Testes de detecção de biomoléculas

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Professora Yara de Fátima Hamú – Bioquímica – Formação Geral 
 
REAÇÕES BIOQUÍMICAS – AULA PRÁTICA 2 – QUALIFICAÇÃO DE 
BIOMOLÉCULA 
 
1 – Reação de Molisch 
 
Baseia-se na propriedade dos compostos polihidroxialdeídos e polihidroxicetonas 
de sofrerem desidratação com H2SO4 concentrado, produzindo furfurais. As pentoses 
produzem o furfural e as hexoses produzem o hidroximetilfurfural. 
Tanto o furfural quanto o HMF são substâncias incolores, impedindo que a reação 
seja visualizada. Para resolver esse problema, adiciona-se um composto fenólico ao meio 
(alfa-naftol, conhecido como reativo de Molisch). O fenol reage como os produtos 
incolores, e provoca o aparecimento de um anel de coloração lilás. 
 
 
 
O surgimento de um anel de coloração lilás estável indica que houve formação 
de furfurais, revelando a presença de açúcares na amostra. 
 
2 – Reação de Seliwanoff: 
 
UNIVERSIDADE CATÓLICA DE BRASÍLIA – UCB 
PRÓ-REITORIA DE GRADUAÇÃO – PRG 
UNIDADE DE APOIO DIDÁTICO ADMISTRATIVO – UADA 
 
 O princípio do teste de Seliwanoff é basicamente semelhante ao de Molisch, ou 
seja, a desidratação de açúcares com ácidos concentrados produzindo furfurais. No caso do 
teste de Seliwanoff utiliza-se HCl concentrado que, sob aquecimento, desidrata cetoses 
mais rapidamente do que aldoses. A frutose (cetose) dá reação colorida em até 2 minutos 
enquanto que a glicose (aldose) pode demorar de 12 a 15 minutos. 
A reação de Seliwanoff só diferencia-se da reação de Molisch nos reagentes 
utilizados: o ácido que causará a desidratação do carboidrato é o ácido clorídrico (HCl) e o 
fenol que reage como o furfural e HMF é o resorcinol. 
 
 
 
3 – Reação de Lugol 
 
 O teste de lugol é empregado para identificar longas cadeias de polissacarídeos, a 
exemplo da amilose, que contém ligações (1→ 4), e amilopectinas, que contém ligações 
(1→ 4) e (1→ 6). 
 O amido, polissacarídeo de extrema importância em alimentos, é produzido em 
grande quantidade nas folhas dos vegetais como forma de armazenamento dos 
produtos da fotossíntese, e é constituído por dois outros polissacarídeos 
estruturalmente diferentes: amilose e amilopectina (ver figura abaixo). 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 A amilopectina apresenta estrutura ramificada, sendo que os "ramos" aparecem a 
cada 24-30 moléculas de glicose. A ligação entre as unidades de glicose também é do tipo 
alfa 1-4 na mesma cadeia. Porém, unindo duas cadeias aparecem ligações do tipo a 1-6. 
Observe a figura: 
 
 Moléculas de alto peso molecular (como a amilose e a amilopectina) podem 
sofrer reações de complexação, com formação de compostos coloridos. Um exemplo 
importante é a complexação da amilose e da amilopectina com o iodo, resultando em 
complexo azul e vermelho-violáceo, respectivamente. A figura abaixo esquematiza a 
interação do iodo com a estrutura do amido: 
 
 
 Como vimos, o aprisionamento do iodo dá-se no interior da hélice formada pela 
amilose. Como a amilopectina não apresenta estrutura helicoidal, devido à presença 
das ramificações, a interação com o iodo será menor, e a coloração menos intensa. 
 IMPORTANTE - nem todos os polissacarídeos, apesar de serem moléculas 
grandes, dão complexo colorido com o iodo. Isso porque é necessário que a molécula 
apresente uma conformação que propicie o "encaixe" do iodo. A celulose é um 
exemplo de polissacarídeo que não dá reação colorida com o iodo. 
 
 
4 – Reação da ninhidrina 
 
 Esta é uma reação típica para todos os -aminoácidos e baseia-se na 
descarboxilação e desaminação dos aminoácidos pela ninhidrina segundo a reação descrita 
abaixo: 
Quando os aminoácidos são aquecidos em solução contendo excesso de ninidrina, 
todos aqueles que têm grupamento amino livre produzem um composto púrpura, conhecido 
como Púrpura de Rüehmann. Essa reação também pode ser utilizada na detecção de 
peptídios e proteínas que apresentem essa característica. 
Em condições apropriadas, a intensidade da cor produzida é proporcional à concentração 
de espécies (aminoácidos, peptídeos ou proteínas) presentes. 
Observação: Existem dois aminoácidos que são exceções a essa reação: com a prolina 
e hidroxiprolina, que são iminoácidos, a ninhidrina reage formando um composto 
amarelo. 
 
 
 
 
 
 
 
 
5 – Reação do Biureto: 
 
Biureto é o nome dado à estrutura originada a partir da decomposição da uréia, quando essa 
é submetida a uma temperatura de, aproximadamente, 180oC: 
 
 
 Soluções alcalinas que contenham biureto desenvolvem uma coloração violeta, quando em 
presença de sulfato de cobre (CUSO4). Esse fenômeno deve-se à formação de um complexo 
entre o íon Cu2+ e os átomos de nitrogênio presentes na molécula do biureto. O esquema abaixo 
representa um modelo da formação desse complexo: 
Interação biureto / Cu2+ 
 
 
Se fizermos uma boa observação, veremos que as ligações existentes na molécula de biureto 
são muito parecidas com as ligações peptídicas estabelecidas entre os aminoácidos durante a 
formação de peptídeos e, finalmente, das proteínas. 
Observe o esquema abaixo, que representa a interação entre as ligações peptídicas de uma 
proteína ou peptídeo com íons Cu2+: 
 
Interação ligação peptídica / Cu
2+ 
 
6 - Reação de Fehling 
 
 Teste para detecção de açúcares redutores (possuem carbonilas livres que podem ser oxidadas 
até ácido, utilizando-se vários agentes oxidantes com Ag
+
, Cu
++
, Bi
+++
, azul de metileno,etc. 
 Deve-se ressaltar que os dissacarídeos podem ser classificados em redutores (lactose) e 
não-redutores (sacarose) dependendo se a hidroxila anomérica foi ou não envolvida na ligação 
glicosídica. 
 
 
 
Referências bibliográficas: 
www.fcfar.unesp.br/alimentos/.../guia_praticas.htm 
QUIRINO, B.F. (Org.). Técnicas Laboratoriais em Bioquímica. 2a ed. Brasília: Universa, 2006.