Relatório 1 AULA PRÁTICA

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UNIVERSIDADE ESTADUAL DO CEARÁ 
Centro de Ciências da Saúde 
Nutrição – Bacharelado 
Microbiologia Geral 
Professor José Fernando Mourão Cavalcante 
 
 
 
 
 
 
 
RELATÓRIO AULA PRÁTICA 1 
COLORAÇÃO DE GRAM 
 
 
 
 
 
 
 
Equipe: Camila Girão Oliveira Abdala 
 Esmael do Nascimento Gouveia 
 Igor Rodrigues Firmiano Aguiar 
 Vitor Wagner de Sousa Lacerda 
 
 
 
 
 
 
 
Setembro/2018 
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SUMÁRIO 
 
 
 
 
1. INTRODUÇÃO .........................................................................................2 
2. MATERIAL E MÉTODO ...........................................................................3 
3. RESULTADO E DISCUSSÃO ..................................................................4 
FOTOS DAS LÂMINAS ANALISADAS.....................................................5 
4. CONCLUSÃO ..........................................................................................6 
5. REFERÊNCIAS .......................................................................................7 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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INTRODUÇÃO 
 
A coloração de Gram é um procedimento simples que permite a 
identificação e classificação de bactérias devido à composição bioquímica da 
parede celular que difere, podendo ser Gram-positiva ou Gram-negativa. 
Atualmente, é muito utilizada em laboratórios de análises clínicas para o rápido 
diagnostico e escolha do tratamento adequado de patologias e na microbiologia. 
Hans Christian Gram foi médico bacteriologista, farmacologista, professor 
e responsável pelo desenvolvimento do método de Gram, publicado em 1884, o 
que teria sido uma descoberta acidental enquanto ele observava pulmões de 
pacientes mortos por pneumonia nos quais observou que a coloração ficava 
retida principalmente nas bactérias. A partir da microscopia eletrônica e do 
aperfeiçoamento de analises bioquímicas, foi verificado que a diferença entre 
bactérias Gram-positivas e Gram-negativas era devido a composição de suas 
paredes celulares que vai influenciar nas ligações iônicas entre a basicidade do 
corante e a acidez das células e na diferença de permeabilidade da parede ao 
álcool. 
A parede celular de certo grupo de bactérias é fundamentalmente 
composta por uma camada espessa de peptidoglicano, um polímero constituído 
por açucares e aminoácidos, que retém o corante básico Violeta Cristal 
apresentando uma cor roxa, essas bactérias são denominadas Gram-positivas. 
Já bactérias denominadas Gram-negativas pertencem ao grupo no qual a parede 
celular apresenta uma camada fina de peptidoglicano, porém envolta por uma 
membrana externa, essa composta consideravelmente por lipídios que durante 
o tratamento com álcool é retirado e permite a coloração por meio de Fucsina, 
retendo no final do processo apenas a cor rosa. 
Os objetivos da prática ao realizar a coloração de Gram foram aprender o 
fundamento do método, comparar as estruturas das paredes celulares de 
bactérias, permitir a observação e ter mais afinidade com a microscopia e ao 
método de preparação do esfregaço. 
 
 
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MATERIAL E MÉTODO 
 
Inicialmente foi necessário realizar, em uma lâmina, o esfregaço da 
cultura bacteriana com o auxílio de uma alça de inoculação esterilizada, e assim, 
realizar a fixação na chama da Lamparina, tomando os devidos cuidados para 
não torrar o esfregaço. Logo após a fixação da cultura, cobriu-se o esfregaço 
com corante de Violeta de cristal (corante primário), deixando atuar por um 
minuto, corando todas as células no final do tempo cronometrado. Após a 
retirada do excesso de corante, foi necessário lavar a lâmina em preparo, com 
água destilada, e, seca-la com papel de filtro sem esfregá-lo para que o 
movimento mecânico não se danifica a Cultura em estudo. 
Posteriormente a esse processo, adicionou-se à lâmina uma solução de 
lugol, aplicando o mesmo tempo, a mesma lavagem e secagem do corante 
Violeta de cristal. O iodo presente na solução de lugol em reação com o corante 
primário, produziu um complexo insolúvel mais difícil de ser removido das 
células, e também, intensificando a cor Violeta. 
Em seguida, adicionou-se gota a gota de álcool a 95° GL (Gay-Lussac) 
até que não fosse mais possível retirar o corante da lâmina em preparo, e então 
realizar, novamente, a etapa de lavagem e secagem, com água destilada e papel 
de filtro, respectivamente. 
 Logo depois, adicionou-se um corante secundário, uma solução de 
fucsina (cor avermelhada) para que análise de contraste entre as bactérias 
Gram- e Gram + fosse percebida, porém diferente do outro corante, esse 
permaneceu por 5 minutos na amostra sob preparo, lavando-a e secando-a 
como feito anteriormente. 
Por fim, com a lâmina pronta, uma gota de óleo de imersão foi adicionada, 
para que a visualização em microscópio óptico na objetiva de 100x pudesse ser 
feita. 
 
 
 
 
 
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 RESULTADO E DISCUSSÃO 
 
CULTURA 
ANALISADA 
GRAM - 
NEAGATIVA 
GRAM - 
POSITIVA 
FORMATO 
CELULAR 
LN - 29 X COCOS 
LN - 23 X COCOS 
LN - 17 X COCOS 
E. COLI X BACILOS 
LEVEDURAS - - OVOIDE 
 
 
Inicialmente, utilizamos a lente 4X, resultando em uma ampliação de 40X 
da cultura estudada. Constatamos que o material, quando submetido a lente 4X, 
não foi possível distinguir a diferenciação dos microrganismos através das cores. 
No entanto, posteriormente, verificamos a lâmina com a lente 10X, sem o óleo 
de imersão e percebemos que não apresentou o contraste necessário para a 
diferenciação dos microrganismos. Adiante, foi aplicada uma gota do óleo, em 
seguida, foi possível apurar as características da cultura analisada. 
 Conclui-se que o material analisado após ser tratado por tipos diferentes 
de corante adquiriu tonalidades desiguais. Logo, foi possível descobrir que a 
lâmina estudada se tratava de uma bactéria gram-negativa com o formato do tipo 
cocos. Vale ressaltar, que a lâmina (LN-29) compreendida pela equipe desse 
relatório foi colhida na cidade de Limoeiro do Norte. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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RESULTADO E DISCUSSÃO 
Fotos das lâminas analisadas 
 
Lâmina com Bactéria Gram-Negativa 
Fonte: claraealinebioifes 
 
 
 
 
 
 
Lâmina com Bactéria E. Coli 
Fonte: portuguese.alibaba 
 
 
 
 
 
 
 
 
Lâmina com Levedura 
Fonte: bg11e 
 
 
 
 
 
 
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CONCLUSÃO 
 
Conclui-se, que o experimento realizado em sala foi de extrema 
importância, tendo em vista que a técnica é essencial em laboratórios de 
microbiologia e em analises clínicas. Tal técnica possibilita o estudo e a 
classificação das bactérias ligadas às infecções, facilitando e melhorando o 
trabalho clínico. Nesse sentido, é importante ressaltar que para haver a 
diferenciação das bactérias GRAM positivas e GRAM negativas é necessária 
aplicar os métodos criado por Hans Gram. Assim, conclui-se que as bactérias 
coletadas na cidade Limoeiro do Norte, cultura LN-29, são GRAM negativas e 
possuem o formato cocos. Essa análise é extremamente importante, pois é de 
baixo custo, rápida e precisa. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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REFERÊNCIAS 
Ham? Gram? Disponível em: 
<https://claraealinebioifes.wordpress.com/tag/microscopia-optica/>. Acesso em: 
14/09/2018. 
 
Visualização bacteriana e colorações. Disponível em: 
<http://www.repositorio.ufc.br/bitstream/riufc/16672/1/2015_liv_jlbmoreira.pdf>.Acesso em: 14/09/2018. 
 
Coloração de Gram. Disponível em: 
<https://www.portalsaofrancisco.com.br/biologia/coloracao-de-gram/>. Acesso 
em: 14/09/2018. 
 
Gram, Hans Christian. Disponível em: 
<http://knoow.net/ciencterravida/biologia/gram-hans-christian/>. Acesso em: 
14/09/2018. 
 
Coloração de Gram – O que é bactéria Gram-positiva e Gram-negativa? 
Disponível em: <https://kasvi.com.br/bacteria-gram-positiva-gram-negativa/>. 
Acesso em: 14/09/2018. 
 
Reprodução Assexuada (bolor e leveduras) 
Disponível em: < http://bg11e.blogspot.com/2009/12/reproducao-sexuada-nas-
plantas.html 
Acesso em: 14/09/2018. 
 
Indivíduo Escherichia Coli lâminas de microbiologia preparado microscópio de 
vidro Mancha 
Acesso em: 14/09/2018. 
 
Disponível em: < https://portuguese.alibaba.com/product-detail/individual-
escherichia-coli-smear-prepared-glass-microscope-microbiology-slides-
60498027718.html 
Acesso em: 14/09/2018.