introdução a praticas laboratoriais imunologia ago 17

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Introdução às Práticas 
Laboratoriais em Imunologia
Prof. Helio José Montassier
Principais preparações antigênicas usadas em atividades 
experimentais em imunologia:
•Antígenos particulados: apresentam dimensão de uma célula e, 
ao se adicionar um diluente apropriado, forma-se uma 
suspensão. Ex: bactérias e células eucariontes, como hemácias 
(carneiro, galinha).
•Antígenos solúveis: apresentam dimensão de macro-molécula 
e, ao se adicionar um diluente apropriado, forma-se uma 
solução. Ex: proteínas (ovoalbumina, gamaglobulina) e 
polissacarídeos. 
Tipos de diluentes:-
•Solução Salina (NaCl 0,15 M)
•PBS ou Tampão Fosfato com Salina (NaCl a 0,15M e 
Fosfatos Ácido e Básico de Sódio a 0,04 M)
Sangue colhido 
c/ anticoagulante 
e s/ centrifugar
Sangue colhido 
c/ anticoagulante 
e centrifugado p/ 
separar a fração 
líquida do 
sobrenadante
Sangue colhido 
s/ anticoagulante 
e depois de 
coagulado é 
centrifugado
Esquema de Componentes Ppais. e Ativação da Via de 
Coagulação do Sangue
•PLASMA é o sobrenadante obtido após a centrifugação do sangue total, colhido em tubo 
com anticoagulante.
•Os anticoagulantes mais utilizados no laboratório clínico são : heparina, EDTA e Citrato 
de sódio.
•A heparina previne a coagulação pois liga-se à trombina, já o EDTA e o Citrato ligam-se 
ao Ca²+ e Mg²+ , cuja interferência se dá nas enzimas cálcio e magnésio-dependentes 
envolvidas na cascata de coagulação.
•O citrato é utilizado em coletas de sangue para transfusão.
•SORO é o sobrenadante obtido após coleta de sangue total e deixado para coagulação 
espontânea (que leva de 30 a 45 minutos) . Durante o processo de coagulação , o 
fibrinogênio é convertido em fibrina, é a clivagem proteolítica da trombina, e a sua maior 
diferença entre plasma e soro é a ausência de fibrinogênio no soro.
SOROLOGIA
Imunologia e Sorologia:-
Imunologia é o ramo da biologia que estuda o sistema imune.
• Funcionamento do sistema imune de um indivíduo (vertebrado) no 
estado sadio ou não.
• Características físicas, químicas e fisiológicas dos 
componentes do sistema imune.
SOROLOGIA
Doenças diagnosticadas por técnicas imunológicos a 
partir do soro (+ frequente), do plasma (- frequente) ou do 
sangue total (- frequente):-
•Doenças Infecciosas
•Doenças autoimunes
•Reações de Hipersensibilidade (Alergias)
•Seleção de doadores de sangue (Imuno-hematologia)
•Seleção de doadores de órgãos ou tecidos para transplantes
SOROLOGIA
Exames e técnicas laboratoriais para a detecção de anticorpos 
(+frequente) ou de antígenos (-frequente).
• ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay) – cinomose, peste 
suína clássica, toxoplasmose, etc.
•Reação de Imunofluorescência (RIF) – leishmaniose, toxoplasmose, 
leptospirose, etc.
•Látex – Aglutinação – Detecção de Fator Reumatóide, Proteína C 
Reativa, rotavirus, coronavirus, etc.
•Rádio-Imuno-Ensaio – Dosagem de hormônios.
Técnica de Diluições Seriadas
Importância – permitir a determinação das quantidades relativas 
de anticorpos em testes sorológicos
Técnica de diluições seriadas:
-Séries com razão constante e diluições sucessivas. 
-Nesta técnica, transferem-se volumes sucessivamente de um tubo para outro seguinte, 
ao qual se adicionou quantidade adequada de diluente.
Exemplo 1. Diluições sucessivas com razão constante igual a 2:-
1) Distribuir numa série de tubos com 1 ml de diluente.
2) Ao tubo 1 adicionar 1 ml do material.
3) Transferir 1 ml do tubo 1 para o tubo 2.
4) Transferir 1 ml do tubo 2 para o tubo 3.
5) Prosseguir da mesma maneira até o último tubo da série.
Ao final as diluições obtidas serão: 1:2; 1:4; 1:8; 1:l6; 1:32; 1:64
Exemplo 2. Diluições sucessivas com razão constante igual a 10:-
1) Distribuir 0,9ml de diluente numa série de tubos.
2) Ao tubo 1 adicionar 0,1 ml do material não diluído.
3) Transferir 0,1 ml do tubo 1 para o tubo 2.
4) Transferir 0,1 ml do tubo 2 para o tubo 3.
5) Prosseguir da mesma maneira até o último tubo da série.
As diluições obtidas serão: 1:10; 1:100; 1:1000; 1:10.000; e 1:100.000.
Problemas: -
1. Como você faz para diluir um soro a 1/50;1/100;1/200;1/400 e 1/800?
2. Como você procede para diluir um vírus de 10-3 a 10-8?
Perguntas:-
1. Qual o procedimento geral para se preparar uma suspensão antigênica de hemácias a 
5%, sem fazer a aferição por espectrofotometria?
2. Como se faz para preparar uma solução antigênica de gamaglobulina bovina a 0,1%, 
num volume final de 5ml?
3. Qual das preparações antigênicas acima (exercícios 1 e 2) será usada para a obtenção 
de soros: 
a) Precipitantes b) Aglutinantes
4. Qual(is) a(s) principal(is) finalidade(s) de se fazer uma escala de diluições seriadas?
5. O que são:
a) Solução anti-coagulante de Alsever
b) Solução salina d) Soro
c) Plasma e) Solução salina tamponada