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PRESENTACIONES ORALES Sesión: Diagnóstico Prenatal C0083 VALORACIÓN DEL CRIBADO PRENATAL NO INVASIVO EN UNA MUESTRA DE MUJERES QUE HABÍAN REALIZADO PRUEBA INVASIVA EN UNA GESTACIÓN PREVIA María Orera Clemente, Sara Aldana, Carlos de Pablo Gallego Departamento Biología Celular. Facultad de Medicina. Universidad Complutense (Madrid) España 1 Objetivos Determinar el nivel de conocimiento y valoración acerca de las pruebas de diagnóstico prenatal, en una muestra de 100 mujeres en edad fértil, que habian realizado biopsia corial o amniocentesis en una gestación anterior. 2 Material y Método Encuesta telefónica en 100 mujeres que realizaron prueba invasiva entre 2014-2016 en el hospital Universitario Gregorio Marañón de Madrid. Las mujeres habían firmado un consentimiento informado y aceptaron libremente participar en la encuesta. Los datos demográficos fueron anonimizados 3 Resultados - El 54% de las mujeres había oído hablar de la prueba de ADN fetal en sangre. - De entre las que la conocían, el 80 % la consideraba más segura. - Sin embargo, solo el 20% la valoraba como más eficaz, siendo la mejor valorada la amniocentesis. - El medio de información más habitual fue el ginecólogo (78,1%). - El factor de elección extra-personal predominante fue la opinión del médico, seguido de la opinión de su pareja. - El factor de decisión característico de la prueba fue la ausencia de riesgos para el feto, seguido de la calidad de los resultados. - El 79,7 % de las pacientes elegirían la prueba del ADN fetal tras serle presentada. - El 98,4% considera que esta prueba debería estar disponible en centros públicos. - El 65,6 % estarían dispuestas a asumir los costes de la prueba. 4 Conclusiones La mitad de las mujeres encuestadas conocen las distintas opciones de diagnóstico prenatal, principalmente a través de la información obtenida del ginecólogo. Las pruebas no invasivas están muy bien valoradas por la ausencia de riesgos, aunque algunos de los aspectos metodológicos no se conocen bien. La mayoría de las mujeres realizaría una prueba invasiva y piensa que debería estar financiada por el sistema sanitario público. En caso contrario, 2/3 de las mujeres estarían dispuestas a asumir los costes de la misma. C0287 DIAGNÓSTICO PRENATAL DE LAS DISPLASIAS ESQUELÉTICAS: DE LA SOSPECHA ECOGRÁFICA AL DIAGNÓSTICO GENÉTICO Eugenia Antolin Alvarado1, Agnieska Rychlik2, Karen Heath3, Miriam Aza3, Fe García3, Laura Sotillo4, Beatriz Herrero4, Francisco lópez4, Rita María Regojo5, Fernando Santos6, Roberto Rodríguez4, Elena Mansilla6, José Luis Bartha4 1Sección de Ecografía y Medicina Fetal. Servicio de Obstetricia y Ginecología. Unidad Multidisciplinar de Displasias Esqueléticas (UMDE). Hospital Universitario La Paz Madrid (Madrid) España 2Servicio de Obstetricia y Ginecología. Hospital Universitario La Paz (Madrid) España 3Instituto de Genética Médica y Molecular (INGEMM). Unidad Multidisciplinar de Displasias Esqueléticas (UMDE). IdiPAZ, UAM y CIBERER, ISCIII. Hospital Universitario La Paz (Madrid) España 4Sección de Ecografía y Medicina Fetal. Servicio de obstetricia y Ginecología. Hospital Universitario La Paz (Madrid) España 5Servicio de Anatomía Patológica. Unidad Multidisciplinar de Displasias Esqueléticas (UMDE). Hospital Universitario La Paz. (Madrid) España 6Instituto de Genética Médica y Molecular (INGEMM). Unidad Multidisciplinar de Displasias Esqueléticas (UMDE). 1 Objetivos Evaluar la capacidad de la ecografía para sospechar una displasia esquelética (DE) y dirigir el estudio genético específico. 2 Material y Método Estudio descriptivo retrospectivo de una serie de casos con sospecha ecográfica de DE controlados en un hospital terciario (enero 2011-diciembre 2016). Ante el hallazgo de una longitud de fémur (LF) < p3 se realizó un estudio ecográfico protocolizado orientado al despistaje de DE. En función de los hallazgos y valorado por un equipo multidisciplinar se procedió a cariotipo + arrays o estudios NGS. En caso de ILE/muerte intrauterina/neonatal se realizó estudio radiológico, dismorfológico y necrópsico. 3 Resultados De 35.301 embarazos, se sospechó una DE en 49 casos (0.17%). En 19 (38.8%) el único hallazgo fue la presencia de HL cortos (HLC): 9 (47.4%) fueron RN normales, en 7 (6.8%) se confirmó una DE y 3 fueron CIR. En 23 (46.9%) los HLC asociaban otros hallazgos sugestivos de DE: en 19 (82.6%) se confirmó la DE, hubo 1 Cornelia de Lange y de los 3 casos con anomalía estructural no esquelética asociada, en 2 se diagnosticó una cromosomopatía. En 7 (14.3%), si bien no existían HLC, la ecografía mostraba otras anomalías compatibles con DE: en 3 se confirmó la DE, hubo 1 Cornelia de Lange, 1 macrocefalia- malformación capilar y 1 asociación VACTERL; en 1 caso se trató de una hemivértebra aislada. De las 49 gestaciones en que se sospechó una DE, ésta se confirmó en 29 (59.2%) ya fuera por estudio genético molecular (14) o sólo dismorfológico (15). 4 Conclusiones La presencia de una LF<p3 es el signo de alarma para buscar otros hallazgos ecográficos sugestivos de DE. Casi mitad de los HLC aislados son RN normales, sin embargo, cuando se asocia a otras anomalías sugestivas de DE, la capacidad diagnóstica de la ecografía supera el 80%. Es fundamental un trabajo multidisciplinar para llegar a un diagnóstico que nos permita un correcto asesoramiento. C0414 ROBUSTEZ DE LOS VALORES DE SENSIBILIDAD, ESPECIFIDAD Y PREDICCIÓN PARA LAS TRISOMIAS 21, 13 Y 18 A PARTIR DE CRIBADO PRENATAL NO INVASIVO DE ANEUPLOIDÍAS (NIPT). ESTUDIO EN 12000 GESTANTES Yaima Torres1, Xana da Silva1, Juan Cruz Cigudosa1, Javier Suela2 1NIMGenetics (Madrid) España 2NIMGenetics, Genómica Madrid (Madrid) España 1 Objetivos El cribado prenatal no invasivo es una herramienta de diagnóstico genético prenatal con creciente implantación. Este estudio pretende definir los parámetros de utilidad clínica que proporciona el NIPT para las trisomías 13, 18 y 21 en una serie de >12000 gestantes españolas con embarazos unitarios. 2 Material y Método Analizamos 12694 muestras. Todas ellas tuvieron el mismo protocolo de extracción de ADN circulante y secuenciación tras controles de calidad (incluyendo cálculo de fracción fetal). Secuenciamos una media >6M/secuencias por caso y determinamos los riesgos de la presencia de las trisomías T21, T18 y T13. Todos los casos de alto riesgo se validaron por técnica de diagnóstico prenatal invasiva. 3 Resultados Del total de muestras analizadas, fueron informativas un total de 12.660 (99.74%). Solo 204 muestras (1.6%) requirieron un segundo ensayo por baja fracción fetal, recuperando 170 casos. De las 12660 muestras con resultados, se identificaron 150 de casos de alto riesgo para T21, 43 altos riesgos para T18 y 21 altos riesgos para T13. Tras validación, observamos un total de 146 Verdaderos Positivos (VP), 4 Falsos Positivos (FP) y 1 Falso Negativo (FN) para T21; 31 VP y 12 FP para T18, y 16 VP y 5 FP para T13. No observamos ningún FN para T18 ni T13. Los valores de contingencia son: T21 T18 T13 SENSIBILIDAD 99.32 (96.27-99.98) 100 (88.78-100.00) 100 (79.41-100.00) ESPECIFICIDAD 99.97 (99.92-99.99) 99.9 (99.83-99.95) 99.96 (99.91-99.99) V.PRED. POS. 97.33 (93.20-98.98) 72.09 (59.47-81.97) 76.19 (57.12-88.49) V.PRED. NEG 99.99 (99.94-100.00) 100 100 4 Conclusiones La técnica NIPT reporta resultados de sensibilidad y especificidad superiores al 99% para todas las trisomías. Los valores predictivos están muy por encimade las técnicas convencionales de cribado. El VPP de la trisomía 21 (> 97%) es superior al de T18 y T13, si bien en nuestra serie todas las trisomías presentaron los mismos VPN. C0416 LOS VALORES DE SENSIBILIDAD, ESPECIFIDAD Y PREDICCIÓN DE ANEUPLOIDÍAS SEXUALES OBTENIDOS POR CRIBADO PRENATAL NO INVASIVO (NIPT) SON SIMILARES A LOS OBSERVADOS PARA LAS TRISOMÍAS AUTOSÓMICAS MÁS FRECUENTES Xana da Silva1, Yaima Torres1, Javier Suela2, Juan Cruz Cigudosa1 1NIMGenetics (Madrid) España 2NIMGenetics, Genómica Madrid (Madrid) España 1 Objetivos El cribado prenatal no invasivo es una herramienta de diagnóstico genético prenatal con creciente implantación. Este estudio pretende definir los parámetros de utilidad clínica que proporciona el NIPT para las diferentes aneuploidías sexuales en una serie de >6000 gestantes españolas con embarazos unitarios. 2 Material y Método Analizamos 6526 embarazadas. Todas ellas tuvieron el mismo protocolo de extracción de ADN circulante y secuenciación tras controles de calidad (incluyendo cálculo de fracción fetal). Secuenciamos una media >8M/secuencias por caso y determinamos los riesgos de la presencia de las aneuploidías sexuales: X0, XXX, XXY e XYY. Los casos altos riesgos fueron validados con una técnica invasiva. 3 Resultados Del total de muestras analizadas, fueron informativas un total de 6.513 (99.8%). Solo 107 muestras (1.67%) requirieron un segundo ensayo por baja fracción fetal, recuperando 94 casos. De las 6513 muestras con resultado, identificamos 38 casos de altos riesgos para cromosomas sexuales (0.58%): 13 X0, 15 XXY, 5 XXX y 5 XYY. Una vez validadas, observamos un total de 25 Verdaderos Positivos (4 X0, 13 XXY, 4 XXX y 4 XYY), 13 Falsos Positivos (9 X0, 2 XXY, 1 XXX y 1 XYY) y 1 Falso Negativo (XYY): Crom Sex X0 Resto de aneuploidías SENSIBILIDAD 96.15 (80.36-99.90) 100 (39.76-100.00) 95.45 (77.16-99.88) ESPECIFICIDAD 99.80 (99.66-99.89) 99.86 (99.74-99.94) 99.94 (99.84-99.98) V.PRED. POS. 65.79 (52.63-76.90) 30.77 (18.79-46.04) 84 (66.25-93.35) V.PRED. NEG 99.98 (99.89-100.00) 100 (100.00) 99.98 (99.90-100.00) 4 Conclusiones La detección de aneuploidías sexuales, como conjunto, presentan ratios de sensibilidad, especificidad y valor predictivo negativo >96%, siendo el mejor dato la especificidad. Son similares a los observados para las trisomías más frecuentes. La monosomía del cromosoma X, debido a la posibilidad de pérdida de cromosoma por la gestante (edad) y/o la elevada frecuencia de mosaicismo placentario, tiene un valor predictivo positivo limitado, si bien el valor predictivo negativo es extremadamente elevado C0496 MEJORANDO EL DIAGNÓSTICO MOLECULAR EN CASOS DE DISPLASIAS ESQUELÉTICAS DIAGNOSTICADAS PRENATALMENTE Carlos Iván Rivera Pedroza1, Jimena Barraza García2, Carolina de la Torre3, Victoria EF. Montano3, Eugenia Antolin Alvarado4, Roberto Rodríguez González5, Elena Vallespin6, Ángela del Pozo7, Fernando Santos Simarro8, Rita Maria Regojo Zapata9, Elena Mansilla Aparacio10, Karen E. Heath10 1Instituto de Genética Médica y Molecular (INGEMM), Hospital Universitario La Paz, Universidad Autónoma de Madrid. Unidad Multidisciplinar de displasias Esqueléticas (UMDE), Hospital Universitario La Paz, Madrid Madrid (Madrid) España Unidad Multidisciplinar de displasias Esqueléticas (UMDE), Hospital Universitario La Paz, Madrid. CIBERER, ISCIII, Madrid (Madrid) España 4Unidad Multidisciplinar de displasias Esqueléticas (UMDE), Hospital Universitario La Paz, Madrid. Unidad de Medicina Fetal, Hospital Universitario La Paz, Madrid (Madrid) España 6Instituto de Genética Médica y Molecular (INGEMM), Hospital Universitario La Paz, Universidad Autónoma de Madrid. 7Instituto de Genética Médica y Molecular (INGEMM), Hospital Universitario La Paz, Universidad Autónoma de Madrid. CIBERER, ISCIII, Madrid. (Madrid) España 8Instituto de Genética Médica y Molecular (INGEMM), Hospital Universitario La Paz, Universidad Autónoma de Madrid. 9Unidad Multidisciplinar de displasias Esqueléticas (UMDE), Hospital Universitario La Paz, Madrid. Unidad de Patología, Hospital Universitario La Paz, Madrid. (Madrid) España 1 Objetivos Las displasias esqueléticas (DE) son un grupo heterogéneo de enfermedades que se caracterizan por alteraciones del sistema óseo. La sospecha diagnóstica de DE prenatal se establece mediante ultrasonido, valorando el tipo de alteración ósea, las malformaciones asociadas y la edad gestacional al diagnóstico. Objetivo: Determinar la tasa de diagnóstico molecular y la eficacia de un panel de NGS para displasias esqueléticas en casos diagnosticados prenatalmente. 2 Material y Método Cohorte de 29 casos de DE diagnosticados prenatalmente. En cuatro de ellos se realizó estudio anatomopatológico. Las muestras fueron líquido amniótico, vellosidades coriales, sangre y/o fibroblastos tomadas prenatalmente, o de aborto. 25 casos fueron analizados mediante un panel de NGS de diseño propio (SkeletalSeq.V4-V6, 327-368 genes) y 4 casos mediante secuenciación Sanger de FGFR3 para displasia tanatofórica. 3 Resultados Se identificó el defecto molecular en 19/29 (65,5%) de los casos. El análisis mediante el panel se realizó en 23 casos (falló en dos casos), y 15 casos fueron diagnosticados, en dos casos se identificó sólo una variante para un padecimiento recesivo y en un caso se observó una variante patogénica en PTPN11 en heterocigosiscomohallazgo secundario. Se detectaron 16 variantes nuevas y cuatro previamente descritas. Las patologías más frecuentes fueron: Síndrome de Costilla-Corta con o sin polidactilia, displasia tanatofórica y osteogénesis imperfecta. 4 Conclusiones La(s) mutación(es) patogénica(s) fueron identificadas en 65.5% de los casos; esta tasa es mayor a lo reportado en la literatura, demostrando que la combinación del panel SkeletalSeq y secuenciación directa es eficiente para el abordaje de las DE prenatales, permitiendo ofrecer un asesoramiento más preciso y la posibilidad de diagnóstico preimplantacional o prenatal en subsecuentes embarazos. En los casos sin diagnóstico se sugiere realizar array para descartar CNVs, y/o exoma para descartar mutaciones en genes relacionados con síndromes que involucran el sistema óseo o genes nuevos de DE. C0521 VALIDACIÓN DE LA TECNOLOGÍA NEXT GENERATION SEQUENCING PARA SU APLICACIÓN AL DIAGNÓSTICO GENÉTICO PREIMPLANTACIONAL DE ALTERACIONES CROMOSÓMICAS ESTRUCTURALES. Alvaro Gomez Duro, Almudena Polo Picasso, Maria Lidón Carretero Vilarroig, Esther Fernández García Geniality Diagnostico Genetico Madrid (Madrid) España 1 Objetivos Introducción: Las alteraciones cromosómicas estructurales representan el 15% de las indicaciones de diagnóstico genético preimplantacional (DGP). La incorporación del array-CGH (aCGH) al DGP de alteraciones estructurales supuso una mejora sustancial al analizar todo el complemento cromosómico del embrión. Recientemente, la tecnología de secuenciación masiva (NGS) ha irrumpido en el campo de la genética reproductiva desplazando al aCGH en el screening de aneuploidías. La gran ventaja del NGS radica en que combinada con la biopsia de Trofoectodermo, permite por primera vez detectar con fiabilidad la presencia de mosaicismo, cuando está presente en al menos el 20% de las células biopsiadas, mejorando así la selección de embrión Euploide. Objetivo: Validación de la tecnología NGS como método de DGP de alteraciones cromosómicas estructurales. 2 Material y Método 14 embriones de 9 pacientes portadores de reordenamientos. Las muestras amplificadas mediante Whole Genome Amplification (Sureplex), procedentes de embrionesbiopsiados en día+3 (4) y dia+5 (10) de cultivo embrionario, habían sido previamente analizados mediante la tecnología de aCGH (24sure+). NGS: protocolo de Veriseq-PGS (Illumina) y secuenciación en sistema MiSeq. Análisis de resultados mediante el software BlueFuse Multi4.3. 3 Resultados En las 14 muestras analizadas se obtuvo diagnóstico clínico (trasferible/no transferible) igual al obtenido previamente mediante aCGH. Tanto la sensibilidad como la especificidad Clínica fueron del 100%. La sensibilidad y especificidad analítica fue del 100% y 99,67%, respectivamente. Una de las muestras de trofoectodermo mostró ganancia y pérdida de dos cromosomas en mosaico no detectadas mediante aCGH. 4 Conclusiones Los resultados obtenidos demuestran la capacidad del NGS, para el análisis de alteraciones cromosómicas estructurales en el DGP, tanto en blastómero como en trofoectodermo, proporcionando en este último, además del análisis del reordenamiento y el screening de todo el componente cromosómico, la detección de embriones mosaico. El NGS es una técnica robusta, de alto rendimiento y lista para su aplicación clínica en el campo de la genética reproductiva Sesión: Enfermedades Metabólicas y Mitocondriales C0123 SECUENCIACIÓN MASIVA COMBINADA CON ESTUDIOS BIOQUÍMICOS Y FUNCIONALES COMO HERRAMIENTA PARA LA CONFIRMACIÓN DE ENFERMEDADES METABÓLICAS HEREDITARIAS DETECTADAS EN LOS PROGRAMAS DE CRIBADO NEONATAL Rosa Navarrete, Ana Isabel Vega, Fatima Leal, Lourdes Desviat, Pedro Ruiz-Sala, Patricia Alcaide, Margarita Castro, Paloma Sanz, Maria Jesus Ecay, Pilar Rodriguez-Pombo, Magdalena Ugarte, Begoña Merinero, Celia Perez-Cerdá, Belen Perez Centro de Diagnóstico de Enfermedades Moleculares, Centro de Biología Molecular, Ciberer, IdiPAZ, Universidad Autónoma de Madrid (Madrid) España 1 Objetivos El análisis de aminoácidos y acilcarnitinas por espectrometría de masas en tándem en sangre impregnada en papel permite detectar en el cribado neonatal más de 30 enfermedades metabólicas hereditarias que deben ser confirmadas por pruebas bioquímicas de segundo nivel y análisis genético. En este trabajo presentamos el estudio genético por secuenciación masiva de 107 muestras de casos con cribado neonatal positivo con el propósito de evaluar la capacidad de ser utilizada como única prueba de segundo nivel. 2 Material y Método El análisis se realizó mediante la captura del exoma de 120 genes. En algunos casos se utilizó el panel TruSightOne®. 3 Resultados En 62 casos se confirmó la sospecha inicial identificando la presencia de mutaciones bialélicas en 25 genes, todos con una mutación de pérdida de función y/o descrita en las bases de datos. En 32 casos solo se detectó una mutación en PAH, ACADM, ACADVL, GCDH, MCCC1, MCCC2, ACADS o SLC22A5 o dos mutaciones monoalelicas en genes de la misma ruta. No se encontró ninguna mutación en 13 muestras de recién nacidos con sospecha bioquímica de hiperfenilalaninemia, aciduria glutárica tipo I, o en las deficiencias de ACADVL o SLC22A5. La revisión de las pruebas bioquímica de segundo nivel (homocisteína, ácidos orgánicos, pterinas, etc.) y ensayos enzimáticos específicos sugirieron que todos estos casos eran portadores o falsos positivos de cribado. Finalmente, en dos recién nacidos, con una alteración bioquímica persistente y con resultado negativo utilizando el panel de 120 genes, se detectaron por primera vez mutaciones en los genes BCAT2 y SLC7A1 utilizando el exoma clínico. 4 Conclusiones Estos resultados ponen de manifiesto el valor añadido de las pruebas bioquímicas, aplicadas en segundo o tercer nivel, para la interpretación de los análisis genéticos y que la combinación de ambos tipos de pruebas permiten ofrecer un diagnóstico certero C0471 SECUENCIACIÓN MASIVA COMO PRUEBA DE SEGUNDO NIVEL EN PROGRAMAS DE CRIBADO NEONATAL Maria Segura-Puimedon1, Jairo Rodríguez2, Benjamín Rodríguez-Santiago2, María del Amor Bueno-Delgado3, Antonio González-Meneses3, María Jesús Alonso-Ramos4, Isabel Fernández-Carbajal4, Raquel Yahyaoui5, Yolanda González- Irazabal6, Mercedes Espada7, Kontxi Higón7, Lluís Armengol2, Luis Alberto Pérez-Jurado8 1Universitat Pompeu Fabra / qGenomics Espluques de Llobregat (Barcelona) España 2Genomics (Barcelona) España 3Departmento de pediatría, Hospital Universitario Virgen del Rocío (Sevilla) España 4Laboratorio de Enfermedades genéticas y cribado neonatal, Departamento de Genetica Molecular de la Enfermedad, Instituto de Biologìa y Genética Molecular Universidad de Valladolid-CSIC (Valladolid) España 5Cribado neonatal y laboratorio clínico , Hospital regional de Málaga (Málaga) España 6Servicio de Bioquímica Clínica, Hospital Universitario Miguel Servet (Zaragoza) España 7Laboratorio de salud pública, Departamento de Salud del Gobierno Vasco, Parque Tecnológico de Bizkaia (Vizcaya) España 8Unidad de Genética, Universitat Pompeu Fabra / Centro de Investigación Biomédica en Red de Enfermedades Raras (CIBERER) (Barcelona) España 1 Objetivos Los programas de cribado neonatal son programas de salud pública para el diagnóstico e intervención de enfermedades genéticas que, de no ser tratadas, pueden llegar a tener consecuencias clínicas graves. Con el objetivo de reducir falsos positivos, falsos negativos y tiempos de diagnóstico, y facilitar el asesoramiento genético, se ha evaluado el uso de secuenciación masiva como prueba de segundo nivel en estos programas. 2 Material y Método Se han usado muestras de papel de filtro de recién nacidos positivos para el cribado para elaborar librarías de secuenciación masiva. Se ha desarrollado un panel de 71 genes que incluye las enfermedades detectadas por los programas de cribado neonatal y se han identificado variantes raras que pueder ser causantes de enfermedad. Se han analizado 214 muestras de forma retrospectiva para establecer la sensibilidad y especificidad y 362 muestras prospectivas en tiempo real para determinar la utilidad clínica. 3 Resultados Retrospectivamente se han identificado mutaciones bialélicas en un 65,8% de las muestras y mutaciones en un sólo alelo en el 14,4%. De las muestras sin mutaciones identificadas (19,6%), el 76% corresponden a hipotiroidismo. En muestras con diagnóstico genético previo (n=99), la sensibilidad al final del proceso de mejora de los algoritmos de detección fue del 100%. En la fase prospectiva se han detectado mutaciones bialélicas en un 21,8%, únicas en 31,2% y en el 47% de las muestras no se detectaron mutaciones, siendo el 68.8% de estas muestras positivas para fibrosis quística. En esta fase, se ha obtenido una sensibilidad del 100% en muestras de fibrosis quística (n=131) que contaban con diagnóstico genético paralelo. 4 Conclusiones Hemos desarrollado con éxito un panel secuenciación masiva que puede permitir omitir o redirigir las pruebas de confirmación bioquímicas y proporcionar asesoramiento genético temprano en los programas de cribado neonatal. C0165 BASES GENÉTICAS DE ENFERMEDADES NEURODEGENERATIVAS CON ACUMULACIÓN DE HIERRO EN EL CEREBRO Cristina Aisha Tello Vicente1, Vincenzo Lupo2, Alejandra Darling3, Belén Perez Dueñas4, Carmen Espinós2 11. Genética y Genómica de Enfermedades Neuromusculares y Neurodegenerativas, Centro de Investigación Príncipe Felipe (CIPF) Valencia (Valencia) España 21. Genética y Genómica de Enfermedades Neuromusculares y Neurodegenerativas, Centro de Investigación Príncipe Felipe (CIPF), Valencia. 2. Servicio de Genómica y Genética Traslacional, Centro de Investigación Príncipe Felipe (CIPF), Valencia. (Valencia) Valencia 33. Servicio de Neuropediatría, Hospital Sant Joan de Déu (Barcelona) Barcelona 43. Servicio de Neuropediatría, Hospital Sant Joan de Déu y CIBER de Enfermedades Raras (CIBERER), Barcelona. (Barcelona)Barcelona 1 Objetivos Las enfermedades neurodegenerativas con acumulación cerebral de hierro (ENACH) constituyen un grupo heterogéneo de trastornos del movimiento. Clínicamente se caracterizan por dificultades progresivas en el habla, la marcha y la deglución, compartiendo la presencia de depósitos de hierro en los ganglios basales. Se trata de enfermedades hereditarias raras altamente discapacitantes que en la mayoría de ocasiones conducen a muerte en la segunda década de vida. Se conocen diez genes, siendo los más frecuentes PANK2 y PLA2G6; el resto son formas raras. El objetivo principal de esta investigación es la caracterización de las bases moleculares subyacentes en los trastornos ENACH en pacientes españoles. 2 Material y Método El estudio genético comprende: (1) análisis de las regiones codificantes e intrónicas flanqueantes de los genes más frecuentes (PANK2 y PLA2G6) mediante secuenciación Sanger; (2) análisis de grandes deleciones/duplicaciones mediante MLPA (Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification); (3) Panel basado en tecnología SureSelect (Agilent) que comprende 500 genes implicados en trastornos de movimiento: ENACH, ataxia, corea, distonía, parkinson, paroximales, paraparesias espásticas. 3 Resultados De las 96 familias incluidas en la serie clínica, se ha logrado el diagnóstico genético en 41, en quienes se han detectado 30 mutaciones en PANK2 y 11 mutaciones en PLA2G6 (http://espinos.cipf.es/index.php/en/mutations-db). Es de destacar que se ha identificado la mutación PANK2 p.T528M como fundadora en población gitana. Por otra parte, hemos resuelto el caso de unas gemelas monozigóticas portadoras de una mutación en PLA2G6, en quienes se ha detectado una disomía uniparental paterna del cromosoma 22 mediante un array CytoScan® HD(Affymetrix). 4 Conclusiones Se ha logrado el diagnóstico molecular en el 43% de familias. El estudio genético de 16 pacientes ENACH mediante panel de genes implicados en trastornos del movimiento está en marcha. Financiación: Fundació La Marató de la TV3. C0094 DESARROLLO DE ORGANOIDES DE HÍGADO COMO MODELO DE ENFERMEDAD HEPÁTICA EN EL DÉFICIT DE ALFA-1 ANTITRIPSINA Gema Gomez Mariano1, Carolina Epifano2, Nerea Matamala1, Selene Martinez1, María Teresa Martínez3, Meritxell Huch4, Ignacio Perez de Castro2, Beatriz Martinez-Delgado5 1Genetica Molecular. ISCIII (Madrid) España 2Terapia Génica. ISCIII (Madrid) España 3Hospital 12 de Octubre (Madrid) España 4Universidad de Cambridge (Cambridge) Reino Unido 5Instituto de Salud Carlos III Majadahonda (Madrid) España 1 Objetivos Los organoides son sistemas de cultivo in vitro tridimensionales (3D), en los que células madre de tejidos adultos son capaces de auto-organizarse y tras diferentes señales de diferenciación formar estructuras que adquieren el mismo patrón del tejido a desarrollar, imitando a sus homólogos en vivo. Este nuevo sistema de cultivo permite modelar enfermedades y por otro lado estudiar mecanismos y ensayar nuevas estrategias terapéuticas. La Alfa-1 Antitripsina (AAT) se secreta principalmente en el hígado. En el Déficit de AAT la mutación más frecuente y la más importante en la práctica clínica es el alelo Z (Glu342Lys), que causa acumulación de la AAT mutada en los hepatocitos. Sin embargo, los procesos de polimerización y degradación de estas proteínas anómalas no son bien conocidos dada la dificultad de obtención de biopsias hepáticas. 2 Material y Método Hemos establecido las condiciones de cultivo para la generación de organoides de hígado procedentes de pacientes con DAAT y de controles sanos. Hemos analizado mediante western blot la expresión de AAT en los organoides y su capacidad de ser secretada al medio. La capacidad de formación de polímeros de AAT se miró mediante tinción PAS y la expresión de los diferentes transcritos del gen mediante RT-PCR y QT-PCR. 3 Resultados Se está valorando su capacidad de reproducir la enfermedad in vitro, mediante detección de la proteína AAT y análisis de la formación de polímeros de AAT. Además, estos organoides han permitido estudiar la regulación de la expresión y formas de splicing del gen SERPINA1 en el hígado. Por último, hemos usado este modelo experimental para poner a prueba el potencial del editado genético como herramienta terapéutica en esta patología hepática. 4 Conclusiones El establecimiento de organoides de hígado puede ser una herramienta muy útil para investigar los factores que contribuyen a la enfermedad hepática en el DAAT y el ensayo de nuevas terapias. C0156 DETERIORO DE LA FUNCIÓN Y DE LA DINÁMICA MITOCONDRIAL EN LA PATOGÉNESIS DEL FXTAS Laia Rodriguez-Revenga Bodi1, Maria Isabel Alvarez Mora2, Irene Madrigal2, Mariona Guitart Mampel2, Gloria Garrabou2, Montserrat Mila2 1Departamento de Bioquimica y Genética Molecular, Hospital Clinic Barcelona (Barcelona) España 2Hospital Clinic, CIBERER, IDIBAPS (Barcelona) España 1 Objetivos Un tercio de los adultos portadores de la premutación en el gen FMR1 (55-200 repeticiones CGG) desarrollará un trastorno neurodegenerativo de aparición tardía conocido como síndrome de tremor / ataxia asociado a X frágil (FXTAS). La disfunción mitocondrial se ha visto que juega un papel importante en la aparición y desarrollo de varias enfermedades neurodegenerativas como el Parkinson o el Alzheimer. El objetivo de este estudio es proporcionar nuevos conocimientos sobre los mecanismos implicados en la patogénesis de FXTAS mediante la caracterización de la función y dinámica mitocondrial. 2 Material y Método La función mitocondrial ha sido caracterizada mediante la determinación de la capacidad oxidativa de las mitocondrias, el contenido mitocondrial y los niveles de estrés oxidativo en muestras de sangre periférica y fibroblastos de individuos portadores de la premutación en FMR1 con FXTAS y en muestras controles. La dinámica mitocondrial se ha estudiado mediante la determinación de la complejidad de la red mitocondria por microscopia confocal en muestras de fibroblastos de individuos con FXTAS. 3 Resultados En cuanto a la función mitocondrial, encontramos que la capacidad respiratoria mitocondrial está comprometida en los fibroblastos mientras que, en la sangre, no se observaron diferencias entre los grupos FXTAS y control. Además, los fibroblastos de los individuos portadores de la premutación en FMR1 con FXTAS presentaron una alteración significativa de la arquitectura mitocondrial, con mitocondrias más circulares y menos interconectadas. 4 Conclusiones La función y dinámica mitocondrial se encuentran desreguladas en los portadores de la premutación en FMR1 con FXTAS. Estas alteraciones pueden estar limitando el suministro bioenergético de las células, contribuyendo a la patogénesis de la enfermedad. C0281 DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES MITOCONDRIALES MEDIANTE SECUENCIACIÓN MASIVA Dèlia Yubero Siles1, Raquel Montero2, Jose Guerrero2, Paola Pacheco2, Núria Brandi2, Cristina Jou2, Cecilia Jimenez- Mallebrera2, Andrés Nascimento2, Federico Ramos2, Carlos Ortez2, Àngels García-Cazorla2, Judith Armstrong2, Rafael Artuch2 1Hospital Sant Joan de Déu Esplugues de Llobregat (Barcelona), España 2Hospital Sant Joan de Déu (Barcelona), España 1 Objetivos Las enfermedades mitocondriales son entidades genéticas que se caracterizan por una disfunción del sistema de la fosforilación oxidativa. La complejidad de los fenotipos clínicos, así como la falta de especificidad de los biomarcadores existentes asociados a alteración mitocondrial, denotan la importancia del diagnóstico genético, siendo la secuenciación masiva (NGS) de gran utilidad para abordar este grupo de enfermedades. Nuestro objetivo ha sido evaluar la eficacia de distintas metodologías de NGS para el diagnóstico, así como estimar la efectividad diagnósticade los biomarcadores clásicos de enfermedad mitocondrial. 2 Material y Método Se ha estudiado una serie de 78 pacientes con sospecha de enfermedad mitocondrial (criterios de Morava), con datos clínicos y bioquímicos disponibles. El análisis genético se ha realizado mediante paneles génicos dirigidos de diseño propio (HaloPlex, Agilent), de diseño comercial (TruSightOne (TSO), Illumina), y secuenciación de exoma (WES) y genoma (WGS). Se ha valorado la patogenicidad siguiendo las recomendaciones y guías de la ACMG y la AEGH. 3 Resultados La efectividad diagnóstica en nuestra cohorte es del 39%, siendo mayor en los pacientes estudiados con TSO, WES o WGS (40%), mientras que para los estudios con paneles resulta menor (35%). Curiosamente, las mutaciones halladas en el 32% de los pacientes diagnosticados son en genes no mitocondriales. No se observa una asociación clara entre alteración de marcadores mitocondriales y diagnóstico. 4 Conclusiones El algoritmo diagnóstico de las enfermedades mitocondriales debería consolidarse como algo más práctico y resolutivo. Un porcentaje importante de los pacientes son de etiología no mitocondrial, lo cual puede explicar la tasa diagnóstica, ya que la mayoría de los pacientes han sido evaluados mediante aproximaciones menos codiciosas. En el ámbito hospitalario es básico encontrar el equilibrio entre practicidad, eficacia y rapidez, siendo el grado de resolución adecuado un enfoque más amplio como el TruSightOne o incluso la secuenciación de exoma. Sesión: Cardiogenética C0146 ABORDAJE MULTIDISCIPLINAR DE LA MUERTE SÚBITA CARDIACA: EXPERIENCIA DE LA UNIDAD DE CARDIOGENÉTICA. Rosa Riveiro-Álvarez1, Miguel-Angel Lopez-Martinez1, Pepa Sánchez-Borque2, Ángel L. Miracle2, Olga Carvajal del Castillo3, Mª José Calero-Rueda2, Nieves Domínguez-Garrido3, Ana Bustamante-Aragonés1, Jesús Gallego-Merlo1, Camilo Vélez-Monsalve1, Carmen Ayuso1, Isabel Lorda-Sánchez1, Jerónimo Farré2, José Manuel Rubio2, Mª José Trujillo-Tiebas1 1Servicio de Genetica. H.U. Fundacion Jimenez Diaz Madrid (Madrid) España 2Servicio de Cardiología. H.U. Fundación Jiménez Díaz (Madrid) España 3Servicio de Pediatría. H.U. Rey Juan Carlos. (Madrid) España 1 Objetivos La muerte súbita cardiaca (MSC) se define como un fallecimiento natural e inesperado que tiene lugar durante la primera hora tras el comienzo de los síntomas. Existen dos grupos de enfermedades asociadas a MSC que pueden presentar una etiología genética: las cardiopatías estructurales o miocardiopatías y las cardiopatías arritmogénicas o canalopatías. Este trabajo recoge 4 años de experiencia en el diagnóstico genético posnatal, preimplantatorio (DGP) y post-mórtem de estas patologías. 2 Material y Método Se realizaron pruebas diagnósticas a 198 pacientes con miocardiopatías y canalopatías, procedentes de los servicios de Cardiología, Pediatría y Ginecología y Obstetricia, así como estudios predictivos a sus respectivos familiares. Asimismo, se realizó una autopsia molecular en un caso de muerte súbita intrahospitalaria. El abordaje molecular incluyó secuenciación de última generación -panel de genes vs. exoma clínico-, identificación de deleciones o duplicaciones -aCGH- y estudios familiares de informatividad -marcadores microsatélites- en parejas que solicitaron DGP. 3 Resultados En total, se estudiaron 198 casos -71 síndromes arritmogénicos y 127 cardiopatías estructurales-, de los cuales se diagnosticaron 137 (137/198; 69,2%). El uso del exoma clínico en lugar del panel de genes no incrementó dicha tasa de detección. En 4 casos con síndrome de QT largo se identificaron mutaciones en genes que codifican proteínas estructurales. Por último, 3 pacientes con mutación identificada en los genes TNNT2, DSP y MHY7 solicitaron un diagnóstico genético preimplantatorio. 4 Conclusiones El presente estudio ha mostrado una mayor prevalencia de las cardiopatías estructurales frente a los trastornos del ritmo, identificando los genes responsables, su espectro mutacional y permitiendo la reclasificación clínica de algunos casos. El abordaje mediante un panel de genes se plantea como primera herramienta diagnóstica por su elevada tasa de detección de mutaciones, ya que proporciona opciones preventivas, terapéuticas y reproductivas para los pacientes, y permite establecer un diagnóstico diferencial frente a otras patologías. C0461 DISEÑO Y APLICACIÓN DE UN PANEL DE SECUENCIACIÓN MASIVA (NGS) PARA EL ESTUDIO DE LA HIPERTENSIÓN ARTERIAL PULMONAR (HAP): PANEL_HAP_V1.2. Jair Tenorio1, Natalia Gallego1, Pedro Arias Lajara2, Paula Navas3, Carlos Andrés Quezada3, Angela Del Pozo1, Kristina Ibañez1, Juan Carlos Silla1, Julián Palomino3, Nuria Ochoa Parra3, Ignacio Hernández González3, Gema Gordo1, Irene Dapía1, Pilar Escribano4, Pablo Lapunzina1 1Instituto de Genética Médica y Molecular (INGEMM). Instituto de Investigación Hospital Universitario La Paz (IdiPAZ), CIBERER, Centro de Investigación en Red de Enfermedades Raras, ISCIII, (Madrid) España 2Instituto de Genética Médica y Molecular (INGEMM) H. Universitario La Paz. CIBERER, Laboratorio de Sobrecrecimiento Madrid (Madrid) España 3Unidad multidisciplinar de Hipertensión Pulmonar, Servicio de cardiología, Hospital Universitario 12 de Octubre. (Madrid) España 4Unidad multidisciplinar de Hipertensión Pulmonar, Servicio de cardiología, Hospital Universitario 12 de Octubre. (Madrid) España 1 Objetivos La hipertensión arterial pulmonar (HAP) es una enfermedad infrecuente de pronóstico ominoso en ausencia de tratamiento. La HAP puede presentarse en diferentes formas, entre ellas la HAP idiopática (HAPI), hereditaria (HAPH) y una forma más grave denominada veno-oclusiva. Gracias a la secuenciación masiva, se han descrito una elevada cantidad de genes relacionados con la HAP en los últimos años. Así, se seleccionó una cohorte de 168 pacientes con HAPI, HAPH o veno-oclusiva, para la realización de un panel de genes relacionados con HAP, tanto genes ya descritos en la literatura como genes candidatos propuestos por otros grupos. 2 Material y Método Se han seleccionado los pacientes del proyecto multicéntrico de HAP. Se ha diseñado un panel de genes mediante la plataforma Nimbledesign de Roche, captura SeqCap EZ, genoma de referencia hg19, análisis bioinformático mediante un script propio y análisis de datos mediante diferentes herramientas bioinformáticas. 3 Resultados Tras el análisis bioinformático se encontró un 20% de pacientes con mutaciones patogénicas y un 5,8% de variantes de significado incierto. Un 8,3% de las muestras se rechazaron tras el análisis de los parámetros de calidad establecidos. 4 Conclusiones Las mutaciones encontradas en HAP en la cohorte de pacientes analizada demuestran la elevada variabilidad genética de esta enfermedad. Además, se encontraron dos variantes en un mismo paciente, ambas relacionadas con HAP, cuyo análisis in silico demuestra la posible patogenicidad de ambas. Una variante en BMPR2, c.961C>T; p.Arg321*) ya descrita previamente y otra variante en un gen que codifica un canal de potasio y que se ha relacionado en estudios de NGS con HAP. Este hecho podría demostrar por primera vez la existencia de dos mutaciones en un paciente con HAP, lo que podría abrir la posibilidad de la existencia de herencia digénica en la HAP, un hecho que no se había planteado hasta el momento. C0057 MUERTE SÚBITA ASOCIADA A DEFECTOS GENÉTICOS CARDIOCEREBRALES EN PACIENTES CON EPILEPSIA Mònica Coll Vidal, Anna Fernández Falgueras, Oscar Campuzano Larrea, Jesús Matés Ramírez, Bernat Del Olmo Cabestré, Irene Mademont Soler, Alexandra Pérez Serra, Ferran Picó Micaló, Ramon Brugada Terradellas Centro de Genética Cardiovascular (Girona) España 1 Objetivos Se ha descrito que las canalopatías de origen genéticopueden contribuir tanto en la epilepsia como en la enfermedad cardíaca para incrementar la incidencia de arritmias letales. La muerte súbita inesperada en individuos con epilepsia, también conocida como SUDEP, representa hasta el 20% de todas las muertes en pacientes con epilepsia. El mecanismo fisiopatológico que subyace a SUDEP aún no está identificado. 2 Material y Método Se desarrolló un panel de re-secuenciación con genes relacionados con epilepsia y canalopatías. Se analizaron 22 casos de SUDEP mediante tecnología de ultra secuenciación para identificar posibles variantes genéticas que pudieran explicar la causa de la muerte súbita. 3 Resultados Se identificaron 58 variantes raras en 20 de los 22 casos estudiados. Se detectaron 2 variantes en número de copias (una deleción y una duplicación de un exón completo), 6 inserciones/deleciones, 3 variantes intrónicas y 47 variantes missense. El estudio de segregación familiar fue posible en 10 de los 20 casos. De las 30 variantes raras identificadas en los casos con familia disponible, 8 variantes mostraron segregación familiar en los genes KCNQ1, CDKL5, CNTNAP2, TSC1, GRIN2A, ADGRV1, KCNQ2 y HTR5A. Se observópenetrancia incompleta en 11 variantes yno mostraron segregación familiar otras 11 variantes diferentes. Una de las familias estaba clínicamente diagnosticada tanto de epilepsia como el síndrome de QT largo. Gracias al estudio genético, se identificó una deleción del exón 2 en el gen KCNQ1 que segregaba con el síndrome de QT largo y una variante en CDKL5 que segregaba con la epilepsia. 4 Conclusiones Nuestro estudio da soporte al concepto de una canalopatía cardiocerebral determinada genéticamente. La identificación de estos factores genéticos de predisposición a muerte súbita en pacientes con epilepsia ayudaría a la toma de medidas de prevención de episodios que pueden desencadenar en una muerte súbita. C0058 MUTACIONES DESMOSÓMICAS EN CORAZÓN ESTRUCTURALMENTE NORMAL PREDISPONEN A MIOCARDITIS Y MUERTE SÚBITA Anna Fernández Falgueras1, Oscar Campuzano Larrea1, Georgia Sarquella Brugada2, Carles Ferrer Costa3, Alexandra Pérez Serra1, Mònica Coll Vidal1, Irene Mademont Soler1, Ferran Picó Micaló1, Jesús Matés Ramírez1, Bernat Del Olmo Cabestré1, Anna Iglesias Muñoz1, Josep Castellà Garcia4, Josep Brugada Terradellas5, Ramon Brugada Terradellas1 1Centro de Genética Cardiovascular (Girona) España 2Hospital Sant Joan de Déu (Barcelona) España 3Gendiag-Ferrer (Barcelona) España 4Instituto de Medicina Legal de Catalunya (Barcelona) España 5Hospital Clínic (Barcelona) España 1 Objetivos La miocarditis es una inflamación del tejido miocárdico, cuyas manifestaciones clínicas pueden ir desde casos asintomáticos hasta muerte súbita cardíaca. Nos planteamos estudiar si mutaciones genéticas en proteínas desmosomales pueden predisponer a miocarditis fulminante y a muerte súbita en corazón normal. 2 Material y Método Alteraciones genéticas en las proteínas desmosómicas están asociadas a cardiomiopatía arritmogénica, patología en la cual los miocitos se sustituyen por tejido fibro-adiposo, causando arritmias y muerte súbita. En nuestro estudio evaluamos 3 muestras post-mortem de jóvenes fallecidos repentinamente con un diagnóstico forense de miocarditis fulminante, sin otras alteraciones cardíacas estructurales en la autopsia. En estos casos realizamos estudio genético por ultrasecuenciación de los principales genes asociados a muerte súbita cardíaca. 3 Resultados Identificamos en todos ellos mutaciones desmosomales asociadas a cardiomiopatía arritmogénica. Se realizó evaluación clínica y genética en los familiares de los 3 casos índices. En dos de las familias se confirmó segregación familiar de las variantes genéticas con patología cardíaca y se tomaron medidas preventivas que incluyeron el tratamiento farmacológico y la implantación de un desfibrilador automático. 4 Conclusiones Nuestros resultados sugieren que las alteraciones genéticas desmosomales pueden causar un miocardio vulnerable, propenso a inflamación por agentes externos. La investigación de los familiares portadores es esencial para identificar los familiares portadores de las variantes genéticas, para adoptar mecanismos de prevención. C0073 MUTACIÓN FUNDADORA EN MYBPC3 COMO EJEMPLO DE HETEROGENEIDAD ALÉLICA. Rebeca Lorca1, Juan Gómez2, Juilian Rodirguez Reguero2, María Martín2, Juan Calvo2, Rubén Cabanillas3, César Morís3, Eliecer Coto2 1Hospital Universitario Central de Asturias Oviedo (Asturias) España 2HUCA (Oviedo) España 3IMOMA (Asturias) España 1 Objetivos La miocardiopatía hipertrófica (MCH) es la enfermedad genética cardiaca más común, con herencia autosómico dominante y penetrancia variable. La mutación en MYBPC3 (gen más frecuentemente mutado) c.787G>T (G263X) introduce un codón de parada prematuro causando una proteína truncada. Fue reportada como mutación autóctona en Asturias y no ha sido reportada en otras regiones del mundo, por lo que se pretende actualizar su fenotipo. 2 Material y Método Se realizaron estudios genéticos mediante secuenciación de nueva generación(NGS) en el caso índice y secuenciación directa en familiares. El diagnóstico de MCH se realizó con grosores de pared del ventrículo izquierdo (LVWT) ≥15 mm (13 mm en familiares), no explicable por otras causas. 3 Resultados Se identificaron 38 portadores: 34 cumplen criterios de MCH (90% de penetrancia, 97% en mayores de 40 años). 59% de los pacientes fueron diagnosticados asintomáticos, siendo la disnea el síntoma más común (29%), seguida del síncope (18%) y angor (9%). El 26.5% presentaron taquicardias ventriculares no sostenidas. El LVWT promedio fue de 20mm y sólo el 15% presentó obstrucción significativa del tracto de salida del ventrículo izquierdo. En 2 pacientes el fenotipo de MCH coexistía con el de miocardiopatía no compactada (MCH+MCNC). De los 3 accidentes cerebrovasculares diagnosticados en la cohorte, 2 presentaban MCH+MCNC. 6 pacientes tenían SCORE de alto riesgo de muerte súbita y 3 moderado, siendo el SCORE medio de bajo riesgo (3%). 4 Conclusiones MYBPC3 G263X es mutación autóctona con una alta penetrancia que llega al 97% en más de 40 años de edad. En general, tiene un perfil de riesgo de MS bajo, aunque el 26.5% tienen moderado-alto riesgo. Esta mutación representa un ejemplo de heterogeneidad alélica con expresión fenotípica variable (MCH y MCNC), planteando la posibilidad de que ambas miocardiopatías formen parte de un mismo espectro fenotípico. C0122 EL PAPEL DE LAS VARIACIONES GENÉTICAS EN NÚMERO DE COPIAS EN LA ETIOLOGÍA DE LA MUERTE CARDIACA SÚBITA Jesús Matés Ramírez1, Anna Fernández Falgueras1, Carles Ferrer Costa2, Bernat Del Olmo Cabestré1, Alexandra Pérez Serra1, Mònica Coll Vidal1, Irene Mademont Soler1, Ferran Picó Micaló1, Anna Iglesias Muñoz1, Georgia Sarquella Brugada3, Josep Brugada Terradellas1, Oscar Campuzano Larrea1, Ramon Brugada Terradellas1 1Centro de Genética Cardiovascular (Girona) España 2Gendiag-Ferrer (Barcelona) España 3Hospital Sant Joan de Déu (Barcelona) España 1 Objetivos El papel patogénico de las alteraciones genéticas en número de copias (CNVs) en las enfermedades cardíacas asociadas a muerte súbita es un campo que ha sido poco estudiado. Los estudios publicados hasta el momento, no incluyen grandes cohortes de pacientes o se han limitado a pocos genes lo cual no permite establecer la prevalencia real de tales mutaciones en estas patologías. 2 Material y Método Se analizaron un total de 1765 pacientes europeos (587 post-mortem y 1178 muestras de pacientes). El análisis genético de los 78 genes principales asociados a MSC se llevó a cabo utilizando tecnología de ultrasecuenciación. Se utilizó un algoritmo bioinformático para la detección de CNVs utilizandoNGS. Estas alteraciones fueron confirmadas por MLPA o Q-PCR. 3 Resultados Se identificaron 36 pacientes (2%) portadores de CNVs (7 post-mortem y 29 muestras de pacientes: 8 con algún tipo de canalopatía y 21 con miocardiopatía). A pesar de la baja prevalencia, en el 40% de los casos, este hallazgo podría llevar a establecer la causalidad de la patología, ya que en estos pacientes, no se detectaron otro tipo de variantes (ausencia de SNVs/indels) que pudiesen explicar la enfermedad. Este es el caso de una paciente con SQTL e historia de MSI en una hija de 10 días. El análisis de SNVs e indels no permitió identificar la causa genética. No obstante, el análisis de CNVs identificó una deleción de 2 exones en KCNQ1. 4 Conclusiones Nuestros resultados apoyan la aplicación de análisis de CNVs en patologías arritmogénicas cardíacas así como en muestras post-mortem sin causa evidente de muerte tras la autopsia. La identificación de este tipo de variantes genéticas, junto con la identificación de SNVs permitirá no sólo identificar la etiología de estas muertes repentinas sino también realizar una mejor evaluación clínica, asesoramiento genético y toma de medidas preventivas tanto en individuos diagnosticados como en sus familiares. Sesión: Cáncer hereditario y familiar C0021 DESCUBRIMIENTO DE UN NUEVO GEN INVOLUCRADO EN SUSCEPTIBILIDAD A CÁNCER DE MAMA Jordi Surrallés Calonge1, Gonzalo Hernández2, Mª José Ramírez2, Jordi Minguillón2, Paco Quiles3, Gorka Ruíz De Garibay4, Roser Pujol2, Rosario Prados Carvajal5, Sara Gutiérrez Enríquez6, Javier Benítez7, Joan Brunet8, Pablo Huertas6, Xose S. Puente9, Conxi Lázaro3, Miguel Angel Pujana10 1Universidad Autónoma de Barcelona. Departamento de Genética y de Microbiología Bellaterra. Cerdanyola del Vallès) (Barcelona) España 2Department of Genetics and Microbiology, Universitat Autònoma de Barcelona, Bellaterra, and Centro de Investigación Biomédica en Red de Enfermedades Raras (CIBERER) (Barcelona) España 3Hereditary Cancer Programme, Catalan Institute of Oncology (ICO), Bellvitge Institute for Biomedical Research (IDIBELL), (Barcelona) España 4Breast Cancer and Systems Biology Laboratory, Program Against Cancer Therapeutic Resistance (ProCURE), ICO, IDIBELL, (Barcelona) España 5Centro Andaluz de Biología Molecular y Medicina Regenerativa (CABIMER) and Departamento de Genética, Universidad de Sevilla (Sevilla) España 6Oncogenetics Group, Vall d´Hebron Institute of Oncology (VHIO), (Barcelona) España 7Human Cancer Genetics Program, Spanish National Cancer Research Centre (CNIO), (Madrid) España 8Hereditary Cancer Programme, ICO, Girona Biomedical Research Institute (IDIBGI) (Girona) España 9Department of Biochemistry and Molecular Biology, Instituto Universitario de Oncología, Universidad de Oviedo (Oviedo) España 10Hereditary Cancer Programme, Catalan Institute of Oncology (ICO), Bellvitge Institute for Biomedical Research (IDIBELL),3Breast Cancer and Systems Biology Laboratory, Program Against Cancer Therapeutic Resistance (ProCURE), ICO, IDIBELL (Barcelona) España 1 Objetivos Mutaciones germinales en BRCA1/2 y BRIP1 están asociadas con elevado riesgo de aparición de tumores de mama y de ovario. No obstante, no se conocen al completo los reguladores de estos fenómenos y la mayoría de casos de cáncer de mama familiar no están genéticamente asignados a un gen. Nuestro objetivo es expandir este conocimiento e identificar nuevos genes involucrados en cáncer de mama hereditario. 2 Material y Método En el ensayo del doble híbrido se usó como cebo a TOPBP1, conocida por su papel en reparación del ADN y que interacciona con BRCA1. El papel de EDC4 en reparación se estudió mediante RNAi y KO usando CRISPR/Cas9. Todos los exones de pacientes con cáncer de mama sin mutaciones en BRCA1/2 se secuenciaron. La patogenicidad de las mutaciones se estudió mediante complementación usando partículas lentivirales en una línea EDC4 deficiente. 3 Resultados Identificamos a EDC4 como un nuevo interactor tanto de TOPBP1 como de BRCA1. La perdida de EDC4 conlleva una hipersensibilidad a agentes que causan enlace cruzados (EC), fragilidad cromosómica y deficiencia en reparación mediante RH. Similar a BRCA1, EDC4 regula la reparación promoviendo la resección de las dobles roturas y permitiendo la carga de RPA y de RAD51 en el ssADN. Consistente con estas deficiencias, células sin EDC4 son hipersensibles a inhibidores de la PARP. Encontramos 6 mutaciones de cambio de sentido en EDC4 en 427 pacientes sin mutaciones en BRCA1/2, una frecuencia mucho más alta que en la población general. 5 de ellas se analizaron funcionalmente y se observó que eran patogénicas. Observamos una LOH del locus de EDC4 en uno de los tumores analizados. 4 Conclusiones Identificamos a EDC4 como la primera proteína de P-body involucrada en reparación de ADN. Mutaciones germinales en EDC4 contribuyen a la susceptibilidad de cáncer de mama. Por ello proponemos BRCAP (BRCA y P-body) como un alias para EDC4. C0212 LA INCORPORACIÓN DE PANEL DE GENES MEJORA EL DIAGNÓSTICO GENÉTICO EN CÁNCER DE MAMA/OVARIO HEREDITARIOS Ana Blanco Pérez1, Marta Santamariña Pena2, Sandra Filippini Blanco Perez3, Belinda Rodriguez Lage4, Pablo Raña Díez3, Uxía Esperón Moldes2, Ana Vega Gliemmo6 1Fundación Ramón Domínguez, Grupo de Medicina Xenómica-Universidade de Santiago de Compostela, CIBERER, Instituto de Investigaciones Sanitarias de Santiago Santiago de Compostela (A Coruña) España 2Grupo de Medicina Xenómica-Universidade de Santiago de Compostela, CIBERER, Instituto de Investigaciones Sanitarias de Santiago (Santiago de Compostela) España 3Fundación Pública Galega de Medicina Xenómica-Servicio Galego de Saúde, Grupo de Medicina Xenómica- Universidade de Santiago de Compostela (Santiago de Compostela) España 4Fundación Ramón Domínguez, Instituto de Investigaciones Sanitarias de Santiago (Santiago de Compostela) España 6Fundación Pública Galega de Medicina Xenómica-Servicio Galego de Saúde, Grupo de Medicina Xenómica- Universidade de Santiago de Compostela, CIBERER, Instituto de Investigaciones Sanitarias de Santiago (Santiago de Compostela) España 1 Objetivos Las variantes patogénicas en BRCA1 y BRCA2 sólo se identifican en el 20-40% de las familias de alto riesgo; más del 60% de la predisposición hereditaria en CMOH no parece estar asociada a estos genes. En la última década con el objetivo de buscar otras causas genéticas para CMOH, varios genes de alto y moderado riesgo fueron identificados. Las nuevas tecnologías de secuenciación NGS están teniendo gran impacto sobre los avances en genómica y en medicina personalizada. La secuenciación NGS permite la captura específica y secuenciación masiva en paralelo de muchos genes con alta cobertura. Este es un escenario adecuado para la aplicación de un panel multigénico diagnóstico de CMOH, al ser posible la inclusión en un único experimento de todos los genes que puedan estar implicados con el desarrollo de la enfermedad. El objetivo principal de nuestro trabajo es valorar la sensibilidad diagnóstica de la implementación de nuevos genes 2 Material y Método En nuestro laboratorio hemos desarrollado un panel multigénico de 14 genes implicados en cáncer de CMOH y lo hemos incorporado a la rutina diagnóstica. Los genes incluidos son: BRCA1, BRCA2, BRIP1, CDH1, CHEK2, MLH1, MSH2, MSH6, PALB2, PTEN, RAD51C, RAD51D, STK11, TP53. 3 Resultados A día de hoy hemos analizado más de 500 familias e identificado variantes patogénicas en distintos genes, entre los que destacan: CHECK2, PALB2, RAD51C, RAD51D, STK11 y TP53. Estos resultados han sido de gran utilidad para los pacientes y sus familias. 4 Conclusiones Las pruebas de panel NGS que permiten el análisis simultáneo de genes de elevada penetrancia han incrementado la sensibilidadde la prueba diagnóstica para cáncer de mama/ovario hereditarios. C0307 IMPLEMENTACIÓN DE UN PROGRAMA DE MEDICINA DE PRECISIÓN EN ONCOLOGÍA PEDIÁTRICA. RESULTADOS DE UN ESTUDIO PILOTO Cristina Robledo Montero1, Carlos Rodríguez-Martín*2, Gema Gómez-Mariano2, Ana Sastre3, Jose Juan Pozo- Kreilinger4, Cristina Mata5, Jorge Huerta5, Manuel Ramírez6, Daniel Azorín7, Javier Alonso8 1Unidad de Tumores Sólidos Infantiles. Instituto de Investigación de Enfermedades Raras, Instituto de Salud Carlos III Majadahonda (MADRID) España 2Servicio de Diagnóstico Genético. Instituto de Investigación de Enfermedades Raras, ISCIII (Madrid) España 3Servicio de Hemato-Oncología Pediátrica. Hospital Universitario La Paz (Madrid) España 4Servicio de Anatomía Patológica. Hospital Universitario La Paz (Madrid) España 5Sección de Oncohematología infantil, Servicio de pediatría. Hospital General Universitario Gregorio Marañón (Madrid) España 6Servicio de Oncología, Hospital Universitario Niño Jesús (Madrid) España 7Servicio de Anatomía Patológica, Hospital Universitario Niño Jesús (Madrid) España 8Unidad de Tumores Sólidos Infantiles. Instituto de Investigación de Enfermedades Raras, ISCIII (Madrid) España 1 Objetivos Evaluar la utilidad de la secuenciación masiva para caracterizar las alteraciones genéticas tumorales presentes en pacientes con cáncer infantil y valorar, en el contexto de un equipo multidisciplinar, la utilidad diagnóstica, pronóstica y terapéutica de las alteraciones identificadas en tres servicios de referencia en oncología pediátrica. 2 Material y Método La caracterización genética de las muestras tumorales se llevó a cabo con un panel comercial de 160 genes frecuentemente mutados en cáncer, y que incluía la mayoría de los genes diana que disponen de una terapia biológica asociada (GeneRead_Comprehensive_Cancer, Qiagen). Hasta el momento se han estudiado un total de 34 pacientes diagnosticados con diferentes tipos de cáncer infantil: 19 Leucemias, 8 Sarcomas y 7 otros tumores. 3 Resultados El 53% de los pacientes presentaron mutaciones en alguno de los genes analizados (18/34). Se detectaron un total de 43 mutaciones. Los genes más frecuentemente mutados fueron KRAS (5/43), TP53 (4/43), NRAS (3/43) y PTEN (3/43). La mutación p.G12D en KRAS se encontró en tres pacientes. Varias de las alteraciones identificadas disponen de terapias biológicas asociadas (p. ej. Everolimus (PIK3CA, PTEN); Trametinib (NRAS/KRAS); Trastuzumab (ERBB2); Sorafenib (FLT3)). La identificación de una mutación en CTNNB1 en un paciente contribuyó a confirmar su diagnóstico como fascitis craneal. Un paciente fue portador de una mutación constitucional en DICER1 lo que contribuyó a caracterizar el síndrome asociado. 4 Conclusiones Los resultados obtenidos en este estudio piloto llevado a cabo en tres servicios de referencia en oncología pediátrica demuestran que la caracterización genética de tumores infantiles mediante técnicas de secuenciación masiva es de utilidad también en el contexto del cáncer infantil, permitiendo identificar alteraciones con valor diagnóstico, pronóstico y terapéutico, abriendo la puerta a la utilización de fármacos biológicos dirigidos en los tumores refractarios. Este trabajo ha sido financiado por la Fundación Sonrisa de Alex, La Hucha de Tomás-ASION y la Asociación Pablo Ugarte. C0523 INCREMENTO DEL RENDIMIENTO DIAGNÓSTICO MEDIANTE EL USO DE UN PANEL DE GENES RELACIONADOS CON EL CÁNCER HEREDITARIO Lidia Feliubadaló Elorza1, Elisabeth Castellanos Pérez2, Bernat Gel Moreno2, Eduard Serra Arenas2 1Programa de Cáncer Hereditario-CIBERONC, Institut Catala d Oncologia (ICO-IDIBELL) L Hospitalet de Llobregat (Barcelona) España 2Programa de Cáncer Hereditario-CIBERONC, The Institute for Health Science Research Germans Trias i Pujol (IGTP) - IMPPC, Can Ruti Biomedical Campus, Badalona (Barcelona) España 1 Objetivos Implantación en la rutina diagnóstica de un panel de genes de predisposición al cáncer hereditario. Evaluación de su rendimiento. 2 Material y Método Análisis de 411 pacientes con sospecha clínica de predisposición hereditaria al cáncer, mediante secuenciación masiva (MiSeq-Illumina)de un panel de diseño propio I2HCP (SureSelect-Agilent) que contiene 122 genes (1,2). El análisis se ha dividido en dos fases. En la fase diagnóstica se han seleccionado diversos subconjuntos de genes dependiendo de la categorización clínica de los pacientes. En la fase de investigación se han analizado todos los genes del panel. 3 Resultados A nivel diagnóstico se han identificado 85 mutaciones patogénicas en 82 pacientes (20,0%); con el algoritmo previo al uso del panel se hubiesen detectado 68 mutaciones patogénicas en 66 pacientes (16,1%). Adicionalmente, se han detectado 282 variantes de significado desconocido en los genes estudiados a nivel diagnóstico. En el marco de investigación, se han identificado mutaciones putativamente patogénicas en genes no contemplados inicialmente según la historia personal/familiar (47; 11,4%). Además se ha obtenido una visión panorámica del espectro mutacional de los pacientes en el conjunto de genes del panel, que se valorarán como posibles genes modificadores en nuestra cohorte. Por último, cabe destacar que se han detectado 12 (2,9%) pacientes portadores de más de una mutación patogénica, confirmando la existencia de pacientes con el denominado síndrome MINAS (Multilocus Inherited Neoplasia Alleles). 4 Conclusiones La estrategia empleada ha permitido aumentar el rendimiento diagnóstico, mejorando el manejo clínico de los pacientes así como profundizar en el conocimiento de las bases genéticas del cáncer hereditario. La clasificación clínica de las VSD identificadas es uno de los principales retos del uso de paneles. (1,2) Castellanos et al. y Feliubadaló et al. Scientific Reports, 2017-Jan 4;7 Financiación: Instituto de Salud Carlos III-FEDER (PI13/00285, PI16/00563, PIE13/00022, RD12/0036/0031), Govern Catalunya (2014SGR338), Asociación Española Contra el Cáncer. C0524 CÁNCER FAMILIAR PAPILAR DE TIROIDES: IDENTIFICACIÓN DE DEFECTOS GENÉTICOS HEREDITARIOS A TRAVÉS DE UN PANEL DIRIGIDO DE NGS. Paula Jiménez García1, Rajdee de Randamie2, Sergio Donnay3, Rita María Regojo4, Gabriel Ángel Martos5, Ángela del Pozo6, Julián Nevado7, Elena Vallespín7, Jesús Argente8, David Hardisson9, José Carlos Moreno10 1INGEMM Hospital La Paz Madrid (Madrid) España 2Laboratorio Molecular de Tiroides, INGEMM, Hospital La Paz (Madrid) España 3Endocrinología, Hospital de Alcorcón (Madrid) España 4Departamento de Anatomía Patológica, Hospital La Paz, (Madrid) España 5Endocrinología, Hospital del Niño Jesús (Madrid) España 6Bioinformática, INGEMM, Hospital La Paz (Madrid) España 7Genómica Estructural y Funcional. INGEMM. Hospital La Paz (Madrid) España 8Pediatría. Hospital del Niño Jesús.. Profesor asociado de la Universidad Autónoma de Madrid (Madrid) España 9Departamento de Anatomía Patológica, Hospital La Paz,. Profesor Asociado de la Universidad Autónoma de Madrid (Madrid) España 10Laboratorio Molecular de Tiroides, INGEMM, Hospital La Paz. Profesor Asociado de la Universidad Autónoma de Madrid (Madrid) España 1 Objetivos Introducción: El carcinoma papilar de tiroides (CPT) es la neoplasia endocrina más frecuente. Es normalmente esporádico, pero el 9% de casos se presenta en agrupamiento familiar (CFPT), sugiriendo la existencia de una susceptibilidad genética hereditaria. Objetivo: Identificar genes involucrados en la susceptibilidad hereditaria al CFPT. 2 Material y Método Pacientes y métodos: Secuenciación del ADN germinal de una cohorte de 10 pacientes índice con CFPT en el panel NGS TiroseqV.1 de diseño propio dirigido de 320 genes tiroideos (Illumina, NextSeq500). Filtrado de variantes por frecuencia poblacional <1%y alta predicción de patogenicidad in silico. Confirmación de variantes por PCR y Sanger. Segregación fenotípica de variantes en familiares afectos y no afectos. 3 Resultados Resultados: En 10 familias se identificaron un total de 22 variantes candidatas en 18 genes (IDH2, GLIS3, LPCAT2, TPO, GRASP, AFAP1L2, NOTCH1, EIF3A, ZHFX3, SECISBP2, PLCB1, UBR1, TSC2, PDE8B, TG, NRG1, NCOA3, FOXE1). 6/8 variantes estudiadas no segregaban con el fenotipo CPT en los pedigríes. Sin embargo, 2 mutaciones missense en heterocigosis en los genes PLCB1 y EIF3A, segregaron con CFPT. La mutación en fosfolipasa C Beta 1 (PLCB1) (c.C3347T, p.A1116V), con MAF de 0,03%, está presente en 5 pacientes de 2 generaciones y ausente en 2 sanos. Se localiza en el dominio funcional para interacción con las subunidades de Gα. En EIF3A, la mutación c.3136C>T (R1046W), con MAF de 0,2%, cosegrega con CPT en otra familia, presentándose en 2/2 pacientes de 2 generaciones y ausente en cónyuges sanos. 4 Conclusiones Conclusiones: La NGS dirigida a un número amplio de genes puede ser alternativa útil y más barata que el exoma para el gene-finding. Dos variantes hereditarias raras en PLBC1 y EIF3, ambos implicados en control de ciclo celular y proliferación, representan candidatos plausibles de susceptibilidad al CPFT que han de sustanciarse en ensayos funcionales in vitro en la siguiente fase del estudio. C0113 MUTACIONES GERMINALES EN RB1 Y OSTEOSARCOMAGÉNESIS. EL MANTENIMIENTO DE LA ARQUITECTURA TELOMÉRICA COMO PUNTO CRÍTICO EN LA INICIACIÓN DE PROCESOS CARCINOGÉNICOS Iria Gonzalez Vasconcellos1, Isidoro Lopez Baltar1, Montserrat Rodríguez Pedreira1, Alejandro Mosquera Rey1, Natasa Anastasov2, Michael Rosemann2, Michael Atkinson2, Jose Luis Fernández García1 1Departamento de Genética. Hospital Teresa Herrera A Coruña (A Coruña) España 2Institute of Radiation Biology, Helmholtz Zentrum München, (Baviera) Alemania 1 Objetivos Las mutaciones germinales del gen supresor de tumores RB1 predisponen a osteosarcomas espontáneos y radioinducidos en humanos y modelos de ratón. El objetivo de este estudio es ahondar en el mecanismo por el que las mutaciones en Rb1 predisponen a osteosarcoma. 2 Material y Método Se utilizaron osteoblastos primarios wild-type (Rb1+/+) y haploinsuficientes en Rb1 (Rb1+/Δ19), obtenidos mediante el sistema Cre-LoxP con diana en el exón 19, y la línea humana U2OS. Se emplearon técnicas citogenéticas, FISH telomérico de ADN y ARN, western-blot, citometría de flujo, PCR cuantitativa, infecciones lentivirales y transfecciones, ensayos de actividad promotora, ensayos ChIP y ensayo TCCA de compactación de cromatina telomérica. 3 Resultados Los osteoblastos Rb1+/Δ19 presentaron inestabilidad genética debido a disfunción del telómero por una erosión acelerada de las secuencias teloméricas. La exposición a radiación no incrementó la pérdida de secuencias teloméricas pero amplificó la inestabilidad genética. La expresión del RNA largo no codificante implicado en el mantenimiento de la estructura telomérica (TERRA), se encontró reducida en las células Rb1+/Δ19. Los estudios de transducción y transfección demostraron que los niveles de TERRA variaban según los niveles de Rb1. Posteriormente, el análisis in silico identificó una secuencia promotora de TERRA que se evidenció ligaba la proteína Rb1. Los ensayos ChIP demostraron una unión de Rb1 con el promotor de TERRA y los osteoblastos Rb1+/Δ19 presentaban menores niveles de Rb1 ligados al promotor. Además, se observaron cambios en el patrón de modificaciones de histonas asociadas al telómero, en consonancia con una menor compactación cromatínica. 4 Conclusiones Rb1 ejerce una función oncosupresora contribuyendo a la estabilidad telomérica mediante la regulación de TERRA. Los osteoblastos Rb1+/Δ19 presentan inestabilidad genética debida a una arquitectura telomérica alterada, consecuente con la deficiencia de TERRA. Esta función no canónica de Rb1 contribuye a explicar cómo deficiencias en este gen pueden contribuir a la carcinogénesis. C0019 CARACTERIZACIÓN DE LA PRIMERA MUTACIÓN FUNDADORA EN EL GEN DE LA POLIMERASA DELTA-1 (POLD1) Rosario Ferrer Avargues1, Virginia Díez Obrero2, Ester Martín Tomás3, Eva Hernández Illán4, María Isabel Castillejo2, Alan Codoñer Alejos2, Sergio Larrínaga2, Víctor Manuel Barberá2, Adela Castillejo2, José Luis Soto2 1CSIC Madrid (madrid) españa 2Unidad de Genética Molecular, HGUE (Alicante) España 3Análisis Clínicos. HGUE (Alicante) España 4Unidad de Investigación. Hospital Universitario Alicante (Alicante) España 1 Objetivos Determinar el carácter fundador de la mutación patogénicaenlínea germinal en POLD1 c.1421T>C; p.(Leu474Pro), responsable de un elevado riesgo a cáncer colorrectal (CCR) y otros tumores. 2 Material y Método Se incluyeron 32 individuos procedentes de las 4 familias aparentemente no relacionadas descritas hasta la fecha con la mutación p.(Leu474Pro): 20 portadores heterocigotos y 12 no portadores de la mutación. Además se incluyeron 30 controles sanos (DNAs de sangre) para estudiar la frecuencia alélica en población normal de los marcadores a analizar. Se realizó un análisis de haplotipos utilizando 14 marcadores polimórficos (11 microsatélites y 3 SNPs) abarcando una región de 13,818 Mb circundando el locus POLD1 en 19q13.33. La estimación de la edad de la mutación se llevó a cabo mediante el método de marcador único. 3 Resultados Las cuatro familias con la mutación son originarias de la Comunidad Valenciana. Se identificó un haplotipo mínimo común en estas familias de 2,995 Mb. La frecuencia alélica en controles sanos de este haplotipo fue de 1,25·10-6, confirmando que la mutación p.(Leu474Pro) es la primera mutación fundadora identificadaen POLD1. La edad estimada de aparición de la mutación es de 4 a 28 generaciones (entre 100 y 700 años). A nivel clínico, se diagnosticaron 13 tumores en 10 portadores: 8 CCR, 3 cánceres endometriales, un GIST y un cáncer de mama. La mediana de edad de aparición del cáncer de los portadores fue de 48 años. La penetrancia observada fue del 50% y el riesgo acumulado a los 50 años fue del 30%. 4 Conclusiones La mutación de p.(Leu474Pro) es la primera mutación fundadora identificadaendicho gen. El fenotipo clínico de esta mutación coincide con el del síndrome de Lynch y en consecuencia, las recomendaciones de vigilancia y seguimiento deben ser similares. Sesión: Mecanismos Molecular/ Asensor Genético C0449 ANEMIA DE FANCONI: EVALUACIÓN DEL SEGUIMIENTO MÉDICO Y EL ROL DEL ASESOR GENÉTICO Judith Reina Castillón1, Irene Esteban2, Neus Gadea2, Cristina Díaz de Heredia3, Judith Balmaña2, Estela Carrasco2 1Departamento de Ciencias Experimentales y de la Salud (Universitat Pompeu Fabra). Instituto Hospital del Mar de Investigaciones Médicas (IMIM). Centro de Investigación Biomédica en Red de Enfermedades Raras (CIBERER) Barcelona (Barcelona) España 2Unidad de Alto Riesgo y Prevención del Cáncer. Hospital Vall de Hebrón. (Barcelona) España 3Servicio de Oncología y Hematología Pediátricas. Hospital Vall de Hebrón (Barcelona) España 1 Objetivos La anemia de Fanconi (AF) es una enfermedad genética caracterizada por defectos congénitos, riesgo de fallo de medula osea (MO) y de tumores hematológicos y sólidos requiriendo seguimiento multidisciplinar. Hemos evaluado la calidad y periodicidad de los controles médicos en pacientes AF adultos y el rol del asesor genético en dicha enfermedad. 2 Material y Método La calidad del seguimiento médico fue estudiada mediante la evaluación de la historia clínica de 21 pacientes AF adultos. El conocimiento acerca la enfermedad, su impacto psicológico y la adhesión al seguimiento fueron evaluados con un cuestionario en 50 individuos (pacientes y padres) regularmente atendidospor asesores genéticos o facultativos con funciones similares. 3 Resultados Respecto al seguimiento establecido por la guía española de diagnóstico y manejo de AF, hemos detectado un infraseguimiento a nivel hematológico (p=0.001) y un sobreseguimiento a nivel ginecológico (p=0.002) así como baja frecuencia de visitas al dentista, aspirados de MO, tests de detección del VPH y controles hormonales. La coordinación en el mismo centro de los especialistas, el recibir recordartorios de visitas y concentrar varios controles en un mismo día aumenta la adherencia al seguimiento. La información y el apoyo psicológico proporcionados por los asesores genéticos contribuyen a que pacientes y padres tengan un conociemiento satisfactorio de la enfermedad pero algunos conceptos deberían ser reforzardos. Las madres muestran mayor preocupación por la clínica de la AF y asimilan peor el no saber el diagnóstico molecular. 4 Conclusiones La coordinación de los profesionales y las visitas de estos pacientes permiten que el seguimiento de los adultos AF siga globalmente las recomendaciones de la guía española de diagnóstico y manejo de AF. Se detecta que la frecuencia de los controles hematológicos y ginecológicos difieren un poco de la recomendada. Manteniendo informadas a las familias y proporcionándoles apoyo psicológico, los asesores genéticos contribuyen a un satisfactorio conocimiento de la enfermedad. C0050 RECUPERACIÓN DEL MARCO DE LECTURA MEDIANTE EDICIÓN GÉNICA DEL GEN COL7A1 EN CÉLULAS PRIMARIAS DE PACIENTE DE EBDR Ángeles Mencía Rodríguez1, Cristina Chamorro Poyo2, Blanca Duarte2, Marcela del Río3, Fernando Larcher3, Rodolfo Murillas2 1Departamento de Bioingeniería. UC3M/Fundación Jiménez Díaz (IIS-FJD) de Medicina Regenerativa y Bioingeniería Tisular Madrid (Madrid) España 2División de Biomedicina epitelial. CIEMAT-CIBERER/Fundación Jiménez Díaz (IIS-FJD) de Medicina Regenerativa y Bioingeniería Tisular (Madrid) España 3Departamento de Bioingeniería. UC3M/División de Biomedicina epitelial. CIEMAT-CIBERER/Fundación Jiménez Díaz (IIS-FJD) de Medicina Regenerativa y Bioingeniería Tisular (Madrid) España 1 Objetivos La Epidermolisis bullosa distrófica de herencia autosómica recesiva (EBDR) es una enfermedad rara monogénica asociada a mutaciones en el gen COL7A1. La mutación c.6527insC está localizada en el exón 80 y es muy frecuente en la cohorte de pacientes españoles. Ocasiona la alteración del marco de lectura y la aparición de un codón de parada prematuro. Como consecuencia, los pacientes portadores de esta mutación en homocigosis carecen de la proteína, Colágeno VII, en la región dermoepidérmica. El alto porcentaje de pacientes que presenta esta mutación hace que sea adecuada para diseñar aproximaciones terapéuticas específicas con el fin de corregir esta mutación en el genoma o bien sus efectos sobre el marco de lectura. 2 Material y Método Se diseñaron nucleasas TALE que reconocen secuencias próximas a la mutación c.6527insC. Se utilizaron vectores adenovirales para la transducción de los vectores TALEN y vectores adeno-asociados para la transducción del DNA molde para favorecer la recombinación homóloga. Como primera aproximación, utilizamos una línea inmortalizada de queratinocitos de un paciente portador de la citada mutación en homocigosis, para después trabajar con los queratinocitos primarios de paciente. 3 Resultados Conseguimos corregir el gen COL7A1 mediante recombinación homóloga y recuperar el marco de lectura aprovechando los sistemas de reparación celular que inducen pequeñas indels. La expresión de Colágeno VII se comprobó tanto en células corregidas como en equivalentes de piel trasplantados en ratones inmunodeficientes. Utilizando la misma estrategia, hemos conseguido aislar clones en los que se ha corregido el marco de lectura alterado por la mutación c.6527insC en queratinocitos primarios de paciente y utilizarlos para regenerar piel in vivo. 4 Conclusiones Nuestros resultados sirven como prueba de concepto de que es factible editar el gen COL7A1 de forma dirigida en células primarias de paciente, aislar clones corregidos y utilizarlos para realizar trasplantes en los propios pacientes. C0010 FENOTIPO Y GENOTIPO DE PACIENTES RUBINSTEIN-TAYBI CON MUTACIÓN EN EP300. María López Martínez1, Judith Armstrong2, Inmaculada García-Cobaleda3, Sixto García-Miñaur4, Fernando Santos- Simarro4, Verónica Seidel5, ELENA DOMINGUEZ GARRIDO6 1FUNDACIÓN RIOJA SALUD. EDIFICIO CIBIR (La Rioja) España 2Hospital Sant Joan de Déu (Barcelona) España 3Hospital Universitario NS de Candelaria (Santa Cruz de Tenerife) España 4Instituto de Genética Médica y Molecular (INGEMM)-IdiPAZ, Hospital Universitario La Paz (Madrid) España 5Hospital General Universitario Gregorio Marañón (Madrid) España 6FUNDACIÓN RIOJA SALUD. EDIFICIO CIBIR, UNIDAD DE DIAGNÓSTICO MOLECULAR LOGROÑO (LA RIOJA) ESPAÑA 1 Objetivos El Síndrome de Rubinstein-Taybi (SRT) se caracteriza por pulgares anchos en manos y pies, anomalías faciales, retraso del crecimiento y discapacidad intelectual (DI). Se han descrito mutaciones en los genes CREBBP y EP300. Este trabajo presenta la caracterización clínica y molecular de una cohorte de pacientes con mutaciones en EP300. 2 Material y Método De 60 individuos con sospecha clínica de SRT, se incluyeron en el estudio aquellos que resultaron negativos en el análisis del gen CREBBP. Se realizaron: MLPA, secuenciación mediante panel de EP300 y confirmación mediante secuenciación Sanger. Las variantes obtenidas fueron evaluadas in-silico para valorar su patogenicidad. 3 Resultados Se encontraron mutaciones en EP300 en 8 pacientes. La edad de diagnosis fue (nº de casos): temprana (2), pediátrica (6) o adulta (1, madre). Las características fenotípicas encontradas incluyeron: (DI (8), leve (4/8) y moderada (4/8); retraso en el crecimiento (3); problemas de alimentación infantil (4); retraso psicomotor (2); retraso en el lenguaje (3); autismo (2). Entre las características faciales destacan: microcefalia, fisuras palpebrales descendentes, columela colgante bajo fosas nasales y nariz prominente. Se observaron pulgares anchos en manos/pies en 4 pacientes, angulados sólo en uno de ellos. Las variantes encontradas fueron: 1 deleción de varios exones, 4 frameshift, 1 nonsense, una missense y 1 mutación que altera el splicing. El origen de novo se confirmó en todos los casos excepto en uno (detectado en la madre). 4 Conclusiones Los pacientes SRT-EP300 presentan una capacidad intelectual más conservada y rasgos faciales menos marcados que los SRT-CREBBP. Es difícil establecer una correlación fenotipo-genotipo en estos pacientes; los individuos con mutaciones en EP300 pueden presentar un fenotipo más leve o diferente y hay que tener en cuenta que todos nuestros pacientes han sido diagnosticados clínicamente de SRT. La menor prevalencia de EP300 podría explicarse por un no diagnóstico/diagnóstico incorrecto de estos pacientes. C0341 MECANISMOS MOLECULARES DE LOS REORDENAMIENTOS CROMOSÓMICOS RECÍPROCOS EN 7Q11.23 Raquel Flores Peirats, Roser Corominas Castiñeira, Maria Gabriela Palacios Verdu, Nuria Rivera Brugués, Ivon Cuscó Martí, Luís Alberto Pérez Jurado Universitat Pompeu Fabra (BARCELONA) España 1 Objetivos Los síndromes de Williams-Beuren (SWB) y de microduplicación 7q11.23 (7DUP) son dos trastornos del neurodesarrollo con afectación multisistémica. El SWB está causado por una deleción genómica recurrente en 7q11.23, mientras que la duplicación de esta misma región causa 7DUP. La generación de estos eventos está mediada por recombinación homóloga no-alélica (NAHR) entre duplicaciones segmentarias (DS) de alta homología específicas de la región. 2 Material y Método Hemos caracterizado los reordenamientos de 720 casos con
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