan, Rio de Janeiro:1992. cp.3. 
✓ Jones, Loretta; Atkins, Peter Princípios de Química - Questionando a Vida 
Moderna e o Meio Ambiente - 3 ª Ed-Porto Alegre: Bookman, 2006. 
 
 
 
➢ Observações e resultados: 
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
_______ Resultado de Glicose: 
1_______________2______________3____________4_________________________
______________________________________________________________________
_5_______________6______________7_____________________________________
______________________________________________________________________
___ Resultado de Colesterol: 
1_______________2______________3____________4_________________________
______________________________________________________________________
_5_______________6______________7_____________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
________________________________ 
➢ Cálculos do experimento 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
➢ Conclusões 
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
_____________________________________________________________________ 
 
 
Grupo N___ 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Visto do professor_______________________________________ data_____